本發明專利技術屬于藥物質量測定方法技術領域，尤其涉及一種利用高效液相色譜儀檢測非那雄胺中異構體雜質的方法。針對現有技術中對非那雄胺中異構體雜質的檢測方法存在的缺陷，本發明專利技術的技術方案為：分別通過高效液相色譜法對混合對照品溶液和供試品溶液進行測試，通過混合對照品溶液和供試品溶液的色譜圖中各雜質峰的峰面積計算供試品溶液中各雜質的含量。所述稀釋劑為甲醇?水混合溶液；所述流動相包括流動相A及流動相B，所述流動相A為磷酸鹽緩沖液，所述流動相B為甲醇。本發明專利技術中的檢測方法能夠在反相色譜條件下，檢測非那雄胺中的異構體雜質，且不被其余已知雜質干擾，保障產品的品質，操作簡單，時間快，精確度高，數據穩定。
【技術實現步驟摘要】
一種利用高效液相色譜儀檢測非那雄胺中異構體雜質的方法
本專利技術屬于藥物質量測定方法
，尤其涉及一種利用高效液相色譜儀檢測非那雄胺中異構體雜質的方法。
技術介紹
非那雄胺(Finasteride)作為競爭性Ⅱ型5α還原酶抑制劑，對良性前列腺增生和雄激素脫發的治療作用可靠，且安全性和耐受性良好；在減少前列腺手術出血和預防前列腺癌方面有良好的應用前景，對前列腺微血管和細胞凋亡的作用研究，為其應用提供了重要理論依據，非那雄胺不僅能有效地治療BPH，而且能減低前列腺癌的發病率，減少發生前列癌的風險；還能治療男性雄激素性脫發(AGA)。其化學名稱為N-叔丁基-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-甲酰胺；化學式結構如下：與本品結構相似的化合物度他雄胺、黃體酮在堿性條件下不穩定，可生成17位差向異構體雜質，現有EP方法能控制已知雜質，即下表所示的雜質A、雜質B和雜質C。但是，現有EP方法無法控制異構體雜質。在本化合物的產品中，主要包含的異構體雜質為：17α非那雄胺異構體、5β非那雄胺異構體和5β雜質A異構體。若不在生產和質量控制過程中對異構體雜質進行檢測，可能會導致異構體雜質不受控，或給療效上帶來新的問題。這些異構體雜質影響產品總雜質量，影響臨床運用，給臨床帶來安全隱患。因此，需要一種能夠準確監控異構體雜質含量的方法，保障非那雄胺產品的品質。目前有人用高效液相色譜法監控非那雄胺雜質A、B、C，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。傳統標準中的方法沒有提供控制非那雄胺異構體雜質的色譜監控方法，而其他文獻報道的也有缺陷，無法滿足對產品的高品質要求。
技術實現思路
針對現有技術中對非那雄胺產品中的異構體雜質的檢測存在缺陷的技術問題，本專利技術提供一種利用高效液相色譜儀檢測非那雄胺中異構體雜質的方法，以保障非那雄胺產品的品質。該方法操作簡單，時間快，精確度高，數據穩定。一種利用高效液相色譜儀檢測非那雄胺中異構體雜質的方法,其特征在于,包括如下步驟：(1)配制混合對照品溶液：取非那雄胺及雜質對照品，用稀釋劑配制成包含非那雄胺及雜質的混合對照品溶液；所述雜質包括17α非那雄胺異構體、5β非那雄胺異構體或5β雜質A異構體中的至少一種；所述稀釋劑為甲醇-水混合溶液；(2)配制供試品溶液：取供試品，用稀釋劑配制成供試品溶液；(3)分別通過高效液相色譜法對混合對照品溶液和供試品溶液進行測試，通過混合對照品溶液和供試品溶液的色譜圖中各雜質峰檢測雜質的存在；所述高效液相色譜的色譜條件為：流動相包括流動相A及流動相B，所述流動相A為磷酸鹽緩沖液，所述流動相B為甲醇；色譜柱的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠填料。優選的，步驟(3)中，通過混合對照品溶液和供試品溶液的色譜圖中各雜質峰的峰面積計算供試品溶液中各雜質的含量。優選的，步驟(3)中，高效液相色譜法的色譜條件為：色譜柱為C18柱，柱溫29-31℃，流速為0.55-0.65ml/min，檢測波長為208-212nm，流動相pH值為2.8-3.2，進樣量為30-50μl；進一步優選的，所述步驟(3)中，高效液相色譜法的色譜條件為：色譜柱為AgilentInfinityLabPoroshell120EC-C18，柱溫30℃，流速為0.6ml/min，檢測波長為210nm，流動相pH值為3.0，進樣量為40μl。優選的，步驟(3)中，高效液相色譜法中，流動相洗脫比例為磷酸鹽緩沖液與甲醇體積比為44:56-46:54。優選的，步驟(3)中，磷酸鹽緩沖液的配制方法為，將磷酸二氫鉀配制成0.01mol/L的溶液，然后用磷酸調節pH值至3.0。優選的，步驟(1)中，混合對照品溶液中各組分的濃度為：非那雄胺0.8-1.5mg/ml，17α非那雄胺異構體、5β非那雄胺異構體和/或5β雜質A異構體各0.8-1.5μg/ml。優選的，雜質還包括已知雜質，所述已知雜質包括雜質A、雜質B和雜質C；所述雜質A如結構式Ⅰ所示：所述雜質B如結構式Ⅱ所示：所述雜質C如結構式Ⅲ所示：進一步優選的，步驟(1)中，混合對照品溶液中已知雜質的濃度為：雜質A、雜質B和雜質C各2-4μg/ml。優選的，步驟(2)中，稀釋劑由甲醇與水按體積比60:40混合而成。優選的，步驟(3)中對混合對照品溶液和供試品溶液進行測試前，先用系統適用性溶液進行預檢測，以確定合格的色譜條件，所述系統適用性溶液由非那雄胺及各雜質對照品配制而成，所述合格的色譜條件滿足：雜質與雜質之間分離度大于1.5，以及雜質與主成分之間分離度大于1.5；且連續測定5次混合對照品溶液，各異構體雜質峰峰面積RSD值≤2.0％。在非那雄胺產品中，可能的異構體雜質主要是17α非那雄胺異構體、5β非那雄胺異構體和5β雜質A異構體，這些異構體雜質之間以及它們與產品主要成分非那雄胺之間的結構差異和極性差異小，難以分離。因而，如何在不被其他已知雜質干擾的情況下分別檢測這幾種雜質存在一定的技術困難。本申請的技術方案及優化方案中所采用的色譜條件根據非那雄胺主成分性質及各異構體雜質性質、分離情況來確定。最終確定的色譜條件能夠達到很好的分離效果，使得雜質與雜質之間分離度大于1.5，以及雜質與主成分之間分離度大于1.5；且連續測定5次混合對照品溶液，各異構體雜質峰峰面積RSD值≤2.0％。從而能夠監控非那雄胺中的異構體雜質，為非那雄胺原料質量控制提供可行的檢測方法。顯然，根據本專利技術的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本專利技術上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實施例形式的具體實施方式，對本專利技術的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本專利技術上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本專利技術上述內容所實現的技術均屬于本專利技術的范圍。附圖說明圖1為專利技術中較優條件下對各雜質進行定位的圖譜。具體實施方式以下通過實例對本專利技術作進一步的說明：本申請所適用產品為非那雄胺，化學名稱為N-叔丁基-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-甲酰胺。主要的檢測對象為17α非那雄胺異構體(17αFTD)、5β非那雄胺異構體(5βFTD)和5β雜質A異構體(5β雜質A)。實施例所用儀器、設備和試劑：高效液相色譜儀：Aglient1260。色譜柱：AgilentInfinityLabPoroshell120EC-C18，4.6mm×150mm，4μm。試劑：甲醇(Fisher；批號178513；色譜純)；磷酸二氫鉀(CNW；批號33420100；色譜純)；超純水。電子天平：M本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種利用高效液相色譜儀檢測非那雄胺中異構體雜質的方法,其特征在于,包括如下步驟：/n(1)配制混合對照品溶液：取非那雄胺及雜質對照品，用稀釋劑配制成包含非那雄胺及雜質的混合對照品溶液；所述雜質包括17α非那雄胺異構體、5β非那雄胺異構體或5β雜質A異構體中的至少一種；所述稀釋劑為甲醇-水混合溶液；/n(2)配制供試品溶液：取供試品，用稀釋劑配制成供試品溶液；/n(3)分別通過高效液相色譜法對混合對照品溶液和供試品溶液進行測試，通過比較混合對照品溶液和供試品溶液的色譜圖判斷供試品中是否存在雜質；/n所述高效液相色譜的色譜條件為：流動相包括流動相A及流動相B，所述流動相A為磷酸鹽緩沖液，所述流動相B為甲醇；色譜柱的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠填料。/n
【技術特征摘要】
1.一種利用高效液相色譜儀檢測非那雄胺中異構體雜質的方法,其特征在于,包括如下步驟：
(1)配制混合對照品溶液：取非那雄胺及雜質對照品，用稀釋劑配制成包含非那雄胺及雜質的混合對照品溶液；所述雜質包括17α非那雄胺異構體、5β非那雄胺異構體或5β雜質A異構體中的至少一種；所述稀釋劑為甲醇-水混合溶液；
(2)配制供試品溶液：取供試品，用稀釋劑配制成供試品溶液；
(3)分別通過高效液相色譜法對混合對照品溶液和供試品溶液進行測試，通過比較混合對照品溶液和供試品溶液的色譜圖判斷供試品中是否存在雜質；
所述高效液相色譜的色譜條件為：流動相包括流動相A及流動相B，所述流動相A為磷酸鹽緩沖液，所述流動相B為甲醇；色譜柱的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠填料。
2.按照權利要求1所述的的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，通過混合對照品溶液和供試品溶液的色譜圖中各雜質峰的峰面積計算供試品溶液中各雜質的含量。
3.按照權利要求1所述的的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，高效液相色譜法的色譜條件為：色譜柱為C18柱，柱溫29-31℃，流速為0.55-0.65ml/min，檢測波長為208-212nm，流動相pH值為2.8-3.2，進樣量為30-50μl；
優選的，所述步驟(3)中，高效液相色譜法的色譜條件為：色譜柱為AgilentInfinityLabPoroshell120EC-C18，柱溫30℃，流速為0.6ml/min，檢測波長為210nm，流動相pH值為3.0，進樣量為40μl。
4.按照權利要求1所述的一種利用高效液相色譜儀檢測非那雄胺中異構體雜質的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，高效液相色譜法中，流動相洗脫比例為磷酸鹽緩沖液與甲醇體積比為44:56-46:54。
5.按照權利要求1所述的一種利用高效...
【專利技術屬性】
技術研發人員：余永秀，李鳳，龍明菊，
申請(專利權)人：揚子江藥業集團四川海蓉藥業有限公司，四川海匯藥業有限公司，
類型：發明
國別省市：四川;51
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