一種檢測胰島細胞抗體的方法技術

本發明專利技術涉及一種檢測胰島細胞抗體的方法，它是采用豬的胰腺切片做抗原，檢測人的胰島細胞抗體，來預測、診斷和鑒別胰島素依賴型糖尿病，為臨床大夫提供重要依據。本發明專利技術方法由于豬胰腺來源廣泛，價格低廉，而為廣泛性進行ＩＣＡ的檢測開辟了一條新的途徑。（*該技術在2017年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及。糖尿病是一種嚴重危害人民健康的常見、多發的內分泌代謝病。糖尿病發生率日益增多，據報告目前全世界糖尿病人數高達6000萬人，另外，還有很多患者未被發現，估計約有1.2億以上的糖尿病患者。在我國，目前估計有糖尿病患者1500-2000萬人。隨著我國改革開放，國民經濟的繁榮昌盛，人的壽命在不斷延長，人口老齡化日趨顯著，此病勢必將進一步增多。更為嚴重的是糖尿病的慢性并發癥，如視力障礙、晚期腎臟病、動脈粥樣硬化、糖尿病酮癥酸中毒等等，不僅病人家庭和社會要為之耗費大量的醫療費用，也是造成很多此類病人致殘致死的原因，給國家和社會帶來了巨大的壓力和沖擊。糖尿病臨床過程多種多樣，使臨床分型有時變得十分困難。目前已知胰島細胞抗體(ICA)是檢測胰島素依賴型糖尿病(insulin-dependentdiabetes mellitus IDDM)的重要免疫學指標之一。自Bottazzo等在1974年應用間接免疫熒光法，首次發現胰島素依賴型糖尿病患者血清中有胰島細胞抗體(ICA)之后，各國學者又對之進行了不同程度的改進。但因免疫熒光法熒光易猝滅，背景中非特異性熒光較多，常導致結果判定困難，后來，又有學者將免疫酶標技術用于ICA的檢測中，如ABC法、PAP法、POPA法等。因這些方法敏感性高，特異性強，大大推動了ICA測定的實際應用。但是，由于血型抗體的干擾，常規的ICA測定均需用“O”型血人正常胰腺做抗原。因人胰腺來源十分困難，“O”型血人胰腺來源則更難，所以，目前ICA的檢測一直未能成為糖尿病診斷中的常規檢測指標。本專利技術目的在于改進現有技術之缺點，而拓寬抗原來源提供一種采用豬的胰腺切片做抗原，檢測人的胰島細胞抗體，來予測、診斷和鑒別胰島素依賴型糖尿病，為臨床大夫提供重要依據。本專利技術目的是這樣測定并實現的，取10頭健康豬的胰腺切片作抗原；用“O”型血正常人胰腺做抗原測定的ICA及谷氨酸脫氫酶(GAD，由澳大利亞國際糖尿病研究所測定)抗體測定均為陽性并已確診為IDDM患者的血清20份；非糖尿病患者陰性血清10份；同時設陰性對照切片(用磷酸緩沖液PBS代替血清)。經過多次重復實驗，用“O”型血正常人胰腺和健康豬胰腺切片檢測ICA，20例IDDM均為陽性，10例非糖尿病患者和陰性對照組均為陰性。因此我們認為用豬胰腺切片替代“O”型血正常人胰腺切片檢測胰島素依賴型糖尿病患者血清中的ICA是可行的。具體步驟為，取豬的新鮮胰腺組織置于Bouin｀s液中，在1℃-6℃的條件下放置40-56小時，然后脫水，浸蠟、石蠟包埋，制成1-8μ厚的切片。本專利技術方法由于豬胰腺來源廣泛，價格低廉，而為廣泛性進行ICA的檢測開辟了一條新的途徑。下面引用實施例對本專利技術方法詳述如下。附圖說明圖1為人胰腺胰島細胞陽性照片圖2為豬胰腺胰島細胞陽性照片圖3為豬胰腺胰島細胞陰性照片實施例1、取健康豬之新鮮胰腺組織，固定于Bouin｀s液中，在4℃冰箱固定48小時，常規脫水、浸蠟、石蠟包埋，制成5μ厚的切片；2、取待查患者血清；3、POPA法檢測ICA(1)石蠟切片常規脫蠟，流水沖洗；(2)0.01M PBS PH7.4洗5｀×3次；(3)分別滴加各稀釋度的血清濕盒內，置室溫60｀或4℃過液；(4)PBS洗5｀×3次；(5)滴加POPA液30｀；(6)PBS洗5｀×3次；(7)0.05M Tris-Hcl buffer液洗5｀×2次；(8)0.025％3｀3-2氨基聯苯胺液顯色1｀-5｀；(9)封片觀察；(10)結果如IDDM患者血清滴加豬胰腺切片或“O”型血正常人胰腺切片，胰島細胞漿內均有清晰的棕黃色陽性顆粒沉著，背影淺淡清晰，如圖1、圖2所示(見附件照片1、2)；如滴加非糖尿病患者的血清，其豬胰腺切片胰島細胞均未著染如圖3所示(見附見照片3)，和陰性對照組的人胰腺切片一樣，呈陰性反應。權利要求1.，其特征在于采用豬的胰腺切片做抗原。2.根據權利要求1所述的，其特征在于取豬的新鮮胰腺組織置于Bouin｀s液中，在1℃-6℃的條件下放置40-56小時，然后脫水，浸蠟、石蠟包埋，制成1-8μ厚的切片。全文摘要本專利技術涉及,它是采用豬的胰腺切片做抗原,檢測人的胰島細胞抗體,來預測、診斷和鑒別胰島素依賴型糖尿病,為臨床大夫提供重要依據。本專利技術方法由于豬胰腺來源廣泛,價格低廉,而為廣泛性進行ICA的檢測開辟了一條新的途徑。文檔編號G01N33/53GK1193110SQ97100668公開日1998年9月16日 申請日期1997年3月11日 優先權日1997年3月11日專利技術者潘琳, 李光偉, 彭俊云, 李茜 申請人:中日友好醫院本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種檢測胰島細胞抗體的方法，其特征在于：采用豬的胰腺切片做抗原。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：潘琳，李光偉，彭俊云，李茜，
申請(專利權)人：中日友好醫院，
類型：發明
國別省市：11[中國|北京]