動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒及其檢測方法技術

本發明專利技術提供了一種動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒及其檢測方法，涉及農產品檢測分析技術領域。本試劑盒包括盒體，該試劑盒還包括生物素化用該試劑盒檢測的動物源性食品獸藥殘留物所對應的抗原或抗體及包被有相對應的單克隆抗體的預包被板或酶標板和親和素酶標記物。本動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒的檢測方法是通過加入酶標記的親和素，形成抗體－生物化抗原－親和素的復合物，然后ＴＭＢ底物顯色。樣本的吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負相關，與標準曲線比較，即可得出相應殘留物鏈霉素的含量。本發明專利技術不僅適用范圍較廣，而且還具有快速、簡便、準確、抗干擾性強和靈敏度高的特點。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及農產品檢測分析
中。
技術介紹
我國是農產品生產和消費大國，其中動物源性食品占有農產品的很大一部分比例，動物源性食品獸藥殘留物的檢測直接關系到居民食品消費安全。例如獸藥殘留物中的鏈霉素(streptomycin)是氨基糖甙類抗生素，是由二個或三個氨基糖分子和非糖部分的苷元通過氧橋連接而成，鏈霉素具有強大的抗革蘭氏陰性菌的作用，所以被廣泛應用于動物疾病的治療。但是鏈霉素具有很多方面的毒性，一可以損害內耳柯蒂器內、外毛細胞的糖代謝和能量利用，導致內耳毛細胞膜上鉀、鈉離子泵發生障礙，而使毛細胞功能受損害導致耳毒性；二由于鏈霉素經腎排泄和在腎皮質內蓄積而導致腎毒性；三鏈霉素還可以與突觸前膜鈣結合部位結合，阻止鈣離子參與乙酰膽堿的釋放所造成的神經毒性。其具有耳毒性、神經毒性和腎臟毒性。又如獸藥中的氯霉素是一種廣譜抗生素，具有良好的抗菌和藥理特性，被廣泛應用于各類家禽、家畜、水生動物(魚、蝦等)及蜜蜂等的各種傳染病的防治。但是氯霉素對人有嚴重的副作用，可導致再生障礙性貧血；諸如此類的獸藥在食品中的殘留會影響人類健康，歐美日等國家及我國均要求限量使用；但是由于此類獸藥價格比較便宜，治療效果較好，經濟回報高，違法使用仍很普遍。因此加強對動物源性食品的檢測是非常必要的。目前，主要采用儀器分析法檢測鏈霉素的殘留量，如薄層電泳法(TLC)、高壓液相色譜法(HPLC)、氣—質聯機(GC/MS)、液—質聯機(HPLC/MS)、毛細管電泳(CE)等。由于復雜的儀器設備和繁瑣的過程，不適合現場監控和大量樣本篩選，其中ELISA檢測方法是一種新型的作為動物源性食品中鏈霉素殘留檢測篩選方法已被使用，如中國專利申請(03206171.4)鏈霉素ELISA檢測試劑盒，該專利申請由96孔聚苯乙烯酶聯板、40ml濃縮洗滌液、11ml過氧化物酶標記物、6ml鏈霉素抗體、6ml顯色液A液、6ml顯色液B液、6ml終止液、6瓶不同濃度的標準液和蓋板膜構成。采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物鏈霉素將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗鏈霉素抗體，加入酶標二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物鏈霉素的含量。該方法與儀器分析技術相比雖然具有快速、簡便、的特點，但是它采用的是二抗酶技術和間接競爭免疫檢測方法，其中在二抗酶技術中，二抗一酶與一抗結合反應，位點交叉問題，易引起非特異性結合，導致結合偏差致使靈敏度較差、而間接競爭免疫檢測方法穩定性較差、抗干擾能力較弱。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種；在本專利技術中采用抗原和抗體的直接競爭免疫反應以及采用生物素—親和素放大反應系統；特異性較強，靈敏度較高，穩定性較好，抗干擾能力較強。本專利技術所述的上述技術問題是通過以下技術方案得以實現的一種動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒，包括盒體，其特征在于，該試劑盒還包括生物素化用該試劑盒檢測的動物源性食品獸藥殘留物所對應的抗原或抗體及包被有相對應的單克隆抗體的預包被板或酶標板和親和素酶標記物。其中所述的單克隆抗體通常為鼠源抗體，生物素是一種維生素H，親和素是一種存在于卵清中的堿性糖蛋白，一個親和素分子可與4個生物素分子穩定結合。親和素與生物素可與蛋白質(包括抗原、抗體、酶等)分子結合而不影響親和素與生物素的生物活性，是理想的標記劑。一個抗原分子可偶聯數十個生物素和親和素分子，而親和素或生物素分子又可與酶結合，從而組成一個分子放大系統，顯著提高檢測的靈敏度。在上述的動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒中，所述的親和素標記酶親和素標記的辣根過氧化氫酶。為了更方便現場監控和大量樣本篩查，在動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒中，所述的試劑盒還包括動物源性食品獸藥殘留物的標準溶液、生物素化抗原稀釋液、顯色劑、終止液、濃縮洗滌液。在上述的動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒中，所述的生物素化抗原稀釋液為含聚乙二醇2萬的磷酸鹽緩沖液。在上述的動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒中，所述的顯色劑由顯色劑A和顯色劑B組成，所述的顯色劑A為含無水乙醇、過氧化脲的檸檬酸鹽緩沖液，所述的顯色劑B為含四甲基聯苯胺檸檬酸鹽緩沖液。在上述的動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒中，所述的終止液為2M H2SO4。在上述的動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒中，所述的濃縮洗滌液為1％吐溫的磷酸鹽緩沖液。一種動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒的檢測方法包括以下步驟 1、在預包被板上或稱微孔條上預包被用該試劑盒檢測的一種動物源性食品獸藥殘留物所對應的單克隆抗體；2、相對應動物源性食品獸藥殘留物的標準品或樣本中的殘留物及相對應的生物素化抗原，二者與抗體競爭反應，形成抗體—生物素化抗原復合物；3、加入酶標記的親和素，形成抗體—生物化抗原—親和素的復合物；4、TMB底物顯色。樣本的吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負相關，與標準曲線比較，即可得出相應殘留物鏈霉素的含量。本專利技術具有以下優點1、適用范圍較廣適用于水產品、蜂蜜、飼料、牛奶及制品、動物尿液、肌肉、組織等各種動物源性食品獸藥殘留物殘留量的檢測。2、本專利技術與儀器分析方法相比較具有快速、簡便、準確、抗干擾性強和靈敏度高等特點，操作時間僅須1.5小時，檢測下限達到0.05ppb以下，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。3、本專利技術采用獨特的生物素—親和素放大系統，具有比傳統的二抗酶技術方法更加靈敏、更加穩定、抗干擾性強的特點。若用于蜂蜜加工廠原料驗收時的快速篩選檢測，可將蜂蜜直接稀釋后檢測，節省大量的樣本前處理時間和費用。附圖說明圖1為本專利技術的動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒的結構示意圖。圖2是本動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒中96孔鏈霉素單克隆抗體預包被板的結構示意圖。具體實施例方式以下接合實施例對本專利技術作進一步的描述，但本專利技術并不限于這些實施例一、鏈霉素殘留物檢測試劑盒及其檢測方法實施例1生物素化鏈霉素抗原及鏈霉素單克隆抗體的制備(1)生物素化鏈霉素抗原的合成抗原(抗體)在堿性(碳緩PH9.6)條件下透析八小時以上，再加入活化生物素與之合成反應，最后在中性(一般磷酸鹽緩沖液PH7.5)透析，除去多余的活化生物素。(2)鏈霉素單克隆抗體制備免疫小鼠二周以上，取小鼠脾臟細胞與骨髓瘤細胞融合，進行細胞株克隆篩選，挑選出最佳分泌抗體的細胞株。以上單抗克隆抗體細胞株、注入小鼠腹腔即可獲得單克隆抗體腹水。此細胞株不用時凍存，用時進行復蘇、培養。所用單抗都需要經過鹽析、分子篩以及親合層析進行純化提取。實施例2(1)鏈霉素殘留物檢測試劑盒的結構試劑盒的結構如圖1和圖2所示，主要有盒體1、96孔鏈霉素單克隆抗體預包被板2、6瓶鏈霉素系列濃度標準品3、生物素化鏈霉素抗原工作液4、生物素化抗原稀釋液5、親和素酶標記物工作液6、底物顯色劑A液7、底物顯色劑B液8、終止液9、濃縮洗滌液10和泡沫托架，泡沫托架上設有凹孔，上述3-10安放在泡沫托架的凹孔內，泡沫托架及包被板2安放在盒體1內，其中96孔鏈霉素單克隆抗體預包被板2由微孔條組成。(2)所用試劑的配制a.鏈霉素標準溶液鏈霉素系列標準溶液6瓶，1～3ml/瓶 b.生物素化鏈霉素抗原工作液，50％的甘油溶液；C.生物素化抗原稀釋液本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種動物源性食品獸藥殘留物檢測試劑盒，包括盒體，其特征在于，該試劑盒還包括生物素化用該試劑盒檢測的動物源性食品獸藥殘留物所對應的抗原或抗體及包被有相對應的單克隆抗體的預包被板或酶標板和親和素酶標記物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王華全，劉建中，林榮業，
申請(專利權)人：臺州金芯生物工程有限公司，
類型：發明
國別省市：33[中國|浙江]