【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】修飾后諾如病毒VP1蛋白和包含修飾后諾如病毒VP1蛋白的VLP
本專利技術涉及修飾后諾如病毒(norovirus)VP1蛋白、包含修飾后諾如病毒VP1蛋白的VLP以及其產生方法。
技術介紹
由諾如病毒感染造成的全球疾病負擔較重，估計與全世界所有腹瀉病例的20％相關并且每年死亡人數超過20萬人。諾如病毒是北美洲食源性疾病爆發的主要原因，也是老年人當中大部分醫院獲得性爆發的病原體。諾如病毒株還被認為是全球小兒胃腸道疾病的主要原因。諾如病毒包括杯狀病毒科(Caliciviridae)的多個屬之一。人類諾如病毒基因組是編碼三個開放閱讀框(ORF)并由VPg蛋白在其5’端封端的單鏈正義RNA分子。ORF1編碼六種非結構性病毒蛋白，包含VPg、RNA依賴性RNA聚合酶和病毒蛋白酶。ORF2編碼主要結構性衣殼蛋白(VP1)。ORF3編碼次要衣殼蛋白(VP2)。VP1包括2個結構域：殼體(S)結構域和突起(P)結構域(protrudingdomain)。例如GI.1毒株的S結構域包括前225個N端氨基酸并且含有衣殼組裝以及病毒二十面體的形成所需的結構要素。P結構域包括VP1蛋白的剩余部分且進一步包括P1亞結構域和P2亞結構域。P2亞結構域被稱為高變結構域并且被認為在受體結合和免疫反應性方面起到重要作用。VP1蛋白通過P結構域介導的蛋白質相互作用形成二聚體。二聚化增加病毒粒子衣殼的穩定性并且使得形成由S結構域形成的諾如病毒顆粒的堿基核心延伸的突起。在表達時，諾如病毒VP1蛋白可自動組裝以形成2個病毒粒子...
【技術保護點】
1.一種重組多核苷酸，包括編碼諾如病毒VP1的核苷酸序列，所述諾如病毒VP1包括：/n在選自與諾如病毒VP1基因型GI.1(SEQ ID NO：1)的氨基酸43、57、84和94序列比對的氨基酸的一位置處的一個或多于一個取代，/n與諾如病毒VP1基因型GI.1(SEQ ID NO：1)的氨基酸39至46序列比對的肽片段的缺失，/n與諾如病毒VP1基因型GI.1序列比對的被修飾成序列SSTAVATA的氨基酸39至46，或/n其組合，且/n所述核苷酸序列不是源于基因型GI.1諾如病毒VP1。/n
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】20171130 US 62/593,006;20180731 US 62/712,7441.一種重組多核苷酸，包括編碼諾如病毒VP1的核苷酸序列，所述諾如病毒VP1包括：
在選自與諾如病毒VP1基因型GI.1(SEQIDNO：1)的氨基酸43、57、84和94序列比對的氨基酸的一位置處的一個或多于一個取代，
與諾如病毒VP1基因型GI.1(SEQIDNO：1)的氨基酸39至46序列比對的肽片段的缺失，
與諾如病毒VP1基因型GI.1序列比對的被修飾成序列SSTAVATA的氨基酸39至46，或
其組合，且
所述核苷酸序列不是源于基因型GI.1諾如病毒VP1。
2.根據權利要求1所述的重組多核苷酸，其中所述核苷酸序列源于選自由以下組成的組的諾如病毒VP1：GI.3、GI.5、GI.7、GII.2、GII.3、GII.4、GII.6、GII.12和GII.17。
3.根據權利要求1所述的重組多核苷酸，其中在與氨基酸43序列比對的所述位置處的所述一個或多余一個取代是取代為纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸或組氨酸。
4.根據權利要求1所述的重組多核苷酸，其中在與氨基酸57序列比對的所述位置處的所述一個或多于一個取代是取代為異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸、丙氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸或組氨酸。
5.根據權利要求1所述的重組多核苷酸，其中在與氨基酸84序列比對的所述位置處的所述一個或多于一個取代是取代為絲氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、賴氨酸或組氨酸。
6.根據權利要求1所述的重組多核苷酸，其中在與氨基酸94序列比對的所述位置處的所述一個或多于一個取代是取代為亮氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、組氨酸。
7.根據權利要求1所述的重組多核苷酸，其中針對人類密碼子使用、增大GC含量或其組合優化所述核苷酸序列的密碼子使用。
8.根據權利要求1所述的重組多核苷酸，其中所述多核苷酸包括載體。
9.一種諾如病毒VP1蛋白，其由如權利要求1至8中任一項所述的重組多核苷酸所編碼。
10.一種病毒樣顆粒(VLP)，包括如權利要求9所述的諾如病毒VP1。
11.根據權利要求10所述的VLP，進一步包括諾如病毒VP2蛋白。
12.一種由植物、植物的部分或植物細胞產生諾如病毒VP1蛋白的方法，包括：
引入如權利要求1至8中任一項所述的重組多核苷酸；和
在允許表達所述諾如病毒VP1蛋白的條件下培育所述植物、所述植物的部分或所述植物細胞。
13.根據權利要求12所述的方法，其中所述方法進一步包括收獲所述植物、所述植物的部分或所述植物細胞的步驟。
14.根據權利要求13所述的方法，其中所述方法進一步包括從所述植物、所述植物的所述部分或所述植物細胞浸提、純化或浸提并純化所述諾如病毒VP1蛋白的步驟。
15.一種諾如病毒VP1蛋白，其通過如權利要求13或14所述的方法產生。
16.根據權利要求12所述的方法，其中在所述引入步驟中，將編碼諾如病毒VP2蛋白的第二多核苷酸引入到所述植物、所述植物的所述部分或所述植物細胞中，且在所述培育步驟中，所述條件允許在所述植物、所述植物的部分或所述植物細胞中共表達并共產生所述諾如病毒VP1蛋白和所述諾如病毒VP2蛋白兩者。
17.根據權利要求16所述的方法，其中所述方法進一步包括收獲所述植物、所述植物的所述部分或所述植物細胞的步驟。
18.根據權利要求17所述的方法，其中所述方法進一步包括浸提、純化或浸提并純化所述諾如病毒VP1蛋白和諾如病毒VP2蛋白的步驟。
19.一種在植物、植物的部分或植物細胞中產生諾如病毒樣顆粒(VLP)的方法，包括：
引入如權利要求1至8中任一項所述的重組多核苷酸；和
在允許表達所述諾如病毒VLP的條件下培育所述植物、所述植物的部分或所述植物細胞。
20.根據權利要求19所述的方法，其中所述方法進一步包括收獲所述植物、所述植物的部分或所述植物細胞的步驟。
21.根據權利要求20所述的方法，其中所述方法進一步包括從所述植物、所述植物的所述部分或所述植物細胞浸提、純化或浸提并純化所述諾如病毒VLP的步驟。
22.一種諾如VLP，其通過如權利要求21所述的方法產生。
23.根據權利要求19所述的方法，其中在所述引入步驟中，將編碼諾如病毒VP2蛋白的第二多核苷酸引入到所述植物、所述植物的所述部分或所述植物細胞中，且在所述培育步驟中，所述條件允許在所述植物、所述植物的部分或所述植物細胞中共表達并共產生所述諾如病毒VP1蛋白和所述諾如病毒VP2蛋白兩者。
24.根據權利要求23所述的方法，其中所述方法進一步包括收獲所述植物、所述植物的所述部分或所述植物細胞的步驟。
25.根據權利要求24所述的方法，其中所述方法進一步包括從所述植物、所述植物的所述部分或所述植物細胞浸提、純化或浸提并純化病毒樣顆粒(VLP)的步驟，其中所述VLP包括所述諾如病毒VP1蛋白和所述諾如病毒VP2蛋白。
26.一種病毒樣顆粒(VLP)，包括通過如權利要求25所述的方法產生的所述諾如病毒VP1蛋白和所述諾如病毒VP2蛋白。
27.一種產生抗體或抗體片段的方法，包括向受試者或宿主動物施用如權利要求9所述的諾如病毒VP1蛋白，從而產生所述抗...
【專利技術屬性】
技術研發人員：皮爾奧利弗·拉沃伊，馬克安德魯·德奧斯特，
申請(專利權)人：麥迪卡格公司，
類型：發明
國別省市：加拿大;CA
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