具有經修飾的HIV-1 ENV的重組MVA制造技術

本發明專利技術涉及初免?增強疫苗，其包含初免HIV?1免疫原和一種或多種增強HIV?1免疫原，其中，所述初免HIV?1免疫原包含(a)或(b)，或由(a)或(b)組成：(a)在哺乳動物細胞中能夠表達經修飾的HIV?1 gp150包膜蛋白的DNA表達載體，(b)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含編碼經修飾的HIV?1 gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述一種或多種增強HIV?1免疫原包含：(a)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含編碼經修飾的HIV?1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的經修飾的HIV?1 gp140包膜蛋白。進而本發明專利技術還涉及所述初免?增強疫苗，其用于誘導免疫應答的方法，在受試者中誘導針對HIV?1的免疫應答的方法，和本發明專利技術還涉及包含本發明專利技術初免組合物和增強組合物的試劑盒。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】具有經修飾的HIV-1ENV的重組MVA
技術介紹
本專利技術涉及初免-增強疫苗，其包含初免HIV-1免疫原和一種或多種增強HIV-1免疫原，其中，所述初免HIV-1免疫原包含(a)或(b)，或由(a)或(b)組成：(a)在哺乳動物細胞中能夠表達經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的DNA表達載體，或(b)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述一種或多種增強HIV-1免疫原包含：(a)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白。進而本專利技術還涉及所述初免-增強疫苗，其用于在受試者中誘導針對HIV-1的免疫應答的方法，所述疫苗包括上述初免和增強HIV-1免疫原。本專利技術還包括在受試者中誘導針對HIV-1的免疫應答的方法，所述方法包括施用初免和增強HIV-1免疫原，以及包含本專利技術初免組合物和增強組合物的試劑盒。艾滋病毒流行是全球性的公共衛生挑戰，在發展中國家尤其成問題，發展中國家通常受到不成比例的影響，并且缺乏生產自己的疫苗所需的基礎設施。當前HIV疫苗研究的主要重點是開發能夠誘導中和抗體的疫苗。中和抗體的類型很重要，根據要中和病毒的難易程度來劃分病毒，其中第1a層級層病毒最容易被中和，第2層級病毒對中和的抵抗力更高。在動物模型或人類中，都沒有通過疫苗接種引發令人信服的交叉中和抗體，只有很少的研究報道在臨床前動物模型中誘導了針對疫苗匹配株的中和抗體(即自體中和抗體)。在許多情況下，這些自體中和抗體據報道滴度很低，或者只是在部分動物體內不一致地引起。當前HIV疫苗研究的主要焦點是開發能夠誘導中和抗體的天然樣包膜三聚體。這些抗原通常是通過瞬時轉染哺乳動物細胞(例如HEK293T、HEK293F、CHO-K1或GnTI-/-細胞系)而產生。迄今為止，唯一有效的HIV疫苗功效試驗包括痘病毒初免和蛋白增強。該試驗(RV144)使用了禽痘病毒ALVAC。在該試驗中未誘導出2層級中和抗體。只有少數幾組能夠使用初免-增強免疫策略成功引起2層級中和抗體：Townsley等(2016)描述了利用復制的痘苗病毒作為載體并表達gp120包膜蛋白，而本專利技術人已經產生了表達三聚體gp150包膜蛋白的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)，其包括代替弗林切割位點的柔性接頭。Cappucci等(2017)描述了使用MVA產生中和抗體。這些作者使用的MVA表達的是可溶的經切割的gp140包膜蛋白，而不是本專利技術人所描述的膜結合gp150蛋白。
技術實現思路
本專利技術涉及初免-增強疫苗，其包含初免HIV-1免疫原和一種或多種增強HIV-1免疫原，其中，所述初免HIV-1免疫原包含(a)或(b)，或由(a)或(b)組成：(a)在哺乳動物細胞中能夠表達經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的DNA表達載體，或(b)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述一種或多種增強HIV-1免疫原包含：(a)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白。進而本專利技術還涉及所述初免-增強疫苗，其用于在受試者中誘導針對HIV-1的免疫應答的方法，所述疫苗包括上述的初免和增強HIV-1免疫原。本專利技術還包括在受試者中誘導針對HIV-1的免疫應答的方法，所述方法包括施用初免和增強HIV-1免疫原，并涉及包含本專利技術初免組合物和增強組合物的試劑盒。在本專利技術的第一方面，提供了初免-增強疫苗，其包含初免HIV-1免疫原和一種或多種增強HIV-1免疫原，其中，所述初免HIV-1免疫原包含：(a)在哺乳動物細胞中能夠表達經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的DNA表達載體；或(b)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸，并且其中所述一種或多種增強HIV-1免疫原包含(a)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白。在本專利技術的一個實施方式中，經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白包含截短的胞質結構域、取代弗林切割位點的柔性甘氨酸接頭和I559P突變。另外，經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白包含取代弗林切割位點的柔性甘氨酸接頭和I559P突變。在本專利技術的另一個實施方式中，MVA或DNA表達載體可選地包含編碼HIV-1Gag蛋白的核酸。優選地，HIV-1Gag蛋白基本上與SEQIDNO:11的序列相同。在本專利技術的又一個實施方式中，經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白基本上與SEQIDNO:3或SEQIDNO:15的序列相同，經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白基本上與SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:17或SEQIDNO:21的序列相同。本專利技術的進一步實施方式提供經修飾的HIV-1gp120包膜蛋白，其基本上與SEQIDNO:7或SEQIDNO:19的序列相同。在本專利技術的再一個實施方式中，編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸包含組織纖溶酶原激活物前導序列。在該方面的優選實施方式中，初免HIV-1免疫原是在所述哺乳動物細胞中能夠表達經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的DNA表達載體，第一增強HIV-1免疫原包含所述重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸，并且第二增強HIV-1免疫原包含所述可溶的經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白。在該實施方式中，一個或多個連續劑量的初免HIV-1免疫原和各增強HIV-1免疫原以DNA-DNA-MVA-MVA-蛋白-蛋白的治療方案施用。然而，應當理解，治療方案可以變化并且可以包括DNA-DNA-蛋白；DNA-MVA-蛋白；DNA-MVA-MVA-蛋白-蛋白；DNA-DNA-MVA-蛋白-蛋白；DNA-DNA-MVA-MVA-蛋白；DNA-DNA-蛋白-蛋白-蛋白或MVA-MVA-蛋白-蛋白-蛋白。應當理解，初免HIV-1免疫原可以以一、二或三個連續劑量施用。此外，增強HIV-1免疫原可以在初免接種后以一個或多個劑量施用給所述受試者。增強HIV-1免疫原可以作為組合物施用，并可包括至少兩個，至少三個，至少四個，至少五個，至少六個，至少七個，至少八個，至少九個或至少十個增強組合物的隨后接種，所述增強組合物包含選自由重組MVA和/或可溶的經修飾的HIV-1env蛋白組成的組的HIV-1免疫原。本領域技術人員應理解，各增強接種可包括不同的HIV-1免疫原。應當理解，經修飾的HIV-1包膜蛋白本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種初免-增強疫苗，其包含初免HIV-1免疫原和一種或多種增強HIV-1免疫原，/n其中所述初免HIV-1免疫原包含：/na)在哺乳動物細胞中能夠表達經修飾的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表達載體；或/nb)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含編碼經修飾的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且/n其中所述一種或多種增強HIV-1免疫原包含：/na)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含編碼經修飾的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或/nb)可溶的經修飾的HIV-1 gp140包膜蛋白。/n

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】20171004 GB 1716181.11.一種初免-增強疫苗，其包含初免HIV-1免疫原和一種或多種增強HIV-1免疫原，
其中所述初免HIV-1免疫原包含：
a)在哺乳動物細胞中能夠表達經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的DNA表達載體；或
b)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；并且
其中所述一種或多種增強HIV-1免疫原包含：
a)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；和/或
b)可溶的經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白。


2.如權利要求1所述的疫苗，其中，所述經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白包含截短的胞質結構域、取代弗林切割位點的柔性甘氨酸接頭和I559P突變。


3.如權利要求1或2所述的疫苗，其中，所述經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白包含取代弗林切割位點的柔性甘氨酸接頭和I559P突變。


4.如權利要求1至3中任一項所述的疫苗，其中，所述MVA或DNA表達載體可選地包含編碼HIV-1Gag蛋白的核酸。


5.如權利要求1至4中任一項所述的疫苗，其中，所述經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白基本上與SEQIDNO:3或SEQIDNO:15的序列相同。


6.如權利要求1至5中任一項所述的疫苗，其中，所述經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白基本上與SEQIDNO:5或SEQIDNO:17的序列相同。


7.如權利要求1至5中任一項所述的疫苗，其中，所述編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸包含組織纖溶酶原激活物前導序列。


8.如權利要求1至7中任一項所述的疫苗，其中，所述初免HIV-1免疫原是在所述哺乳動物細胞中能夠表達經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的DNA表達載體；并且
其中，第一增強HIV-1免疫原包含所述重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸，
其中，第二增強HIV-1免疫原包含所述可溶的經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白；并且
其中施用一個或多個連續劑量的各初免HIV-1免疫原和各增強HIV-1免疫原。


9.如權利要求1至8中任一項所述的疫苗，其中，所述經修飾的HIV-1包膜蛋白能夠折疊成三聚體構象。


10.一種在受試者中誘導針對HIV-1的免疫應答的方法中應用的初免-增強疫苗，所述方法包括向所述受試者施用一個或多個連續劑量的初免HIV-1免疫原和一個或多個連續劑量的增強HIV-1免疫原，
其中所述初免HIV-1免疫原包含：
a)在所述受試者中能夠表達經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的DNA表達載體；或
b)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；并且
其中所述增強HIV-1免疫原包含：
a)重組的經修飾的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；和/或
b)可溶的經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白。


11.如權利要求10所述的應用的疫苗，其中，所述經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白包含截短的胞質結構域、取代弗林切割位點的柔性甘氨酸接頭和I559P突變。


12.如權利要求10或11所述的應用的疫苗，其中，所述經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白包含取代弗林切割位點的柔性甘氨酸接頭和I559P突變。


13.如權利要求10至12中任一項所述的應用的疫苗，其中，所述MVA或DNA表達載體可選地包含編碼HIV-1Gag蛋白的核酸。


14.如權利要求10至13中任一項所述的應用的疫苗，其中，所述經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白基本上與SEQIDNO:3或SEQIDNO:15的序列相同。


15.如權利要求10至13中任一項所述的應用的疫苗，其中，所述經修飾的HIV-1gp140包膜蛋白基本上與SEQIDNO:5或SEQIDNO:17的序列相同。


16.如權利要求10至15中任一項所述的應用的疫苗，其中，所述編碼經修飾的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸包含組織纖溶酶原激活物前導序列。


17.如權利要求10至16中任一項所述的應用的疫苗，其中，所述初免HIV...

【專利技術屬性】
技術研發人員：AL·威廉森，E·P·雷比茨基，M·范戴潘，N·J·道格拉斯，R·E·查普曼，
申請(專利權)人：開普敦大學，
類型：發明
國別省市：南非;ZA