用于檢測受試者中MCI和/或AD的方法、試劑盒及篩選化合物的方法技術

本發明專利技術公開用于檢測受試者中MCI和/或AD的方法、試劑盒及篩選化合物的方法。檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的方法包括：(1)利用試劑測量從受試者采集的血液樣品中的tau蛋白N端片段的含量得到測量值的步驟；(2)將測量值與標準值進行比較的步驟；(3)當測量值高于標準值時，則將受試者檢測為患有輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD，或者將受試者預測為患有輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的風險。

Methods, kits and screening methods for MCI and / or ad in subjects

【技術實現步驟摘要】
用于檢測受試者中MCI和/或AD的方法、試劑盒及篩選化合物的方法
本專利技術涉及中輕度認知障礙和/或阿爾茨海默病的檢測，具體涉及用于檢測受試者中MCI和/或AD的方法、試劑盒及篩選化合物的方法。
技術介紹
隨著阿爾茨海默病(AD)的分子機理知識的積累，針對該疾病治療的研究進入了令人鼓舞的階段。然而，最近的臨床藥物研究顯示急需更有效的臨床診斷手段，并急需開發對治療有響應的生物標記物。測量CSF中的tau蛋白和β-淀粉樣蛋白，或通過PET成像定量淀粉樣形變或纏結能夠鑒定中輕度認知障礙(MCI)，其通常認為是AD的前兆。現今已普遍在臨床研究中使用這些標志物。但是PET成本高且使用受到限制，且CSF取樣不便且不易連續進行。因此，急需低成本且盡量非侵入的基于血液的生物標志物來代替或補充當前的CSF和PET標志物。眾多研究表明在AD的CSF中tau蛋白增加。通常的分析采用抗tau蛋白中區的單抗來進行，但是作為總的tau蛋白分析其經常不準確。事實上，此類分析(包括普遍使用的InnotestELISA)不能檢測缺少整個中區或其一部分的tau蛋白片段。另外，越來越多的研究表明細胞外tau蛋白的一級結構是高度異質的(參見，1997年Johnson等人、2013年Meredith等人、2015年Kanmert等人2015和2018年Guix等人的報道)。最新的研究揭示在人血漿中可檢測到少量的tau蛋白(參見，YanamandraK等人，Anti-tauantibodyadministrationincreasesplasmatauintransgenicmiceandpatientswithtauopathy.SciTranslMed2017；9(386))。有些研究還揭示特定類型的血漿tau蛋白在AD中可能增加，但是由于研究時群體不同，這些研究的結果之間相互矛盾(參見，MattssonN等人，PlasmatauinAlzheimerdisease.Neurology2016；87(17):1827-35)。
技術實現思路
專利技術人開發了一套靈敏且充分驗證的tau蛋白免疫分析系統，利用該系統能夠檢測在血液中發現的各種tau蛋白片段。專利技術人在分析不同預先分類的診斷群組后，發現在用于研究的樣品庫和用于確認的樣品庫中血液NT1能夠使AD和AD-MCI與正常對照實現良好區分。這些結果表明NT1分析可用作基于血液篩查AD的方法。至少部分地基于此完成了本專利技術。具體地，本專利技術包括以下內容。本專利技術的第一方面，提供一種檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的方法，其包括：(1)利用試劑測量從所述受試者采集的血液樣品中的tau蛋白N端片段的含量得到測量值的步驟；(2)將所述測量值與標準值進行比較的步驟；(3)當所述測量值高于所述標準值時，則將所述受試者檢測為患有輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD，或者將所述受試者預測為患有輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的風險。優選地，所述tau蛋白N端片段包括tau蛋白全長序列中的第6-198位之間的序列，優選第6-18位之間的序列。優選地，所述標準值為從與所述受試者的年齡相當的正常對象的血液樣品經相同的方法獲得的值。優選地，測量在第一時間點從所述受試者采集的血液樣品T1中的含量作為所述標準值，測量在第二時間點從同一受試者采集的血樣品T2的含量作為測量值。優選地，所述標準值為3.00±0.25pg/ml。優選地，采用單分子陣列技術進行測量值和/或標準值的測量，可選地，所述試劑為抗體。本專利技術的第二方面，提供一種用于確定受試者中的輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD治療的有效性的方法，其包括：(1’)利用試劑測量從治療期間或之后的受試者采集的血液樣品中的tau蛋白N端片段的含量得到測量值的步驟，優選地，采用單分子陣列技術進行測量值和/或標準值的測量；(2’)將所述測量值與標準值進行比較的步驟，優選地，測量從治療開始前的受試者采集的血液樣品中的tau蛋白N端片段的含量作為標準值；還優選地，所述標準值為從與所述受試者的年齡相當的對象的血液樣品獲得的值，例如所述標準值為3.00±0.25pg/ml；(3’)當所述測量值高于所述標準值時，則判定為治療有效，當所述測量值低于所述標準值時，則判定為治療不是有效的。本專利技術的第三方面，提供一種用于篩選對治療或減緩中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD有用的化合物的方法，其包括：a.測量從患有中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的受試者采集的血液樣品中tau蛋白N端片段的含量得到第一測量值的步驟；b.將所述化合物施用至患有中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的受試者的步驟；c.測量從施用所述化合物后的患有中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的受試者采集的血液樣品中tau蛋白N端片段的含量得到第二測量值的步驟；d.比較所述第一測量值和第二測量值的步驟；e.當所述第二測量值小于所述第一測量值時，將所述化合物篩選為對治療或減緩中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD有用的化合物，當所述第二測量值大于或等于所述第一測量值時，將所述化合物篩選為對治療或減緩中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD無用的化合物。本專利技術的第四方面，提供一種用于檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的試劑盒，其包括用于測量從所述受試者采集的血液樣品中的tau蛋白N端片段的含量得到測量值的試劑。優選地，所述tau蛋白N端片段包括tau蛋白全長序列中第6-198位之間的序列，所述試劑包括抗tau蛋白N端片段的抗體。AD的診斷存在不準確性，大量的個體通過臨床標準被確診為越來越多的認知障礙，但結果并未發展為AD(Monselletal.,2015；FDA,2018)。本專利技術的方案使該問題最小化，并排除可能具有初期AD預兆的認知完好的對照。附圖說明圖1中段區域tau蛋白ELISA檢測的標準曲線。圖2NT1tau蛋白ELISA檢測的標準曲線。圖3NT2tau蛋白ELISA檢測的標準曲線。圖4全長tau蛋白ELISA檢測的標準曲線。圖5Simoa技術得到的各蛋白類型的標準曲線。圖6FLSimoa分析正常對照和患有AD-MCI和AD的受試者的tau蛋白的結果。圖7NT2Simoa分析正常對照和患有AD-MCI和AD的受試者的tau蛋白的結果。圖8使用NT1分析在AD-MCI和AD中測得的tau蛋白水平。圖9針對AD和/或AD-MCI的血漿NT1進行的ROC分析。圖10從87個受試者采集的血漿NT1重復分析結果。圖11ROC分析研究檢測血漿中NT1的有效性的結果。具體實施方式現詳細說明本專利技術的多種示例性實施方式，該詳細說明不應認為是對本專利技術的限制，而應理解為是對本專利技術的某本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的方法，其包括：/n(1)利用試劑測量從所述受試者采集的血液樣品中的tau蛋白N端片段的含量得到測量值的步驟；/n(2)將所述測量值與標準值進行比較的步驟；/n(3)當所述測量值高于所述標準值時，則將所述受試者檢測為患有輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD，或者將所述受試者預測為患有輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的風險。/n

【技術特征摘要】
1.一種檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的方法，其包括：
(1)利用試劑測量從所述受試者采集的血液樣品中的tau蛋白N端片段的含量得到測量值的步驟；
(2)將所述測量值與標準值進行比較的步驟；
(3)當所述測量值高于所述標準值時，則將所述受試者檢測為患有輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD，或者將所述受試者預測為患有輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的風險。


2.根據權利要求1所述的檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的方法，其中，所述tau蛋白N端片段包括tau蛋白全長序列中第6-198位之間的序列。


3.根據權利要求1所述的檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的方法，其中，所述標準值為從與所述受試者的年齡相當的正常對象的血液樣品獲得的值。


4.根據權利要求1所述的檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的方法，其中，測量在第一時間點從所述受試者采集的血液樣品T1中的含量作為所述標準值，測量在第二時間點從同一受試者采集的血樣品T2的含量作為測量值。


5.根據權利要求1所述的檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的方法，其中，所述標準值為3.00±0.25pg/ml。


6.根據權利要求1-5任一項所述的檢測受試者中輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD的方法，其中，采用單分子陣列技術進行測量值和/或標準值的測量，可選地，所述試劑為抗體。


7.一種用于確定受試者中的輕度認知障礙MCI和/或阿爾茨海默病AD治療的有效性的方法，其包括：
(1’)利用試劑測量從治療期間或之后的受試者采集的血液樣品中的tau蛋白N端片段的含量得到測量值的步驟，優選地，采用單分子陣列技術進行測...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳志成，
申請(專利權)人：陳志成，
類型：發明
國別省市：山東;37