本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種用于治療動物肝損傷的干細(xì)胞組合物，其包括：間充質(zhì)干細(xì)胞、聯(lián)苯雙酯、堿性成纖維細(xì)胞生長因子和生理鹽水。本發(fā)明專利技術(shù)的干細(xì)胞組合物通過間充質(zhì)干細(xì)胞、聯(lián)苯雙酯和堿性成纖維細(xì)胞生長因子三者的協(xié)同作用，能夠有效促進(jìn)肝臟損傷部位的組織再生，從而實(shí)現(xiàn)良好的肝損傷治療效果。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種用于治療動物肝損傷的干細(xì)胞組合物及其應(yīng)用
本專利技術(shù)屬于動物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于治療動物肝損傷的干細(xì)胞組合物及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
肝臟是腹腔內(nèi)最大的實(shí)質(zhì)性器官，擔(dān)負(fù)人體的重要生理功能，是人體脂類、蛋白質(zhì)、糖類、維生素、激素等物質(zhì)的代謝場所，也是人體最主要的解毒器官(酒精、重金屬等)，很多重要的身體功能都需要肝臟來完成。肝損傷是各種肝臟疾病的病變結(jié)果，目前，對肝損傷進(jìn)行有效防治，仍存在極大的挑戰(zhàn)。干細(xì)胞(stemsell，SC)是一類具有自我復(fù)制能力(self-renewing)和多向分化潛能的原始未分化細(xì)胞，是形成不同組織器官和個體的始祖細(xì)胞，能夠在一定條件下分化成多種功能細(xì)胞，醫(yī)學(xué)界稱之為“萬用細(xì)胞”。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是針對以上要解決的技術(shù)問題，提供一種使用方便、能夠有效治療動物(特別是犬科和貓科動物)肝損傷的干細(xì)胞組合物。為此，本專利技術(shù)提供了一種用于治療動物肝損傷的干細(xì)胞組合物，其包括：間充質(zhì)干細(xì)胞、聯(lián)苯雙酯、堿性成纖維細(xì)胞生長因子和生理鹽水。作為本專利技術(shù)的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述動物是犬科動物或貓科動物。所述間充質(zhì)干細(xì)胞來源于犬科動物或貓科動物。所述間充質(zhì)干細(xì)胞更優(yōu)選來源于健康犬或貓，其中，犬源干細(xì)胞組合物僅用于犬的肝損傷治療，貓?jiān)锤杉?xì)胞組合物僅用于貓的肝損傷治療。更優(yōu)選地，間充質(zhì)干細(xì)胞分離于犬或貓的臍帶、胎盤、脂肪或骨髓。作為本專利技術(shù)的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述間充質(zhì)干細(xì)胞來源于臍帶、胎盤、脂肪或骨髓組織，特別是脂肪組織或臍帶組織。優(yōu)選地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞是臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞或脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。更優(yōu)選地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞是犬臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞或貓脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。犬源間充質(zhì)干細(xì)胞來源的組織樣本優(yōu)選通過以下檢測，無狂犬病病毒、犬瘟熱病毒、犬副流感病毒、犬傳染性肝炎病毒、犬細(xì)小病毒、犬冠狀病毒、真菌及細(xì)菌感染等。貓?jiān)撮g充質(zhì)干細(xì)胞的組織樣本優(yōu)選通過以下檢測，無貓瘟病毒、貓皰疹病毒、貓杯狀病毒、狂犬病毒、貓冠狀病毒、真菌及細(xì)菌感染等。作為本專利技術(shù)的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述間充質(zhì)干細(xì)胞在所述組合物中的含量為5×105～10×105個/ml。更優(yōu)選地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞的含量為5×105～8×105個/ml、6×105～8×105個/ml或7×105～8×105個/ml，最優(yōu)選為8×105個/ml。作為本專利技術(shù)的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述聯(lián)苯雙酯在所述組合物中的含量為10mg/ml～50mg/ml。更優(yōu)選地，所述聯(lián)苯雙脂的含量為20mg/ml～50mg/ml、30mg/ml～50mg/ml或40mg/ml～50mg/ml，最優(yōu)選為50mg/ml。作為本專利技術(shù)的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述堿性成纖維細(xì)胞生長因子在所述組合物中的含量為1ng/ml～20ng/ml。更優(yōu)選地，所述堿性成纖維細(xì)胞生長因子的含量為10ng/ml～15ng/ml或10ng/ml～20ng/ml，最優(yōu)選為15ng/ml。作為本專利技術(shù)的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述間充質(zhì)干細(xì)胞是傳代培養(yǎng)的P2-P8代間充質(zhì)干細(xì)胞。最優(yōu)選為P6代間充質(zhì)干細(xì)胞。該間充質(zhì)干細(xì)胞具有分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的能力。本專利技術(shù)所述的間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)以下表面標(biāo)記：CD29、CD44、CD73、CD90、CD105中的任意一種或多種。在另一優(yōu)選例中，所述的間充質(zhì)干細(xì)胞不表達(dá)以下表面標(biāo)記：CD34、CD45。本專利技術(shù)還提供了一種用于治療和/或預(yù)防動物肝損傷的藥物，其包括本專利技術(shù)所述的干細(xì)胞組合物。優(yōu)選地，該藥物組合物為靜脈注射試劑。在本專利技術(shù)的另一方面，還提供了所述干細(xì)胞組合物在制備用于治療和/或預(yù)防動物肝損傷的藥物中的應(yīng)用。與現(xiàn)有的治療方案相比，本專利技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能及旁分泌能力，可通過分化為肝臟組織細(xì)胞及分泌活性因子促進(jìn)肝損傷的修復(fù)，與聯(lián)苯雙酯聯(lián)用能夠更好地促進(jìn)肝損傷治療效果；(2)堿性成纖維細(xì)胞生長因子一方面能夠促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及體外維持間充質(zhì)干細(xì)胞活性，另一方面還可以促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞向肝損傷部位遷移的功能；(3)具有顯著的降低肝臟轉(zhuǎn)氨酶作用和良好的保肝效果；(4)通過間充質(zhì)干細(xì)胞、聯(lián)苯雙酯和堿性成纖維細(xì)胞生長因子三者的協(xié)同作用，能夠有效促進(jìn)肝臟損傷部位的組織再生，從而實(shí)現(xiàn)較好的肝損傷治療效果。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，對本專利技術(shù)的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳述，但本專利技術(shù)并不限于以下實(shí)施例。如未特別指出，本專利技術(shù)所使用的試劑均為現(xiàn)有試劑，可通過商業(yè)渠道獲得。出于簡要目的，部分技術(shù)操作并未具體描述細(xì)節(jié)，但應(yīng)理解，這些操作都在本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的范圍內(nèi)，其可以根據(jù)本說明書中所記載的內(nèi)容予以實(shí)現(xiàn)。本專利技術(shù)使用的間充質(zhì)干細(xì)胞可以來源于動物的臍帶、胎盤、脂肪或骨髓組織，特別是脂肪組織或臍帶組織，以下實(shí)施例中涉及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，只是例舉說明，實(shí)際應(yīng)用中并不限于這兩種間充質(zhì)干細(xì)胞類型，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其他來源的間充質(zhì)干細(xì)胞亦可實(shí)現(xiàn)類似的效果。實(shí)施例1：犬臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)取剛剖腹產(chǎn)母犬胎盤及附屬組織，小心剝離臍帶組織用含5％雙抗的PBS清洗干凈，剪碎后轉(zhuǎn)移至離心管中，取一部分做檢測，檢測無狂犬病病毒、犬瘟熱病毒、犬副流感病毒、犬傳染性肝炎病毒、犬細(xì)小病毒、犬冠狀病毒、真菌及細(xì)菌感染等。另一部分加入1mg/mL的I型膠原酶，于37℃培養(yǎng)箱中消化6h，消化液用100目細(xì)胞篩過濾，濾液離心5min，棄上清，加入含10％胎牛血清、1％L-谷氨酰胺的DMEM混勻制成細(xì)胞懸液接種至細(xì)胞培養(yǎng)皿中。將細(xì)胞置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后換液，以后每3d換一次液，直至細(xì)胞長滿進(jìn)行傳代。注意每天觀察細(xì)胞生長狀況。實(shí)施例2：貓脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)取貓腹部脂肪組織約1cm3用含5％雙抗的PBS清洗干凈，剪碎后轉(zhuǎn)移至離心管中，取一部分做檢測，檢測無貓瘟病毒、貓皰疹病毒、貓杯狀病毒、狂犬病毒、貓冠狀病毒、真菌及細(xì)菌感染等。另一部分加入1mg/mL的I型膠原酶，于37℃培養(yǎng)箱中消化1h，消化液用100目細(xì)胞篩過濾，濾液離心5min，棄上清，加入含10％胎牛血清、1％L-谷氨酰胺的DMEM混勻制成細(xì)胞懸液接種至細(xì)胞培養(yǎng)皿中。將細(xì)胞置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后換液，以后每3d換一次液，直至細(xì)胞長滿進(jìn)行傳代。注意每天觀察細(xì)胞生長狀況。實(shí)施例3：犬間充質(zhì)干細(xì)胞和貓間充質(zhì)干細(xì)胞的三系分化(1)成脂分化分別將實(shí)施例1中第2代(P2)的犬間充質(zhì)干細(xì)胞和實(shí)施例2中第2代(P2)的貓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于6孔板中，待達(dá)到90％融合后，吸去舊培養(yǎng)基，換用成脂誘導(dǎo)完全培養(yǎng)液(購于賽業(yè)科技)，每3d換液1次，共誘導(dǎo)8～14d。油紅O染色鑒定了脂肪的形成。(2)成骨分化分別將實(shí)施例1中第2代(P2)的犬間充質(zhì)干細(xì)胞和實(shí)施例2中第2代(P2)的貓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于6孔板中，待達(dá)到90％融合后，吸去舊培養(yǎng)基，換用成骨誘導(dǎo)完全培養(yǎng)液(購于賽業(yè)科技)，每3d換液1次，共誘導(dǎo)8～14d。茜素紅染色鑒定了鈣結(jié)節(jié)的形成。(3)成軟骨分化分別將實(shí)施例1中第2代(P2)的犬間充質(zhì)干細(xì)胞和實(shí)施例2中第2代(P2)的貓間充質(zhì)干細(xì)胞按2×105個置于15ml離心管中2000r/min離心5min，棄去上清，小心加入0.5ml成軟骨誘導(dǎo)完全培養(yǎng)液(購于賽業(yè)科技)，24h內(nèi)保持細(xì)胞團(tuán)形狀，此后每3d本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種用于治療動物肝損傷的干細(xì)胞組合物，其包括：間充質(zhì)干細(xì)胞、聯(lián)苯雙酯、堿性成纖維細(xì)胞生長因子和生理鹽水。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于治療動物肝損傷的干細(xì)胞組合物，其包括：間充質(zhì)干細(xì)胞、聯(lián)苯雙酯、堿性成纖維細(xì)胞生長因子和生理鹽水。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞組合物，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞來源于犬科動物或貓科動物。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的干細(xì)胞組合物，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞來源于臍帶、胎盤、脂肪或骨髓組織。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞組合物，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞是傳代培養(yǎng)的P2-P8代間充質(zhì)干細(xì)胞。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞組合物，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞在所...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李東升，王丙云，陳勝鋒，陳志勝，丁毅力，
申請(專利權(quán))人：廣東維賽生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東,44
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