The invention provides a method for in vitro conservation of Dendrobium officinale germplasm resources. The technological process of the method includes: (1) plant pretreatment; (2) acquisition of sterile materials; (3) inoculation and induction of explants; (4) slow growth and preservation of germplasm; (5) germplasm rejuvenation and multiplication; (6) rooting of strong seedlings in hydroponics; (7) seedling refining and transplantation. By effectively regulating the tissue culture conditions of Dendrobium officinale and alternating subculture with two different media, the invention effectively slows down the growth and reproduction of preserved materials, prolongs the interval between subcultures, reduces the number of subcultures, thereby reducing the possible genetic variation while reducing the cost of preservation; the method of the invention is simple, stable and reliable, and can preserve germplasm for up to 4 years. Five years, and the germplasm growth effect is good. It can proliferate and multiply in a short time. It provides technical support for the development and utilization of Dendrobium officinale germplasm resources.
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種鐵皮石斛的種質(zhì)資源離體保存方法
本專(zhuān)利技術(shù)涉及一種鐵皮石斛的種質(zhì)資源離體保存方法，屬于藥用植物組織培養(yǎng)和種質(zhì)保存
技術(shù)介紹
石斛屬是蘭科中的第二大屬，為多年生草本植物。該屬植物主要分布在亞洲熱帶、亞熱帶和大洋洲等地區(qū)，全球共有大約1500余種。目前中國(guó)有74種2變種，多分布于秦嶺以南的省份，主要分布于安徽、江西、浙江、福建、四川、廣西和云南等地，其中以云南的產(chǎn)量最大。石斛屬植物和其它蘭科植物一樣，大多數(shù)為附生，并且對(duì)生態(tài)環(huán)境要求十分嚴(yán)格；喜溫暖濕潤(rùn)氣候和半陰半陽(yáng)的環(huán)境，不耐寒，適宜在涼爽、濕潤(rùn)、空氣暢通的環(huán)境生長(zhǎng)，適宜生長(zhǎng)溫度為15-28度，適宜生長(zhǎng)空氣濕度為60%以上，對(duì)土肥要求不甚嚴(yán)格，野生多在疏松且厚的樹(shù)皮或樹(shù)干上生長(zhǎng)，有的也生長(zhǎng)于石縫中。由于石斛屬植物集藥用和觀賞于一體，加上過(guò)度采挖利用，繁殖率低和生長(zhǎng)緩慢等特點(diǎn)，該屬的所有植物均被列入國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物名錄。鐵皮石斛，因其表皮顏色呈鐵綠色而得名，又名鐵吊蘭、黑節(jié)草等，是石斛類(lèi)植物中最為名貴、利用價(jià)值最高的一個(gè)品種，堪稱(chēng)石斛中的極品。鐵皮石斛是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材，享有“藥中黃金”之美譽(yù)，歷代本草均有記載。《神農(nóng)本草經(jīng)》將鐵皮石斛列為“上品”，道藏將其列為“中華九大仙草”之首，民間稱(chēng)其為“救命仙草”。其味甘，性微寒，歸胃經(jīng)、腎經(jīng)，具有益胃生津，滋陰清熱的功效，用于熱病津傷，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨痿軟。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鐵皮石斛的藥效成分主要有石斛多糖、氨基酸、黃酮、生物堿及微量元素等，在調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗疲勞、降血...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種鐵皮石斛的種質(zhì)資源離體保存方法，其特征在于，該方法的技術(shù)流程包括以下步驟：（1）鐵皮石斛植株預(yù)處理選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的鐵皮石斛植株，取材后進(jìn)行根部清洗，然后將根部浸入預(yù)處理液中，在8?10℃黑暗環(huán)境下預(yù)培養(yǎng)5?7d；（2）無(wú)菌材料的獲得選擇鐵皮石斛幼嫩的帶節(jié)莖段，小心摘除葉片，用肥皂水或洗潔精輕輕洗滌，在自來(lái)水下沖洗干凈；然后置于超凈工作臺(tái)上，先用70%異丙醇浸泡1min，無(wú)菌蒸餾水沖洗3?4次，再用2.0%的戊二醛加3滴吐溫80消毒8?10min，期間需要不斷地?fù)u動(dòng)使莖段充分接觸溶液，無(wú)菌蒸餾水沖洗3?4次，用濾紙吸干表面水分后備用；（3）外植體接種與誘導(dǎo)培養(yǎng)將上述消毒后外植體切成長(zhǎng)1.0?1.5cm的小莖段，每段包含一個(gè)節(jié)間，再將其水平接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)38?44d誘導(dǎo)出叢生的不定芽；培養(yǎng)條件控制為溫度25?27℃、光照強(qiáng)度1400?1600lx、光周期10?12h光/12?14h暗；（4）種質(zhì)慢生長(zhǎng)保存待誘導(dǎo)的不定芽長(zhǎng)至2.0?3.0cm高時(shí)，將其從瓶中取出，切成單株并轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基①或繼代培養(yǎng)基②上，先置于溫度15?18℃、光照強(qiáng)度800?1200lx、每...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種鐵皮石斛的種質(zhì)資源離體保存方法，其特征在于，該方法的技術(shù)流程包括以下步驟：（1）鐵皮石斛植株預(yù)處理選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的鐵皮石斛植株，取材后進(jìn)行根部清洗，然后將根部浸入預(yù)處理液中，在8-10℃黑暗環(huán)境下預(yù)培養(yǎng)5-7d；（2）無(wú)菌材料的獲得選擇鐵皮石斛幼嫩的帶節(jié)莖段，小心摘除葉片，用肥皂水或洗潔精輕輕洗滌，在自來(lái)水下沖洗干凈；然后置于超凈工作臺(tái)上，先用70%異丙醇浸泡1min，無(wú)菌蒸餾水沖洗3-4次，再用2.0%的戊二醛加3滴吐溫80消毒8-10min，期間需要不斷地?fù)u動(dòng)使莖段充分接觸溶液，無(wú)菌蒸餾水沖洗3-4次，用濾紙吸干表面水分后備用；（3）外植體接種與誘導(dǎo)培養(yǎng)將上述消毒后外植體切成長(zhǎng)1.0-1.5cm的小莖段，每段包含一個(gè)節(jié)間，再將其水平接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)38-44d誘導(dǎo)出叢生的不定芽；培養(yǎng)條件控制為溫度25-27℃、光照強(qiáng)度1400-1600lx、光周期10-12h光/12-14h暗；（4）種質(zhì)慢生長(zhǎng)保存待誘導(dǎo)的不定芽長(zhǎng)至2.0-3.0cm高時(shí)，將其從瓶中取出，切成單株并轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基①或繼代培養(yǎng)基②上，先置于溫度15-18℃、光照強(qiáng)度800-1200lx、每天光照10-12h的條件下培養(yǎng)15d，然后置于低溫、弱光的培養(yǎng)條件下使其緩慢生長(zhǎng)，每14個(gè)月繼代一次，2種繼代培養(yǎng)基交替使用，然后繼續(xù)進(jìn)行慢生長(zhǎng)保存；（5）種質(zhì)復(fù)壯增殖鐵皮石斛種質(zhì)保存期結(jié)束后，將慢生長(zhǎng)保存的不定芽轉(zhuǎn)接到復(fù)壯培養(yǎng)基上，置于溫度23-27℃、光照強(qiáng)度1800-2200lx、每天光照12h的條件下恢復(fù)生長(zhǎng)，每28d左右繼代1次，繼代2-3次可獲得增殖的長(zhǎng)勢(shì)旺盛的鐵皮石斛叢生芽；（6）水培壯苗生根將上述叢生芽每個(gè)單獨(dú)切下轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)液中，置于溫度23-27℃、光照強(qiáng)度1800-2200lx、每天光照12-16h的條件下培養(yǎng)25-30d獲得生長(zhǎng)健壯的鐵皮石斛組培苗；（7）煉苗與移栽當(dāng)組培苗根系長(zhǎng)至6-8條，真葉5-6片時(shí)，將組培苗移至大棚中，在室溫、半遮光條件下打開(kāi)瓶口煉苗5-7d；然后將組培苗從瓶?jī)?nèi)取出，將根部在30%乙蒜素乳油500倍稀釋液中浸泡15min后，移栽入裝有栽培基質(zhì)的穴盤(pán)中，此時(shí)大棚內(nèi)溫度控制在20-28℃，濕度65-85%，遮光度70-80%，進(jìn)行常規(guī)栽培管理。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛的種質(zhì)資源離體保存方法，其特征在于，所述鐵皮石斛的品種為“森山2號(hào)”。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛的種質(zhì)資源離體保存方法，其特征在于，所述步驟（1）中預(yù)處理液的配方為：康多酚3.5mg/L，乙二醇縮糠醛1.1mg/L，維生素C0.8mg/L，茉莉酸甲酯1.0mg/L，花寶1號(hào)0.5g/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛的種質(zhì)資源離體保存方法，其特征在于，所述步驟（3）中芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：1/2MS+1.8mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.05mg/L三十烷醇+硝酸鈰0.5mg/L，pH值為5.3~5.7。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛的種質(zhì)資源離體保存方法，其特征在于，所述步驟（4）中低溫、弱光的培養(yǎng)條件為溫度5-7℃、光照強(qiáng)度500-800lx、光照周期為12h光/12h暗。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛的種質(zhì)資源離體保存方法，其特征在于，所述步驟（4）中繼代培養(yǎng)基①的...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：高天龍，劉洋，關(guān)耀恒，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：江蘇強(qiáng)農(nóng)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：江蘇,32
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