NS1蛋白的結合蛋白制造技術

本發明專利技術提供的包括與NS1蛋白結合的抗原結合結構域的分離的結合蛋白，包括特定的重鏈CDR和輕鏈CDR。該結合蛋白能夠特異性地識別并結合NS1蛋白，具有較高的靈敏度和特異性，從而實現對登革熱病毒的檢測。并且，無需利用小鼠腹腔誘生雜交瘤細胞來生產該結合蛋白，生產難度小的同時，抗體功能更加穩定。

NS1 protein binding protein

The present invention provides a separated binding protein including an antigen binding domain bound to NS1 protein, including a specific heavy chain CDR and a light chain CDR. The binding protein can specifically recognize and bind to NS1 protein with high sensitivity and specificity, thus realizing the detection of dengue virus. Moreover, it is not necessary to induce hybridoma cells in mice abdominal cavity to produce the binding protein. The production of the binding protein is less difficult and the function of the antibody is more stable.

【技術實現步驟摘要】
NS1蛋白的結合蛋白
本專利技術涉及生物技術和醫學
，尤其是涉及一種NS1蛋白的結合蛋白。
技術介紹
登革熱(denguefever,DF)是由4個血清型病毒(DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4)引起的急性蚊媒傳染病，主要通過埃及伊蚊和白紋伊蚊傳播。DF是分布最廣，發病最多，危害較大的一種蟲媒病毒性疾病，廣泛流行于全球熱帶和亞熱帶的非洲、美洲、東南亞和西太平洋地區的100多個國家和地區。在臨床上，DF是一種嚴重的流感樣的疾病。主要表現為起病突然、高熱、劇烈頭痛、眼眶后痛、肌肉和關節痛，可伴有皮疹、淋巴腺腫和白血球減少，可波及所有人群，但癥狀可因病人的年齡不同而不同。一般將這種病型稱為古典登革熱，此類型傳播迅速，可引起較大規模的流行。在登革熱流行期，易感人群的罹患率通常為40％-50％，可高達80％-90％，但病死率很低。登革熱出血熱是以高熱、出血、肝大，嚴重病例循環衰竭為特征，病死率高，是較為嚴重的一種臨床類型。伴有休克綜合癥的稱為登革休克綜合癥。登革熱沒有特效的治療方法。如果沒有適應的治療，登革出血熱的病死率可超過20％，經過有效的支持療法，病死率可低于1％。登革熱診斷要點：1)流行病學資料，發病關15天的活動情況，有否去過流行區，蚊蟲叮咬歷；2)臨床特征，突然起病，發熱，“三痛三紅”，皮診；3)實驗室檢查，白細胞、血小板下降；檢測血清特性IgM陽性；恢復期IgG比急性期有4倍增長；分離到病毒或特異性抗原。臨床上用于登革病毒的檢測方法有病毒培養、血清學檢測、病毒核酸檢測等。病毒分離所需時間較長，達不到快速診斷的目的，而常規的血清學診斷又因存在廣泛的交叉反應而受到干擾。膠體金標記的免疫層析方法具有快速、簡便、不需要依賴重要裝備、能夠實現現場檢測等特點，成為目前傳染病快速診斷中研究的熱點。NS1蛋白是登革病毒非結構蛋白中唯一的糖蛋白，抗原性極強且不引發ADE，所以作為膠體金檢測的靶標。而膠體金檢測需要針對NS1蛋白的特異性單克隆抗體，傳統臨床用的都是鼠源性的單克隆抗體。長期以來，鼠單克隆抗體被廣泛的應用于科研、臨床診斷和治療。但由于雜交瘤方式生產采用小鼠腹腔誘生，受小鼠個體影響特別大，生產不穩定、批間差大、含小鼠自身抗體純化難度大。有鑒于此，特提出本專利技術。
技術實現思路
本專利技術是基于所獲得的Anti-DengueNS17D9單克隆抗體，通過克隆、鑒定與基因結構的分析，確定了其CDR區序列，構建了相應的包括與NS1蛋白結合的抗原結合結構域的分離的結合蛋白，并建立了相應的真核細胞表達系統，生產純化出了該結合蛋白。本專利技術提供的包括與NS1蛋白結合的抗原結合結構域的分離的結合蛋白，其中所述抗原結合結構域包括選自下述氨基酸序列的至少一個互補決定區：或；與下述氨基酸序列的互補決定區具有至少80％的序列同一性且與NS1蛋白具有KD≤6.12×10-8mol/L的親和力；互補決定區CDR-VH1為A-S-G-Y-X1-F-T-G-X2-Y-M-H，其中，X1是S或T，X2是F、Y或L；互補決定區CDR-VH2為R-V-N-P-X1-N-G-G-X2-S-Y-N-Q-K-F-X3-G，其中，X1是Q、D或N，X2是S或T，X3是V、I或F；互補決定區CDR-VH3為A-X1-E-G-X2-H-Y-D-R-A，其中，X1是Q、N或R，X2是V、F或Y；互補決定區CDR-VL1為Q-S-L-L-Y-X1-S-N-X2-K-N-S-L-A，其中，X1是S或T，X2是N、Q或H；互補決定區CDR-VL2為W-A-S-T-X1-E-S，其中，X1是Q、R或N；互補決定區CDR-VL3為Q-Q-Y-X1-T-Y-X2-Y-T，其中，X1是F、Y或V，X2是A、P或G。進一步地，所述互補決定區CDR-VH1中，X1是S；所述互補決定區CDR-VH2中，X2是T，X3是I；所述互補決定區CDR-VL1中，X2是Q；所述互補決定區CDR-VL3中，X2是P。進一步地，所述互補決定區CDR-VH1中，X2是F。進一步地，所述互補決定區CDR-VH1中，X2是Y。進一步地，所述互補決定區CDR-VH1中，X2是L。進一步地，所述互補決定區CDR-VH2中，X1是Q。進一步地，所述互補決定區CDR-VH2中，X1是D。進一步地，所述互補決定區CDR-VH2中，X1是N。進一步地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是Q，X2是V。進一步地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是Q，X2是F。進一步地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是Q，X2是Y。進一步地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是N，X2是V。進一步地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是N，X2是F。進一步地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是N，X2是Y。進一步地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是R，X2是V。進一步地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是R，X2是F。進一步地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是R，X2是Y。進一步地，所述互補決定區CDR-VL1中，X1是S。進一步地，所述互補決定區CDR-VL1中，X1是T。進一步地，所述互補決定區CDR-VL2中，X1是Q。進一步地，所述互補決定區CDR-VL2中，X1是R。進一步地，所述互補決定區CDR-VL2中，X1是N。進一步地，所述互補決定區CDR-VL3中，X1是F。進一步地，所述互補決定區CDR-VL3中，X1是Y。進一步地，所述互補決定區CDR-VL3中，X1是V。進一步地，所述結合蛋白中包括至少3個CDRs；或者，所述結合蛋白包括至少6個CDRs；優選的，所述結合蛋白為納米抗體、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、雙特異抗體和抗體最小識別單位中的一種；優選的，所述結合蛋白包括序列依次如SEQIDNO:1-4所示的輕鏈骨架區FR-L1、FR-L2、FR-L3及FR-L4，和/或，序列依次如SEQIDNO:5-8所示的重鏈骨架區FR-H1、FR-H2、FR-H3及FR-H4。進一步地，所述結合蛋白還包含抗體恒定區序列；優選的，所述恒定區序列選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD任何其中之一恒定區的序列；優選的，所述恒定區的種屬來源為牛、馬、乳牛、豬、綿羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、貓、兔、駱駝、驢、鹿、貂、雞、鴨、鵝、火雞、斗雞或人；優選的，所述恒定區來源于小鼠；輕鏈恒定區序列如SEQIDNO:9所示；重鏈恒定區序列如SEQIDNO:10所示。本專利技術還提供了一種核酸，所述核酸編碼上述的結合蛋白。本專利技術還提供了一種載體，所述載體包括上述的核酸。本專利技術還提供了一種宿主細胞，所述宿主細胞包括上述的核酸或上述的載體。本專利技術還提供了一種試劑盒，所述試劑盒包括上述的結合蛋白、核酸或載體中的一種或多種。優選地，所述試劑盒還包括用于標記所述結合蛋白的標記。本專利技術還提供了一種生產上述結合蛋白的方法，包括制備上述的核酸或載體的步驟；優選包括如下步驟：在培養基中培養上述的宿主細胞，從培養基中或從所培養的宿主細胞中回收如此產生的結合蛋白。另外，本專利技術還提供了上述的結合蛋白在制備用于檢測登革熱感染的產品中的應用。本專利技術提供的包括與NS1本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種包括與NS1蛋白結合的抗原結合結構域的分離的結合蛋白，其特征在于，其中所述抗原結合結構域包括選自下述氨基酸序列的至少一個互補決定區：或；與下述氨基酸序列的互補決定區具有至少80％的序列同一性且與NS1蛋白具有KD≤6.12×10?8mol/L的親和力；互補決定區CDR?VH1為A?S?G?Y?X1?F?T?G?X2?Y?M?H，其中，X1是S或T，X2是F、Y或L；互補決定區CDR?VH2為R?V?N?P?X1?N?G?G?X2?S?Y?N?Q?K?F?X3?G，其中，X1是Q、D或N，X2是S或T，X3是V、I或F；互補決定區CDR?VH3為A?X1?E?G?X2?H?Y?D?R?A，其中，X1是Q、N或R，X2是V、F或Y；互補決定區CDR?VL1為Q?S?L?L?Y?X1?S?N?X2?K?N?S?L?A，其中，X1是S或T，X2是N、Q或H；互補決定區CDR?VL2為W?A?S?T?X1?E?S，其中，X1是Q、R或N；互補決定區CDR?VL3為Q?Q?Y?X1?T?Y?X2?Y?T，其中，X1是F、Y或V，X2是A、P或G。

【技術特征摘要】
1.一種包括與NS1蛋白結合的抗原結合結構域的分離的結合蛋白，其特征在于，其中所述抗原結合結構域包括選自下述氨基酸序列的至少一個互補決定區：或；與下述氨基酸序列的互補決定區具有至少80％的序列同一性且與NS1蛋白具有KD≤6.12×10-8mol/L的親和力；互補決定區CDR-VH1為A-S-G-Y-X1-F-T-G-X2-Y-M-H，其中，X1是S或T，X2是F、Y或L；互補決定區CDR-VH2為R-V-N-P-X1-N-G-G-X2-S-Y-N-Q-K-F-X3-G，其中，X1是Q、D或N，X2是S或T，X3是V、I或F；互補決定區CDR-VH3為A-X1-E-G-X2-H-Y-D-R-A，其中，X1是Q、N或R，X2是V、F或Y；互補決定區CDR-VL1為Q-S-L-L-Y-X1-S-N-X2-K-N-S-L-A，其中，X1是S或T，X2是N、Q或H；互補決定區CDR-VL2為W-A-S-T-X1-E-S，其中，X1是Q、R或N；互補決定區CDR-VL3為Q-Q-Y-X1-T-Y-X2-Y-T，其中，X1是F、Y或V，X2是A、P或G。2.根據權利要求1所述的結合蛋白，其特征在于，所述互補決定區CDR-VH1中，X1是S；所述互補決定區CDR-VH2中，X2是T，X3是I；所述互補決定區CDR-VL1中，X2是Q；所述互補決定區CDR-VL3中，X2是P；優選地，所述互補決定區CDR-VH1中，X2是F；優選地，所述互補決定區CDR-VH1中，X2是Y；優選地，所述互補決定區CDR-VH1中，X2是L；優選地，所述互補決定區CDR-VH2中，X1是Q；優選地，所述互補決定區CDR-VH2中，X1是D；優選地，所述互補決定區CDR-VH2中，X1是N；優選地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是Q，X2是V；優選地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是Q，X2是F；優選地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是Q，X2是Y；優選地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是N，X2是V；優選地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是N，X2是F；優選地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是N，X2是Y；優選地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是R，X2是V；優選地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是R，X2是F；優選地，所述互補決定區CDR-VH3中，X1是R，X2是Y；優選地，所述互...

【專利技術屬性】
技術研發人員：崔鵬，何志強，孟媛，鐘冬梅，
申請(專利權)人：東莞市朋志生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東,44