一種咖啡酸糖苷類化合物、其制備方法及應用技術

本發明專利技術公開了一種咖啡酸糖苷類化合物，其具有如下結構：

Caffeic acid glycoside compound, preparation method and application thereof

The invention discloses a caffeic acid glycoside compound, which has the following structure:

【技術實現步驟摘要】
一種咖啡酸糖苷類化合物、其制備方法及應用
本專利技術屬于植物化學
，具體涉及一種咖啡酸糖苷類化合物、其制備方法及應用。
技術介紹
三葉懸鉤子(RubusdelavayiFranch)又名倒鉤刺、小烏泡、刺茶、小雞腳鎖梅，為薔薇科懸鉤子屬植物，也是云南省特有的植物。三葉懸鉤子是傈僳族、怒族的常用藥，也常用來泡茶。三葉懸鉤子具有清熱解毒，除濕止痢，祛風解表，驅蛔蟲的功效；用于治療扁桃體炎，感冒，急性結膜炎，痢疾，瘡瘍，風濕性關節炎。目前，國內外對三葉懸鉤子的研究較少。段澤虎在多年的中獸醫臨床工作中，通過對數百例畜病，如乳腺炎、無名腫毒、肝癀、肝熱傳眼、肝毒、黃疸、濕毒、肚底黃、外傷炎腫、術后炎腫、血吸蟲病，弓形蟲病、驅蠅蛆等病的應用觀察和驗證，認為三葉懸鉤子在清熱解毒、除濕止痢及殺蟲方面有獨到的功效，對消炎消腫功能好而不傷元氣，是一劑難得的高效低毒的中草藥。鄭玲等從三葉懸鉤子的甲醇提取物中分離、鑒定出委陵菜酸、山奈酚等12個化學成分。本專利技術從民族藥三葉懸鉤子中分離得到了一種咖啡酸糖苷類化合物，活性研究表明該化合物具有較好的抗氧化活性，尤其是將其用作民族藥三葉懸鉤子添加劑，具有很好的清除自由基抗氧化活性的效果，對提高卷煙品質具有積極意義。目前民族藥三葉懸鉤子中發現咖啡酸糖苷類化合物的清除卷煙煙氣自由基效果還未見相關文獻報道過。
技術實現思路
本專利技術的第一目的在于提供一種咖啡酸糖苷類化合物；第二目的在于提供所述咖啡酸糖苷類化合物的制備方法；第三目的在于提供所述咖啡酸糖苷類化合物的應用，主要用于清除卷煙主流煙氣中的自由基。為實現上述目的，本專利技術采用的技術方案如下：本專利技術的第方面涉及一種咖啡酸糖苷類化合物是從民族藥三葉懸鉤子中分離得到，其分子式為C16H20O9，結構如下所示：該化合物為淺黃色粉末，命名為：順式-1-O-甲基-6-O-咖啡基-β-D-葡萄糖，英文名為：cis-1-O-methyl-6-O-caffeoyl-β-D-glucopyranose。本專利技術的第二方面涉及上述的咖啡酸糖苷類化合物的制備方法，所述咖啡酸糖苷類化合物是以民族藥三葉懸鉤子為原料，依次經浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析和高效液相色譜分離步驟制得，具體步驟為：(1)浸膏提取：將三葉懸鉤子莖和葉粉碎后用第一溶劑提取，然后除去第一溶劑得到粗提取物；(2)有機溶劑萃取：將步驟(1)得到的粗提物懸浮于水中，用第二溶劑萃取，然后除去第二溶劑，得到黑色浸膏；將黑色浸膏進行樹脂柱層析，依次用水、甲醇和丙酮低速洗脫，取甲醇洗脫液，除去甲醇得到甲醇浸膏；(3)柱層析：以氯仿與甲醇體積比1:1的混合溶劑溶解步驟(2)得到甲醇浸膏，然后吸附在200～300目的硅膠上，干法裝柱；以氯仿與甲醇的體積比為1:0,50:1,20:1,10:1,1:1的混合溶劑進行梯度洗脫；取10:1的洗脫液，除去溶劑得到洗脫樣品A；用甲醇溶解洗脫樣品A，將其吸附在RP-18上，干法柱層析，依次以5v/v％甲醇、70v/v％甲醇、85v/v％甲醇、100v/v％甲醇洗脫；取5v/v％甲醇洗脫液，除去溶劑得到洗脫樣品B；將洗脫樣品B用氯仿與甲醇體積比13:1的混合溶劑經硅膠柱反復柱層析，再用氯仿與甲醇體積比1:2的混合溶劑經SephadexLH-20柱層析，得到所述的咖啡酸糖苷類化合物及其反式異構體的混合物；(4)高效液相色譜分離：經高效液相色譜分離純化步驟(3)得到混合物，即得到所述的咖啡酸糖苷類化合物。優選地，步驟(1)所述的第一溶劑為體積濃度為70～100％的甲醇水溶液或體積濃度為90～100％的乙醇水溶液，所述提取為索氏回流提取。所述第一溶劑為甲醇體積濃度為70％以上，純甲醇也可以作為第一溶劑；乙醇體積濃度為90％以上或純乙醇也可以作為第一溶劑使用。優選地，步驟(2)所述的第二溶劑為石油醚。優選地，步驟(4)所述的高效液相色譜是以21.2×250mm，5μm的ZorbaxPrepHTGF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為278nm，流動相為體積濃度為22％的甲醇水溶液，流速為15～25ml/min，每次進樣10～100μL，收集20min的色譜峰，多次累加后蒸干得到所述的咖啡酸糖苷類化合物。本專利技術的第三方面涉及所述的咖啡酸糖苷類化合物用于具有抗氧化活性的用途。所述的咖啡酸糖苷類化合物具體用于清除卷煙煙氣中自由基中的用途。本專利技術的所述咖啡酸糖苷類化合物的制備方法的一個具體實施例如下：(1)浸膏提取：干燥的三葉懸鉤子(R.delavayiFranch)莖和葉25.0kg，粉碎后用90％MeOH加熱回流索氏提取3次(70℃，每次提取時間為4小時)，減壓蒸餾除去溶劑合并浸膏，得甲醇粗提取物；(2)有機溶劑萃取：將粗提物懸浮于15.5L的水中，以石油醚萃取(15L×3)，減壓蒸餾除去石油醚，得到黑色浸膏193.2g，進行D101大孔樹脂柱層析，依次以水(100L)、甲醇(100L)和丙酮(20L)低速洗脫，分別減壓蒸餾除去甲醇和丙酮，得到甲醇浸膏690.9g和丙酮浸膏3.9g；(3)柱層析：以氯仿:甲醇(體積比1:1)的混合溶劑(4.0L)溶解甲醇浸膏690.9g，將樣品吸附在200～300目的硅膠(2.0kg)上。干法裝柱，以體積比氯仿:甲醇(1:0；50:1；20:1；10:1；1:1，體積分別是50L、50L、50L、50L、20L)進行梯度洗脫，減壓蒸餾除去溶劑后，得到相對應洗脫樣品Fr.1(13.0g)、Fr.2(33.5g)、Fr.3(14.2g)、Fr.4(66.0g)和Fr.5(276.5g)。以甲醇溶解樣品Fr.4(66.0g)，將其吸附在RP-18上，干法柱層析，依次以體積比為5％甲醇(1.0L)、70％甲醇(4.0L)、70％甲醇(2.0L)、85％甲醇(2.0L)、100％甲醇(2.0L)洗脫，減壓蒸餾除去溶劑后，得到相對應洗脫樣品Fr.4a(9.6g)、Fr.4b-1(43.0g)、Fr.4b-2(3.3g)、Fr.4c(1.2g)、Fr.4d(1.5g)。脫樣品樣品Fr.4a(9.6g)經硅膠柱反復柱層析(氯仿:甲醇，體積比13:1)和SephadexLH-20柱層析(氯仿:甲醇，體積比1:2)得到咖啡酸糖苷類化合物及其反式異構體的混合物(19.5mg)。(4)高效液相色譜分離純化，以體積濃度為22％的甲醇水溶液為流動相，流速為20ml/min，以21.2×250mm，5μm的ZorbaxPrepHTGF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為278nm，每次進樣500μL，收集20min的色譜峰，多次累加后蒸干即得所述的咖啡酸糖苷類化合物。以上述方法制備得到的咖啡酸糖苷類化合物的結構通過以下方法進行測定：本專利技術化合物為淺黃色粉末；HR-ESI-MS顯示其準分子離子峰為355.1043[M-H]+(計算值355.1034)，結合1HNMR和DEPT譜確定其分子式為C16H20O9，不飽和度為6。13C-NMR和DEPT譜中的一組信號δC105.3(d),75.0(d),71.8(d),77.9(d),75.3(d),64.5(t)和1H-NMR譜中，δH4.29(d,J＝7.8Hz)和4.60(d,J＝11.1Hz),4.37(dd,J＝本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種咖啡酸糖苷類化合物，其特征在于，其具有如下結構：

【技術特征摘要】
1.一種咖啡酸糖苷類化合物，其特征在于，其具有如下結構：其分子式為C16H20O9，命名為：順式-1-O-甲基-6-O-咖啡基-β-D-葡萄糖。2.一種根據權利要求1所述的咖啡酸糖苷類化合物的制備方法，其特征在于，所述咖啡酸糖苷類化合物以三葉懸鉤子為原料，經浸膏提取、有機溶劑萃取、柱層析和高效液相色譜分離步驟制得，具體步驟為：(1)浸膏提取：將三葉懸鉤子的莖和葉粉碎后用第一溶劑提取，然后除去第一溶劑得到粗提取物；(2)有機溶劑萃取：將步驟(1)得到的粗提物懸浮于水中，用第二溶劑萃取，然后除去第二溶劑，得到黑色浸膏；將黑色浸膏進行樹脂柱層析，依次用水、甲醇和丙酮洗脫，收集甲醇洗脫液，除去甲醇得到甲醇浸膏；(3)柱層析：以氯仿與甲醇體積比1:1的混合溶劑溶解步驟(2)得到的甲醇浸膏，然后吸附在200～300目的硅膠上，干法裝柱；以氯仿與甲醇的體積比為1:0,50:1,20:1,10:1,1:1的混合溶劑進行梯度洗脫；收集10:1的洗脫液，除去溶劑得到洗脫樣品A；用甲醇溶解洗脫樣品A，將其吸附在RP-18上，干法柱層析，依次以5v/v％甲醇、70v/v％甲醇、85v/v％甲醇、100v/v％甲醇洗脫，收集5v/v％甲醇洗脫液，除去溶劑得...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李振杰，朱瑞芝，劉志華，司曉喜，楊光宇，王昆淼，張鳳梅，王文元，王凱，唐石云，申欽鵬，劉春波，蔣薇，尤俊衡，何沛，張玲，蘇鐘璧，
申請(專利權)人：云南中煙工業有限責任公司，
類型：發明
國別省市：云南,53