血液和尿液檢驗方法技術

本發明專利技術提供了一種檢驗培養基，其中包含檢驗微生物、指示劑和以離子化形式存在的金屬，其中，所述金屬的化合價至少為２，所述金屬的濃度在０．００１Ｍ至１Ｍ之間。此外，本發明專利技術還提供了用于測定抗生素存在情況的方法，其特征在于，向所述檢驗培養基和／或所述流體樣品中加入金屬鹽。最后，本發明專利技術還提供了適于測定流體中是否存在抗生素的試劑盒。（*該技術在2024年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及一種新穎的方法，用于對尿液和血液中是否存在抗微生物藥物殘余進行快速探測。
技術介紹
抗微生物藥物不僅僅被應用為藥物治療，其還廣泛用作為獸用藥物中的生長促進物質。在現代農業中，獸用藥物作為飼料添加劑的合法使用是常見的應用。這些飼料添加劑防止動物生病，增強其生長或者增強飼料的效率。化合物可被加入到動物的飼料或飲用水中。在一些國家，允許通過注射例如生長促進物質的施予方法，由此增加了人類食物中抗微生物藥物的含量。當然，獸用藥物的非法使用也是存在的。食物中抗微生物藥物的存在日益成為消費者關心的問題。由抗生素導致的過敏反應和對人類腸道菌群的影響是公知的。另一個議題是具有抗性的細菌的發展。人們公知，抗生素的濫用(即，不需要藥物處理時，或不完善的療程中施用)是抗生素抗性發展的最重要的原因。此外，抗微生物化合物在食物中的存在也導致了具有抗藥性的細菌的增加。人類病原性微生物由此可以發展出對作為飼料添加劑和在人類藥物中使用的抗微生物制劑的抗性。在飼料中使用抗生素作為生長促進劑的另一缺點在于，抗生素會對發酵肉類產品(例如，香腸)的生產過程造成負面影響，這是由于其會抑制起始培養物。大多數獸用藥物是通過來自屠宰動物的肉類，或者通過動物產品(例如奶和蛋)進入到人類食物鏈中的。對屠宰動物、動物產品和食物產品中抗微生物藥物的存在的控制，是食物工業的重要議題。在大多數國家，已經建立起了關于新鮮肉類和肉類產品中最大殘余的限制或容許量水平。對于不被允許的化合物而言，其容許量為零，此類物質不應存在于動物產品中。對于大多數藥物而言，要確定其停藥(withdrawl)期。這是最后一次服用至屠宰時間之間的最短的時期。在該時期內，藥物殘余應降低至低于最高殘余限量的水平。但是，在一些情況下，甚至在停藥期后，在動物中仍然可能存在過高的藥物濃度。這可能是由于天然的個體代謝差異導致的，或者是由于疾病使得藥物的排出過程被干擾。最后，在停藥期內可能并未正確應用適當的技術。在大多數國家，關于食物產品中獸用藥物殘余的立法是通過官方控制程序來維持的。通常，政府機構會對一定比例的屠宰動物進行關于獸用藥物殘余的存在情況的檢查。此外，屠宰場或超市也會檢查生肉、肉類產品以及器官，例如腎和肝。雖然最重要的抗微生物藥物中的很多都是通過尿液排泄的，但是目前尿液還很難用作為底物以檢測屠宰動物中是否存在抗微生物藥物殘余。從尿液排泄出去的抗微生物動物藥物的例子是，β-內酰胺類，例如阿莫兩林、氨芐青霉素、青霉素G和青霉素V，四環素類，例如氯四環素和氧四環素，氨基糖苷類，例如慶大霉素和鏈霉素，以及磺胺類，例如磺胺脒(sulfamidine)。尿液中抗微生物化合物的量是在動物可食用部分(例如，肌肉組織和肝)中抗微生物化合物水平的指示。容易理解，對尿液的檢測提供了很大的好處。對于很多種動物來說，可以相當簡單地獲取尿液樣品，因為很多動物在尿液排泄期間具有特定的地點。用尿液作為樣品來檢測肉類中抗微生物藥物的存在情況，使得動物可在屠宰前被檢測。這向農民提供了下述可能性檢查停藥期是否如期待的一樣已完成了。如果不的話，農民能決定在將動物運送至屠宰場之前等待數天。在屠宰之后再行確定動物是否是抗生素陽性的情況下，造成的經濟損失會很大。相當明顯，如果動物在被屠宰之前而不是之后被檢測，用于探測人類食物鏈中抗微生物藥物殘余的整個控制系統將更為有效。或者，動物的血液樣品可被用于測定屠宰動物中抗微生物藥物殘余是否存在。當然，尿液和血液樣品也可在對動物進行屠宰之后獲得。在那種情況下，為獲得樣品，有價值的肉類部分不必被破壞。可以使用微生物抑制檢測(例如，瓊脂擴散檢測)來探測抗微生物劑的殘余。此類方法主要用于檢測奶和肉類流體，其被描述于GB A1467439、EP 0005891、DE 3613794、CA 2056581、EP 0285792和US5,494,805中。這些說明書都涉及到其中使用檢測生物(test organism)的即用型檢測。大多數情況下，檢測生物被置于瓊脂培養基中，所述培養基可以含有指示劑、緩沖液、營養物和用于以正面或負面方式改變對某些抗微生物化合物的靈敏度的物質。合適的檢測生物是Bacillus、Streptococcus和/或Escherichia coli的菌株。通常，檢測的原則是，當抗細菌化合物以足以抑制檢測生物生長的濃度存在于樣品中時，酸/堿或氧化還原指示劑的顏色會保留，而不存在對檢驗生物的生長的抑制時，伴隨有能改變指示劑顏色的代謝產物的形成。目前可獲得的檢驗方法適于對多種不同種類樣品中的抗微生物劑殘余進行探測。但是，這些檢驗方法存在有如下問題由于存在干擾物質，無法對尿液和血液中的抗微生物劑殘余進行探測。這些物質會干擾檢驗，從而導致假陽性的結果。制備尿液和血液樣品的一些方法是已知的。最容易的方法是用水稀釋樣品(至少三倍)。但是，明顯地，對樣品的稀釋會導致靈敏度以同樣的因子降低。將每份尿液或血液樣品的pH調節至某個值，可以部分消除樣品間的差異。在使用尿液的情況下，pH可以相差很多。這些波動可在物種間、同一物種的不同動物間以及對于個體動物來說某天與某天之間觀察到。例如，由于飼料和需要獲得尿液樣品的時間的不同，pH可以在酸性和堿性的之之間相當強烈地變動。但是，此類方法在實踐中是不可用的，因為在農民所在地對尿液樣品進行檢驗是最方便的。在這種情況下，測量出精確的pH，以及用酸性或堿性溶液將樣品滴定至某個pH值太過復雜。在該方面，Erasmuson et al.(Analyst 123，2497-2499(1998))已經提出，通過酸處理至5.5，可在分析前從尿液樣品中去除重碳酸鹽。該方法的缺點在于，需要進行很多操作，例如加入若干份酸、測量pH值以及允許二氧化碳產生，并且，樣品由此會被稀釋，從而降低了靈敏度。此外，還觀察到，對于大多數樣品來說，調節pH值并不能給出令人滿意的溶液，因為假陽性結果仍然存在。最后還有，通過調節pH，主要的缺陷又是對樣品的稀釋。可以得出結論迄今為止，還無法獲得用于探測尿液和血液樣品中抗微生物劑殘余的合適的檢驗方法。目前的方法都不可靠、消耗時間并且可能導致假陽性結果。
技術實現思路
本專利技術的目的之一是，提供一種經過改進的檢驗培養基，以及提供一種用于在流體，特別是血液和尿液，中探測抗生素的方法。令人驚奇地，我們發現，當將金屬鹽用于檢驗培養基時，能夠獲得實質上的改進。為達到此目的，本專利技術提供了一種檢驗培養基，其中包括檢驗微生物、指示劑和以離子化形式存在的金屬，其中，所述金屬的化合價至少為2，所述金屬的濃度在0.001M至1M之間。此外，本專利技術提供了探測流體中抗生素存在情況的方法，所述方法包括如下步驟(a)將所述流體的樣品與包含檢驗微生物和指示劑的檢驗培養基相接觸；(b)培養所述檢驗微生物一段時間，以使得在沒有抗生素存在于所述流體樣品中的情況下，所述檢驗微生物得以生長；以及(c)用所述指示劑探測所述檢驗微生物的生長或對其生長的抑制，其特征在于，向所述檢驗培養基和/或所述流體樣品中加入了金屬鹽，其中，所述金屬的化合價至少為2，并且所述金屬鹽在20℃時在水中具有至少0.02M的溶解度。此外，本專利技術還提供了一種試劑盒，其適用于對流體中的抗生素進行探測，所述試劑盒包括(a本文檔來自技高網...

【技術保護點】
檢驗培養基，其中包含檢驗微生物、指示劑和以離子化形式存在的金屬，其中所述金屬的化合價至少為２，所述金屬的濃度在０．００１Ｍ至１Ｍ之間。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：埃迪特瑪達露西雅格吉帕，雅各布斯斯塔克，
申請(專利權)人：帝斯曼知識產權資產管理有限公司，
類型：發明
國別省市：NL[荷蘭]