雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗制造技術

雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗，它是用因雞葡萄球病死亡雞之肝臟，在血液瓊脂平板上選取的黃色ＣＴＱＳ－１菌株，經２．５％葡萄糖牛肉湯培養基培養，制成３００億／毫升的種子菌液；再將種子菌液接種到０．２５％葡萄糖普通營養瓊脂板上培養，然后用生理鹽水沖洗菌苔，制成增菌菌液；經滅活、離心分離、去上清、制成８００億／毫升的滅活菌液；最后以１∶１加入由白油、司班、吐組成的油乳劑，即成菌苗，該菌苗具有良好的免疫效果。（*該技術在2008年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及雞病菌苗制備。隨著養雞事業的發展和雞場規模的擴大，雞疫病的防治日顯重要，常見的雞霍亂等已得到基本控制。但是，自1984年以來，雞葡萄球菌病逐漸發展，成為我國許多養雞場危害最大的病疫。雞葡萄球菌病都見于90日齡以下的雞，對40～60日齡的雞危害尤為嚴重，其發病死亡率達20～50%;尤其麻煩的是經投藥治療后的雞極易舊病復發，而且延續時間較長，嚴重影響雞的成活，給雞場造成重大的經濟損失。雞葡萄球菌病癥狀及其危害(一)病癥①病雞胸腹部、大腿內側、翅膀背側等大塊脫毛，表皮水腫甚至破潰;②剖檢時，皮下濕潤充血，有的皮下有數量不等的黃色或粉紅色膠凍狀液體，胸部及大腿內側有彌漫性出血班點或條紋;③肝臟腫大，有黃色條紋，有的肝臟變黃或者呈淡紅色。(二)危害①雞發病后死亡嚴重，投藥后很易產生抗藥性，療效明顯降低，有的雞經治療后又復發;②在雞病流行時，容易引起人的疾病，在投大量藥物后，人和雞都會產生抗藥性。目前，由于金黃色葡萄球菌噬菌體分型相當復雜，技術尚末成熟，市場沒有對雞葡萄球菌病防治有效的菌苗。本專利技術旨在提供一種制苗成本低廉、免疫期長(2.5～3個月)的、且無不良反應的雞葡萄球菌病菌苗，以提高幼雞成活率和雞場人員健康水平。本專利技術是這樣實現上述目的的本人從長期的觀察和實驗發現金黃色葡萄球菌菌型與菌株的血漿凝固酶有至為密切，目前供分型用噬菌體僅對血漿凝固酶陽性菌株敏感，不裂解凝固酶陰性菌株。故決定采用血漿凝固酶陽性金黃色葡萄球菌菌株作為生產菌苗用菌種，利用自身生物反饋試制雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗。菌苗的制備方法和步驟如下(一)選取CTQS-1菌株，制備菌苗生產用的種子菌液從40～90日齡的葡萄球菌病雞或因該病死亡之雞摘取肝臟，在血液瓊脂平板(或普通營養瓊脂平板)劃線培養，選取其中的金黃色菌落，經如下檢驗確為CTQS-1株者作為生產菌苗的菌株。CTQS-1菌株的驗證方法①血漿凝固酶試驗為陽性;②在結晶紫瓊脂平板上的菌苔為土黃色;③高鹽甘露醇瓊脂平板上的菌落為桔黃色;④在血液瓊脂平板上菌落為金黃色，有溶血環產生;○糖發酵試驗時，能在1～2天內發酵葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、甘露醇、產生酸而無氣體產生而不能發酵木糖、已矛醇;與上述結果符合時，該菌株必為CTQS-1株。將CTQS-1菌株洗入2.5%葡萄糖牛肉湯培養基培養，制成濃度約為300億個/毫升的種子菌液備用。(二)制備增菌菌液將步驟(一)所制的種子菌液接種到0.25%葡萄糖普通營養瓊脂平板上，在37℃下培養18～20小時后，用無菌生理鹽水沖洗菌苔，沖下的菌苔即為制苗用的增菌菌液。(三)滅活與無菌試驗在由步驟(二)所制得的增菌菌液中，以千分之六的比例加入福爾馬林溶液，在37℃下經24小時滅活。將經滅活的菌液接種在血清肉湯及普通營養瓊脂培養基中，經5～7天培養，結果無菌生長者為合格。(四)配制油乳劑菌苗和治療用注射液將由步驟(三)所得的滅活菌液用離心機分離，棄去上清，制成濃度為800億個/毫升的滅活菌液。將此滅活菌液以1∶1的比例與油乳佐劑混合，并經高速勻漿乳化，即成預防用“雞葡萄球菌油乳劑滅活菌菌苗”;所述油乳佐劑最好用白油、司班、吐溫混合制劑，其中白油、司班、吐溫在混合制劑中的重量比以90∶7.6∶2.4為佳。將800億個/毫升的滅活菌液制成400億個/毫升的水劑，即成治療用注射液。實施例與效果本人按上述方案和步驟，多次分別制備了預防用“雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗和治療用水劑。其安全性與疫力試驗如下①安全試驗取25日齡雞11只，每只注射油乳劑菌苗2毫升，觀察一周，結果無任何不良反應。②免疫效力試驗取35日齡健康雞40只，以每組十只分為第1、2、3、4組，每一組每只雞分別注射菌苗(油乳劑)0、0.3、0.4、0.5毫升，16天后將各組雞進行攻毒，每只雞注射15億個金黃色葡萄球菌(CTQS-1株)。一周后，注射0毫升的對照組死亡5只，4只發病，一只無病;第2組有8只健活，1只發病，1只胸部水腫;第3組與第4組均是9只健活，1只發病。③免疫期試驗挑取35日齡健康雞24只，其中12只注射0.5毫升油乳菌苗作為免疫組，另12只雞作為對照組，每月對二組雞的三只雞進行攻毒。結果第一個月攻毒后，免疫組3只雞都健活;對照組有1只死亡，1只發病，1只健活。第二個月攻毒后，免疫組3只雞都健活;對照組2只死亡，1只健活。第三個月攻毒后，免疫組3只雞都健活;對照組有2只發病、1只健活。第四個月攻毒后，免疫組3只雞都健活;對照組有2只健活，1只發病。④免疫力產生時間對免疫雞攻毒試驗，證明本苗免疫力產生時間為注射菌苗的第7天開始。經采血、分離血清作試管凝集試驗，證明在接種菌苗的雞在第七天開始出現凝集抗體，效價為1∶2～1∶8;到第14天，凝集抗體上升到1∶16～1∶32;而對照雞的凝集抗體一直為零。實驗證明本菌苗毒性小，對雞無不良影響，使用安全;凡注射菌苗的雞都有較強的免疫力，保護率約為90%;本苗的免疫期效為2.5～3個月，有效地控制了葡萄球菌病對90日齡以下的雞的危害;本專利技術的目的完全得到了實現。用濃度為400億個/毫升的治療注射液，以每隔1天注射1次，連續3次，每次劑量為200億個，對患有葡萄球菌病的雞具有明顯的治療效果，愈者無反復。權利要求1.一種雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗，其特征在于本菌苗采用血漿凝固酶陽性金黃色葡萄球菌菌株作為生產用菌種，菌苗的制備方法和步驟如下①選取CTQS-1菌株，制備菌苗生產用的種子菌液，②制備增菌菌液，③滅活與無菌試驗，④配制油乳劑菌苗和治療用注射液。2.根據權利要求1所述的雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗，其特征在于所述CTQS-1菌株是用40～90日齡的葡萄球菌病雞或死雞肝臟，在血液瓊脂平板(或普通營養瓊脂平板)上劃線培養，選取其中金黃色菌落，經檢驗確為CTQS-1株者作為生產菌苗用的菌株;所述的種子菌液是將CTQS-1菌株洗入2.5%的葡萄糖牛肉湯培養基培養的濃度約為300億個/毫升的種子菌液。3.根據權利要求1所述的雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗，其特征在于所述的制備增菌菌液是將步驟(一)所制的種子菌液接種到0.25%葡萄糖普通營養瓊脂板上，在37℃下培養18～20小時后，用無菌生理鹽水沖洗菌苔而獲得的。4.根據權利要求1所述的雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗，其特征在于滅活是將在步驟(二)所制得的增菌菌液中以千分之六的比例加入福爾馬林溶液，在37℃下經24小時滅活。5.根據權利要求1所述的雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗，其特征在于所述的配制油乳劑菌苗和治療注射液是將步驟(三)所得的滅活菌液，用離心機分離，棄去上清，制成濃度為800億個/毫升的滅活菌液，然后將此菌液以1∶1的比例與油乳劑混合并經高速勻漿而制成的;治療用注射液則是其濃度為400億個/毫升的水劑。6.根據權利要求1或5所述的雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗，其特征在于所述的油乳劑佐料最好用白油、司班、吐溫混合制劑，其中白油、司班、吐溫在混合液制劑中的重量比以90∶7.6∶2.4為佳。全文摘要雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗，它是用因雞葡萄球病死亡雞之肝臟，在血液瓊脂平板上選取的黃色CTQS-1菌株，經2.5％葡萄糖牛肉湯培養基培養，制成300億/毫升的種子菌液；再將種子菌液本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種雞葡萄球菌油乳劑滅活死菌菌苗，其特征在于：本菌苗采用血漿凝固酶陽性金黃色葡萄球菌菌株作為生產用菌種，菌苗的制備方法和步驟如下：①選取ＣＴＱＳ－１菌株，制備菌苗生產用的種子菌液，②制備增菌菌液，③滅活與無菌試驗，④配制油乳劑菌苗和治療用注射液。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：康利文，
申請(專利權)人：康利文，
類型：發明
國別省市：12[中國|天津]