本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種囊膜病毒保護劑及其制備方法，主要由卵磷脂、牛血清蛋白、蔗糖、生理鹽水按比例制備而成。使用時，該保護劑以100：1~20：1體積比添加于病毒保存液內(nèi)，保護活的囊膜病毒，降低病毒在保存過程中的死亡率，延長病毒的有效保存時間。本發(fā)明專利技術(shù)提供了卵磷脂在囊膜病毒保護方面的一種新用途，利用卵磷脂與蛋白質(zhì)結(jié)合后對蛋白質(zhì)分解的拮抗作用、對病毒囊膜脂質(zhì)分解的拮抗作用，保護病毒囊膜及衣殼免于降解，較傳統(tǒng)的蛋白類和糖類保護劑均可大大延長其存活時間。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種囊膜病毒保護劑及其制備方法
本專利技術(shù)涉及一種囊膜病毒保護劑及其制備方法，涉及動物病毒學及疫苗學，屬于生物制品保護
技術(shù)介紹
病毒是一類非細胞形態(tài)，靠細胞內(nèi)寄生增殖的微生物，由核酸分子（DNA或RNA）與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等構(gòu)成。人類、動物、植物的大量疾病都是由病毒感染導致的，大量的研究已經(jīng)表明，嚴重威脅人類和動物健康的傳染性疾病，甚至某些腫瘤，都是由病毒感染引起的。如天花病毒、艾滋病病毒、乙型肝炎病毒、SARS冠狀病毒、流感病毒、狂犬病病毒、埃博拉病毒、口蹄疫病毒等，已經(jīng)給人類生存和發(fā)展制造了巨大的威脅，甚至災(zāi)難。病毒學研究的領(lǐng)域之一，是分離獲得某些病毒并對其進行深入研究，以獲得預防或治療病毒感染的技術(shù)和手段。因為病毒只能在細胞內(nèi)寄生和增殖，所以病毒離開細胞后的最長生存時間受其自身特性和環(huán)境條件的明顯影響，從幾小時至數(shù)月不等。延長病毒在樣品以及培養(yǎng)物中的保存時間一直是病毒學研究的重要課題之一。根據(jù)病毒本身結(jié)構(gòu)的不同，可分為無囊膜病毒和有囊膜病毒兩大類，其中有囊膜病毒的感染力主要與囊膜上的特定結(jié)構(gòu)有關(guān)，而囊膜結(jié)構(gòu)容易被破壞而導致病毒去感染力。這種特性一方面有利于病毒的消毒和滅活，另一方面給其研究和利用增加了困難。有效延長囊膜病毒在培養(yǎng)物中的保存時間，可以大大降低毒種更新和保存的成本，對于病毒的理化特性、生物學性質(zhì)研究、疫苗研究等都具有極大的幫助。卵磷脂是一類提取自大豆或雞蛋的脂類物質(zhì)混合物，其構(gòu)成成分包括磷脂、膽堿、脂肪酸、甘油、糖脂等。卵磷脂可與多種蛋白質(zhì)結(jié)合，以脂蛋白形態(tài)存在。在臨床上，卵磷脂具有乳化分解油脂、清除過氧化物，減少脂肪在血管內(nèi)壁滯留時間，防止由膽固醇引起的血管內(nèi)膜損傷等作用。同時，卵磷脂也是胎兒和嬰兒神經(jīng)發(fā)育的必需品，可以促進大腦神經(jīng)系統(tǒng)與腦容積的增長、發(fā)育，是美國食品與藥物管理局（FDA）規(guī)定在嬰兒奶粉中必須添加的物質(zhì)。經(jīng)檢索卵磷脂在囊膜病毒保護方面的文件未見報道。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供了一種囊膜病毒保護劑，利用卵磷脂與蛋白質(zhì)結(jié)合后對蛋白質(zhì)分解的拮抗作用、對病毒囊膜脂質(zhì)分解的拮抗作用，保護病毒囊膜及衣殼免于降解，較傳統(tǒng)的蛋白類和糖類保護劑均可大大延長其存活時間。本專利技術(shù)進一步提供了一種囊膜病毒保護劑制備方法，使其在保存液內(nèi)免于被降解失活，延長其存活時間的制劑，并提供了該制劑的制備工藝和使用方法。本專利技術(shù)提供的一種囊膜病毒保護劑，其特征在于主要由以下原料按重量份數(shù)比制成的：卵磷脂0.5份～2份、牛血清白蛋白0.5份～2份、蔗糖2份～10份、生理鹽水100份。本專利技術(shù)所述的囊膜病毒保護劑的制備方法，其特征在于：將卵磷脂粉碎后加入生理鹽水中，在10000rpm～30000rpm條件下高速剪切制備為混懸液，再通過高壓均質(zhì)機進行均質(zhì)化，制備為均質(zhì)乳劑，然后加入牛血清白蛋白及蔗糖，充分溶解并混勻后，以0.22μm濾膜過濾除菌，即得病毒保護劑。使用時，本專利技術(shù)保護劑以100：1～20：1體積比添加于病毒保存液內(nèi)，延長病毒的存活時間。本專利技術(shù)的積極效果在于：提供了卵磷脂在囊膜病毒保護方面的一種新用途，利用卵磷脂與蛋白質(zhì)結(jié)合后對蛋白質(zhì)分解的拮抗作用、對病毒囊膜脂質(zhì)分解的拮抗作用，保護病毒囊膜及衣殼免于降解，較傳統(tǒng)的蛋白類和糖類保護劑均可大大延長其存活時間。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例，說明本專利技術(shù)的一種囊膜病毒保護劑的制備、使用方法及效果，但本
技術(shù)實現(xiàn)思路
并不僅限于實施例。實施例1稱取卵磷脂30g，壓成碎塊，置于1000ml生理鹽水內(nèi)，以高速剪切機20000轉(zhuǎn)/分剪切5-8分鐘乳化，形成均勻乳白色混懸液；以高壓均質(zhì)機在600-650bar壓力下進行均質(zhì)化；完成均質(zhì)化的卵磷脂乳液內(nèi)加入30g牛血清白蛋白和150g蔗糖，充分溶解并混勻中，定容至2000ml；無菌條件下進行0.22μm濾膜過濾，分裝至100ml無菌瓶內(nèi)，即得囊膜病毒保護劑，2-8℃保存?zhèn)溆谩嵤├?稱取卵磷脂20g，壓成碎塊，置于800ml生理鹽水內(nèi)，以高速剪切機20000轉(zhuǎn)/分剪切5-8分鐘乳化，形成均勻乳白色至淡黃色混懸液；以高壓均質(zhì)機在600-650bar壓力下進行均質(zhì)化；完成均質(zhì)化的卵磷脂乳液內(nèi)加入20g牛血清白蛋白和100g蔗糖，充分溶解并混勻中，定容至2000ml；無菌條件下進行0.22μm濾膜過濾，分裝至100ml無菌瓶內(nèi)，即得囊膜病毒保護劑，2-8℃保存?zhèn)溆谩嵤├?稱取卵磷脂10g，壓成碎塊，置于500ml生理鹽水內(nèi)，以高速剪切機20000轉(zhuǎn)/分剪切5-8分鐘乳化，形成均勻乳白色混懸液；以高壓均質(zhì)機在600-650bar壓力下進行均質(zhì)化；完成均質(zhì)化的卵磷脂乳液內(nèi)加入10g牛血清白蛋白和20g蔗糖，充分溶解并混勻中，定容至2000ml；無菌條件下進行0.22μm濾膜過濾，分裝至100ml無菌瓶內(nèi)，即得囊膜病毒保護劑，2-8℃保存?zhèn)溆谩Ｔ囼灷?囊膜病毒保護劑對狂犬病病毒的保護效果1、取狂犬病病毒弱毒SRV9株（滴度不低于107.0TCID50/ml）細胞培養(yǎng)物120ml，均分為12份，每份10ml。編號分別為1號至12號。2、12份狂犬病病毒SRV9株的處理方式和檢測方案如下：1號：不加保護劑，于室溫（20℃）保存，從0時（保存前）起，每24小時取1ml，測定病毒滴度，直至第7天；2號：不加保護劑，于2-8℃保存，從0時（保存前）起，每24小時取1ml，測定病毒滴度，直至第7天；3號：不加保護劑，于-20℃保存，從0時（保存前）起，每周取1ml，測定病毒滴度，直至第7周；4號：不加保護劑，于-70℃保存，從0時（保存前）起，每月取1ml，測定病毒滴度，直至第7個月；5號：按1%體積（0.1ml）加入實施例1制備的保護劑，于室溫（20℃）保存，從0時（保存前）起，每24小時取1ml，測定病毒滴度，直至第7天；6號：按1%體積（0.1ml）加入實施例2制備的保護劑，于2-8℃保存，從0時（保存前）起，每24小時取1ml，測定病毒滴度，直至第7天；7號：按1%體積（0.1ml）加入實施例3制備的保護劑，于-20℃保存，從0時（保存前）起，每周取1ml，測定病毒滴度，直至第7周；8號：按1%體積（0.1ml）加入實施例1制備的保護劑，于-70℃保存，從0時（保存前）起，每月取1ml，測定病毒滴度，直至第7個月；9號：按1%體積（0.1ml）加入無卵磷脂成份的保護劑，于室溫（20℃）保存，從0時（保存前）起，每24小時取1ml，測定病毒滴度，直至第7天；10號：按1%體積（0.1ml）加入無卵磷脂成份的保護劑，于2-8℃保存，從0時（保存前）起，每24小時取1ml，測定病毒滴度，直至第7天；11號：按1%體積（0.1ml）加入無卵磷脂成份的保護劑，于-20℃保存，從0時（保存前）起，每周取1ml，測定病毒滴度，直至第7周；12號：按1%體積（0.1ml）加入無卵磷脂成份的保護劑，于-70℃保存，從0時（保存前）起，每月取1ml，測定病毒滴度，直至第7個月。結(jié)論：上述12份狂犬病病毒，經(jīng)保護劑處理與對照組未處理的病毒在不同條件保存后不同時間的存活病毒滴度如表1和表2。結(jié)果顯示，按1%體積添加病毒保護劑后，在室溫、冷藏、冷凍及超低溫冷凍條件下，對狂犬病病毒的感染力較無保護劑組及添加無卵磷脂成分的保護劑組均有明顯的保護效果，病毒感染力維本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種囊膜病毒保護劑，其特征在于主要由以下原料按重量份數(shù)比制成的：卵磷脂0.5份~2份、牛血清白蛋白0.5份~2份、蔗糖2份~10份、生理鹽水100份。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種囊膜病毒保護劑，其特征在于主要由以下原料按重量份數(shù)比制成的：卵磷脂0.5份~2份、牛血清白蛋白0.5份~2份、蔗糖2份~10份、生理鹽水100份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的囊膜病毒保護劑的制備方法，其特征在于：將卵磷...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張守峰，扈榮良，劉曄，繆發(fā)明，張菲，
申請(專利權(quán))人：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：吉林,22
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