脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的應用制造技術

本發明專利技術公開了脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的應用，所述脂肪來源間充質干細胞外泌體由如下方法制備而成：(1)將剝離的脂肪組織分散于消化液中，以產生細胞懸浮液；(2)離心細胞懸浮液，以形成細胞沉淀，分離沉淀，洗滌，得到含有脂肪來源間充質干細胞的血管基質成分；(3)在體外培養體系中對ADSC進行擴增培養，收集擴增培養后的上清液進行濃縮，向濃縮后的上清液中加入外泌體提取試劑，即提取得到脂肪來源間充質干細胞外泌體。本發明專利技術的脂肪來源間充質干細胞外泌體可以促進白色脂肪米色化，以實現產熱驅動的能量消耗，從而抵抗肥胖的發生發展。

Application of adipose derived mesenchymal stem cell extracellular body in preparing medicine for treating obesity

The present invention discloses adipose derived mesenchymal stem cells exosomes in preparation for the application of obesity drugs, the adipose derived mesenchymal stem cells by the exosome preparation method is as follows: (1) and will be stripped of adipose tissue dispersed in the digestive juice, to produce a cell suspension; (2) centrifugal suspension cells to form a cell separation precipitation, precipitation, washing, contain adipose derived mesenchymal stem cells in the vascular matrix; (3) in the training of the ADSC system were amplified in vitro, collect the supernatant after amplification by concentrating, adding to the concentrated supernatant after extracting reagent exosomes, which is extracted from adipose derived mesenchymal stem cells exosomes. The adipose derived mesenchymal stem cells of the present invention can promote white fat to be colored so as to achieve energy expenditure driven by heat production, thereby resisting the occurrence and development of obesity.

【技術實現步驟摘要】
脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的應用
本專利技術涉及生物醫藥
，具體涉及脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的應用。
技術介紹
肥胖是指由于能量過剩導致脂肪在體內的過度堆積所致的慢性疾病。肥胖可分為單純性肥胖和繼發性肥胖，通常意義上的肥胖指的是單純性肥胖，主要是由于能量攝入大于消耗，導致多余能量在體內以脂肪形式過度聚集而成。繼發性肥胖是伴隨某些疾病發生的，如垂體性肥胖。目前采用體重指數(bodymassindex,BMI)作為判定肥胖的標準，BMI≥25為超重，≥30視為肥胖。近年來，由于飲食結構和生活方式的改變，無論在發達國家還是發展中國家，肥胖的發病率急劇上升。據2014年世界衛生組織最新統計，中國的超重人群已超過34％。隨著肥胖發生率的增加，肥胖引發Ⅱ型糖尿病、心血管疾病甚至癌癥等慢性疾病的發病率也逐年增加。因此，肥胖是當今世界范圍內一個重要的公共健康問題，針對肥胖的干預策略是防治肥胖相關疾病的重要措施。機體內脂肪組織可分為以貯存能量為主的白色脂肪組織(肥胖主要累及部位)和以產熱方式消耗能量為主的棕色脂肪組織；而白色脂肪組織中出現表達棕色脂肪特異性解偶聯蛋白(UCP1)的米色脂肪組織，即白色脂肪米色化，可促進機體以產熱方式消耗能量，有效抵抗肥胖的發生發展。脂肪來源間充質干細胞(ADSC)存在于脂肪組織血管基質成分(SVF)中，具有自我更新和多向分化潛能。ADSC在體外可被誘導分化為脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞和內皮細胞等不同的組織細胞，是目前組織修復和再生領域的研究重點和熱點。脂肪來源間充質干細胞外泌體可以攜帶具有生物學活性的蛋白質和RNA多種物質等，并將有效成分及信息高效傳遞至受體細胞，在細胞間的信息交流中起重要作用。目前對于脂肪來源間充質干細胞的研究主要涉及在腎臟、眼底疾病中的用途(CN102048756A)、在治療勃起功能障礙的用途(CN105902568A)、在制備肝纖維化治療制劑的用途(CN103436555A)、在制備治療骨性關節炎制劑的用途(CN105748519A)、在制備肝癌化療增敏制劑中的用途(CN103451152A)等，但迄今還未有關于脂肪來源間充質干細胞及其外泌體在治療肥胖方面的報道。
技術實現思路
針對上述現有技術，本專利技術的目的提供脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的應用。本專利技術研究發現，脂肪來源間充質干細胞外泌體可以在不影響小鼠攝食量的基礎上，通過誘導白色脂肪米色化抑制小鼠的體重增加，達到治療肥胖的作用，由此提出了下述的
技術實現思路
：本專利技術的第一方面，提供脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的應用。本專利技術中，所述脂肪來源間充質干細胞外泌體由如下方法制備而成：(1)將剝離的脂肪組織分散于消化液中，以產生細胞懸浮液；(2)離心細胞懸浮液，以形成細胞沉淀，分離沉淀，洗滌，得到含有脂肪來源間充質干細胞(ADSC)的血管基質成分(SVF)；(3)在體外培養體系中對ADSC進行擴增培養，收集擴增培養后的上清液，濃縮，向濃縮后的上清液中加入外泌體提取試劑，即提取得到脂肪來源間充質干細胞外泌體。優選的，步驟(1)中，所述消化液是由KRB緩沖液和Ⅰ型膠原酶組成；更優選的，KRB緩沖液和Ⅰ型膠原酶的組成比例為1ml：2mg。優選的，步驟(2)中，離心轉速為2000rpm，離心時間為5分鐘。優選的，步驟(3)中，擴增培養的條件為：用不含外泌體的10％胎牛血清的DMEM培養基(含有bFGF)培養ADSC。優選的，步驟(3)中，所述外泌體提取試劑為Exoquick-TCTM外泌體提取試劑。本專利技術中，所述脂肪來源間充質干細胞外泌體具有TSG101、CD9、CD63和HSP90標志。優選的，本專利技術中，所述脂肪來源間充質干細胞外泌體來源于小鼠附睪處脂肪組織。本專利技術的第二方面，提供包含上述脂肪來源間充質干細胞外泌體的組合物在制備治療肥胖藥物中的應用。本專利技術的第三方面，提供脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備促進白色脂肪米色化的生物制劑中的應用。本專利技術的有益效果：本專利技術首次提出了脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的新用途。本專利技術研究發現，ADSC來源外泌體可以促進白色脂肪米色化，以實現產熱驅動的能量消耗，從而抵抗肥胖的發生發展，本專利技術的ADSC來源外泌體可以在不影響能量攝入的基礎上抑制體重增加，達到治療肥胖的作用，從而可作為用于肥胖治療的新的生物制劑。此外，本專利技術還提供了上述脂肪來源間充質干細胞外泌體的制備方法，操作簡單可行。附圖說明構成本申請的一部分的說明書附圖用來提供對本申請的進一步理解，本申請的示意性實施例及其說明用于解釋本申請，并不構成對本申請的不當限定。圖1：脂肪來源間充質干細胞外泌體的透射電鏡圖；圖中，白色標尺為150nm。圖2：外泌體標志western-blot的鑒定結果。圖3：體重曲線的變化。圖4：外泌體干預治療結束后體重的統計圖。圖5：外泌體干預治療時攝食量的統計圖。圖6：外泌體干預治療結束后各個部位脂肪的照片。圖7：脂肪重量的統計圖。圖8：白色脂肪米色化中UCP1的表達；圖中A：小鼠附睪處脂肪組織中UCP1的表達；圖中B：下肢皮下脂肪組織中UCP1的表達。圖9：肝臟重量的統計圖。具體實施方式應該指出，以下詳細說明都是例示性的，旨在對本申請提供進一步的說明。除非另有指明，本文使用的所有技術和科學術語具有與本申請所屬
的普通技術人員通常理解的相同含義。需要注意的是，這里所使用的術語僅是為了描述具體實施方式，而非意圖限制根據本申請的示例性實施方式。如在這里所使用的，除非上下文另外明確指出，否則單數形式也意圖包括復數形式，此外，還應當理解的是，當在本說明書中使用術語“包含”和/或“包括”時，其指明存在特征、步驟、操作、器件、組件和/或它們的組合。術語說明：肥胖：由于能量過剩導致脂肪在體內的過度堆積所致的慢性疾病。ADSC(adipose-derivedmesenchymalstemcell)：脂肪來源間充質干細胞，存在于脂肪組織的血管基質成分中，是脂肪組織中的脂肪細胞前體，具有自我更新和多向分化潛能。外泌體(exosome)：是細胞分泌外排的一類囊泡結構，直徑約為30-120nm，內含多種蛋白和RNA物質，可通過旁分泌或者內分泌方式作用于相應的組織或細胞，是介導細胞間信息傳遞的一個重要介質。正如
技術介紹
所介紹的，現有技術中還未有關于脂肪來源間充質干細胞及其外泌體在治療肥胖的報道。基于此，本專利技術提出了一種脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的應用。在本申請的一種實施方案中，通過建立飲食誘導高脂肥胖模型，進行ADSC來源外泌體干預，分別檢測外泌體干預后小鼠的體重、攝食量、不同部位脂肪組織的重量變化、小鼠附睪處脂肪組織以及下肢皮下脂肪組織中UCP1的表達以及小鼠肝臟的重量。綜上，通過上述研究發現：ADSC來源外泌體能減輕飲食誘導肥胖小鼠的體重，以及各個部位的脂肪重量，起到治療肥胖的作用。為了使得本領域技術人員能夠更加清楚地了解本申請的技術方案，以下將結合具體的實施例詳細說明本申請的技術方案。本專利技術實施例中所用的試驗材料均為本領域常規的試驗材料，均可通過商業渠道購買得到。實施例1：ADSC的提取與分離⑴脂肪組織的分離：選本文檔來自技高網...

【技術保護點】
脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的應用。

【技術特征摘要】
1.脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療肥胖藥物中的應用。2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述脂肪來源間充質干細胞外泌體由如下方法制備而成：(1)將剝離的脂肪組織分散于消化液中，以產生細胞懸浮液；(2)離心細胞懸浮液，以形成細胞沉淀，分離沉淀，洗滌，得到含有脂肪來源間充質干細胞的血管基質成分；(3)在體外培養體系中對ADSC進行擴增培養，收集擴增培養后的上清液，濃縮，向濃縮后的上清液中加入外泌體提取試劑，即提取得到脂肪來源間充質干細胞外泌體。3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，步驟(1)中，所述消化液是由KRB緩沖液和Ⅰ型膠原酶組成；優選的，KRB緩沖液和Ⅰ型膠原酶的組成比例為1ml：2mg。4.如權利要求2所述的應用，其特征在于，步驟(2)中，離心轉速為20...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王群，趙匯，張利寧，郭春，朱法良，潘真真，
申請(專利權)人：山東大學，
類型：發明
國別省市：山東,37