青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法與用途技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供一種青占魚內(nèi)臟中維生素A?D提取物的制備方法，步驟為：1）預(yù)處理；2）酶解；3）萃取；4）純化。有益效果為：復(fù)合酶聯(lián)合酶解，并有多種酶激活劑激活復(fù)合酶，酶解速度快且酶解更徹底；微波助溶，提高維生素A、D的溶出率；用氯仿和乙醇的混合液去除蛋白質(zhì)，用乙醇復(fù)溶純化去除油脂，最后得到的維生素A、D提取物的提取率高，純度高，活性強(qiáng)；操作簡單，成本低廉，經(jīng)濟(jì)價值高，制備的維生素A、D提取物可用于保健品或藥物或食品的制備。

Method for preparing vitamin AD extract from green viscera of fish and its use

The present invention provides a method for preparing green, D extract vitamin A fish offal comprises the following steps: 1) 2) pretreatment; enzymatic hydrolysis; extraction; 3) 4). The beneficial effect of compound enzyme combined with enzyme, and a variety of enzyme activator compound enzyme, enzymatic hydrolysis and enzymolysis speed more thoroughly; microwave solubilization, improve the dissolution rate of vitamin A and vitamin D; removal of proteins using a mixture of chloroform and ethanol, ethanol solution purification to remove grease, the extraction of vitamin A, D extract finally obtained high rate, high purity, high activity; simple operation, low cost, high economic value, vitamin A, D extract preparation can be used for health care products or food or drug preparation.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法與用途
本專利技術(shù)涉及維生素提取
，具體是青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法與用途。
技術(shù)介紹
維生素A又稱視黃醇或抗干眼病因子，是一個具有脂環(huán)的不飽和一元醇，包括動物性食物來源的維生素A1、A2兩種，是一類具有視黃醇生物活性的物質(zhì)。維生素A1多存于哺乳動物及咸水魚的肝臟中，維生素A2常存于淡水魚的肝臟中。由于維生素A2的活性比較低，所以通常所說的維生素A是指維生素A1。維生素D為固醇類衍生物，具抗佝僂病作用，又稱抗佝僂病維生素。目前認(rèn)為維生素D也是一種類固醇激素，維生素D家族成員中最重要的成員是VD2（麥角鈣化醇）和VD3（膽鈣化醇)。維生素D均為不同的維生素D原經(jīng)紫外照射后的衍生物。青占魚內(nèi)臟中存在維生素A、D等對人類有益的微量元素。但是，一般食用青占魚，都會把內(nèi)臟丟棄，這會造成能源浪費(fèi)。在目前檢測食物中維生素A方法中，是先將食物樣品加入適量堿液進(jìn)行皂化處理，使樣品中的脂肪與堿結(jié)合形成皂化物，并經(jīng)水洗除皂而去除脂類物質(zhì)，再用乙醚對非皂化樣品中的維生素A進(jìn)行提取。將乙醚提取液經(jīng)無水硫酸鈉濾去殘留水分后，先置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)減壓蒸餾除去大部分乙醚，再用氮?dú)獯蹈蓺堄嗟囊颐押螳@得維生素A提取物，最后用乙醇將維生素A提取物進(jìn)行溶解提純。這種方法需要先將食物樣品進(jìn)行皂化處理，再用乙醚進(jìn)行提取，還需對乙醚提取液進(jìn)行脫水處理和用乙醇進(jìn)行溶解提純，存在提取過程復(fù)雜，用時較長，容易導(dǎo)致維生素A的氧化破壞等諸多不足。為了避免皂化過程的不利影響，也有方法省略了皂化的過程，采用將樣品中加入無水硫酸鈉，在研缽進(jìn)行研磨粉碎以吸收樣品中的水分，然后用乙醚或正己烷反復(fù)提取。將提取液經(jīng)氮?dú)獯蹈珊螅儆眉状既芙饧兓S生素A。此種方法雖然省略了皂化過程，但存在樣品中的水分去除不完全，并可因此而影響乙醚等有機(jī)溶劑對維生素A提取效率的不足。而且在目前應(yīng)用的方法中，都是采用乙醚或正己烷或甲醇作為提取溶劑，存在提取溶劑毒性大、易揮發(fā)，容易對人體產(chǎn)生損傷的危險。授權(quán)公告號為CN103852367B的中國專利技術(shù)專利，公開了一種食物中維生素A檢測分析的提取處理方法。首先將食物樣品進(jìn)行冷凍干燥以去除水分，再將冷凍干燥的食物樣品加入氯仿乙醇混合液并高速勻漿，再將勻漿樣品離心并收取位于下層的氯仿提取液，用氮?dú)獯蹈商崛∫汉蠹尤胍掖际咕S生素A復(fù)溶純化，復(fù)溶步驟中采用超聲波助溶，以使維生素A溶解提取完全。該方法的提取不需要傳統(tǒng)方法中的堿液皂化去脂和減壓蒸餾等過程，也克服了加入無水硫酸鈉研磨吸水所存在的食物樣品除水不完全等問題，具有操作簡便、時間縮短，提取效率高等特點(diǎn)，也克服了應(yīng)用乙醚或正己烷或甲醇為提取溶劑的危險性。由于乙醇的水溶性，因而即便提取樣品中有微量水，也不會對結(jié)果產(chǎn)生影響。但該方法的提取率和提取的維生素A的純度及生物活性仍舊有提升的空間。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種能溫和高效的提取維生素A、D，提取的維生素A、D純度高，活性高，綠色安全的青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法。本專利技術(shù)針對
技術(shù)介紹
中提到的問題，采取的技術(shù)方案為：青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法，具體操作步驟：1）預(yù)處理：將青占魚內(nèi)臟清洗干凈，高速勻漿，高速研磨，破壞青占魚內(nèi)臟細(xì)胞，使細(xì)胞中維生素A、D流出，內(nèi)臟顆粒變小，比表面積增大，加快反應(yīng)速度；2）酶解：在勻漿中加入蒸餾水和酶解劑，酶解劑成份及其重量分為：4~8份胰蛋白酶，2~3份中性蛋白酶，0.5~1.5份木瓜蛋白酶，0.3~0.6份氯化鈣，0.02~0.05份半胱氨酸和0.01~0.04份糖醇乙酸酯。酶解條件溫和，不會破壞維生素A、D的結(jié)構(gòu)，使其保持較高的活性；復(fù)合酶聯(lián)合酶解，并有多種酶激活劑激活復(fù)合酶，酶解速度快且酶解更徹底，提高維生素A、D的提取率；水浴加熱，水浴溫度為40~55℃，混合液pH為6.5~7.5，酶解時間,0.1~0.3h。微波助溶，微波功率為100~300W，頻率為400~800MHz，作用時間為10~25min。通過高頻電磁波穿透內(nèi)臟細(xì)胞，微波能迅速轉(zhuǎn)化為熱能使細(xì)胞內(nèi)部溫度快速上升,當(dāng)細(xì)胞內(nèi)部壓力超過細(xì)胞壁承受能力,細(xì)胞破裂,細(xì)胞內(nèi)維生素A、D自由流出。攪拌，攪拌速率為100~400r/min。沸水浴滅酶10~15min，真空冷凍干燥1~4h，使酶解液中的殘余水分含量低于1%；3）萃?。杭尤肼确潞鸵掖蓟旌弦海确屡c乙醇體積比為1:1~3:1，攪拌，避光浸提1~3h，加入生理鹽水，氯仿和乙醇能使蛋白質(zhì)變性而不溶于水，從而去除蛋白質(zhì)。離心，取下層氯仿提取液，用氯仿乙醇混合液對沉淀重復(fù)提取，合并提取液；4）純化：用氮?dú)鈱⒑喜⑻崛∫捍蹈?，加入乙醇?fù)溶純化，乙醇中溶有0.02~0.06%的硫酸鎂和0.05~0.15%大豆皂醇B。乙醇中加入硫酸鎂和大豆皂醇B能增大維生素A、D在乙醇中的溶解度，油脂不溶于乙醇，用乙醇復(fù)溶純化，能去除油脂，得到純度高的維生素A、D提取物。用途：青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物用于保健品或藥物或食品的制備。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于：酶解條件溫和，不會破壞維生素A、D的結(jié)構(gòu)，使其保持較高的活性；糖醇乙酸酯與復(fù)合酶聯(lián)合酶解，在多種酶激活劑激活復(fù)合酶，酶解速度快且酶解更徹底，提高維生素A、D的提取率；通過高頻電磁波穿透內(nèi)臟細(xì)胞，微波能迅速轉(zhuǎn)化為熱能使細(xì)胞內(nèi)部溫度快速上升,當(dāng)細(xì)胞內(nèi)部壓力超過細(xì)胞壁承受能力,細(xì)胞破裂,細(xì)胞內(nèi)維生素A、D自由流出，提高維生素A、D的提取率；用氯仿和乙醇的混合液去除蛋白質(zhì)，用乙醇復(fù)溶純化去除油脂，最后得到的維生素A、D提取物的純度高；操作簡單，成本低廉，經(jīng)濟(jì)價值高，制備的維生素A、D提取物可用于保健品或藥物或食品的制備。具體實(shí)施例下面通過實(shí)施例對本專利技術(shù)方案作進(jìn)一步說明：實(shí)施例1：青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法，具體操作步驟：1）預(yù)處理：將青占魚內(nèi)臟清洗干凈，高速勻漿，高速研磨，破壞青占魚內(nèi)臟細(xì)胞，使細(xì)胞中維生素A、D流出，內(nèi)臟顆粒變小，比表面積增大，加快反應(yīng)速度；2）酶解：在勻漿中加入蒸餾水和酶解劑，酶解劑成份及其重量分為：4~8份胰蛋白酶，2~3份中性蛋白酶，0.5~1.5份木瓜蛋白酶，0.3~0.6份氯化鈣，0.02~0.05份半胱氨酸和0.01~0.04份糖醇乙酸酯。酶解條件溫和，不會破壞維生素A、D的結(jié)構(gòu)，使其保持較高的活性；復(fù)合酶聯(lián)合酶解，并有多種酶激活劑激活復(fù)合酶，酶解速度快且酶解更徹底，提高維生素A、D的提取率；水浴加熱，水浴溫度為40~55℃，混合液pH為6.5~7.5，酶解時間,0.1~0.3h。微波助溶，微波功率為100~300W，頻率為400~800MHz，作用時間為10~25min。通過高頻電磁波穿透內(nèi)臟細(xì)胞，微波能迅速轉(zhuǎn)化為熱能使細(xì)胞內(nèi)部溫度快速上升,當(dāng)細(xì)胞內(nèi)部壓力超過細(xì)胞壁承受能力,細(xì)胞破裂,細(xì)胞內(nèi)維生素A、D自由流出。攪拌，攪拌速率為100~400r/min。沸水浴滅酶10~15min，真空冷凍干燥1~4h，使酶解液中的殘余水分含量低于1%；3）萃?。杭尤肼确潞鸵掖蓟旌弦海确屡c乙醇體積比為1:1~3:1，攪拌，避光浸提1~3h，加入生理鹽水，氯仿和乙醇能使蛋白質(zhì)變性而不溶于水，從而去除蛋白質(zhì)。離心，取下層氯仿提取液，用氯仿乙醇混合液對沉淀重復(fù)提取，合并提取液；4）本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法，其特征在于以下步驟：1）預(yù)處理：將青占魚內(nèi)臟清洗干凈，高速勻漿；2）酶解：在勻漿中加入酶解劑，水浴加熱，攪拌，微波助溶，滅酶，真空冷凍干燥；3）萃?。杭尤肼确潞鸵掖蓟旌弦?，攪拌，避光浸提，加入生理鹽水，離心，取下層氯仿提4）取液，用氯仿乙醇混合液對沉淀重復(fù)提取，合并提取液；5）純化：用氮?dú)鈱⒑喜⑻崛∫捍蹈?，加入乙醇?fù)溶純化，微波助溶，得到維生素A?D提取物。

【技術(shù)特征摘要】
1.青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法，其特征在于以下步驟：1）預(yù)處理：將青占魚內(nèi)臟清洗干凈，高速勻漿；2）酶解：在勻漿中加入酶解劑，水浴加熱，攪拌，微波助溶，滅酶，真空冷凍干燥；3）萃?。杭尤肼确潞鸵掖蓟旌弦?，攪拌，避光浸提，加入生理鹽水，離心，取下層氯仿提4）取液，用氯仿乙醇混合液對沉淀重復(fù)提取，合并提取液；5）純化：用氮?dú)鈱⒑喜⑻崛∫捍蹈?，加入乙醇?fù)溶純化，微波助溶，得到維生素AD提取物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法，其特征在于：所述的步驟2中酶解劑成份及其重量分為：4~8份胰蛋白酶，2~3份中性蛋白酶，0.5~1.5份木瓜蛋白酶，0.3~0.6份氯化鈣，0.02~0.05份半胱氨酸和0.01~0.04份糖醇乙酸酯。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青占魚內(nèi)臟中維生素AD提取物的制備方法，其特征在于：所述的步驟2中水浴溫度為40~55℃，混合液pH為...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：林琳，
申請(專利權(quán))人：浙江海洋大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江,33