一種通用腫瘤疫苗組合物和噴劑及其制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種制備通用腫瘤疫苗組合物的方法，其包括以下步驟：根據(jù)抗腫瘤能力指標(biāo)從健康群體中篩選具有抗腫瘤能力者；從所述具有抗腫瘤能力者采集外周血；從所述外周血中分離得到單核細(xì)胞和血漿；提取所述血漿中的蛋白質(zhì)，得到蛋白粗提物I；將所述單核細(xì)胞培養(yǎng)成一種或多種免疫細(xì)胞培養(yǎng)物；從所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)物提取蛋白粗提物II；將所述蛋白粗提物I與蛋白粗提物II混勻，凍干，得到的粉末即所述通用腫瘤疫苗。本發(fā)明專利技術(shù)還提供了通過所述方法制備的通用腫瘤疫苗組合物以及霧化噴劑。本發(fā)明專利技術(shù)的通用腫瘤疫苗組合物和霧化噴劑中包含多種抗腫瘤細(xì)胞因子，可以很好的對(duì)腫瘤易感人群起到預(yù)防保健的作用。

Universal tumor vaccine composition and spray and preparation method thereof

The invention relates to a method for preparing a universal tumor vaccine composition, which comprises the following steps: screening anti tumor ability from healthy population according to the anti tumor ability index; from the anti-tumor ability of peripheral blood mononuclear cells and plasma; get separated from the peripheral blood; extraction the plasma protein, protein crude extract I; the mononuclear cells develop into one or more immune cell culture; extract protein extract from the II immune cell culture; the crude protein extract I and protein extracts II mixing, freeze-drying that is, the powder obtained the universal tumor vaccine. The present invention also provides a universal tumor vaccine composition and an aerosol spray prepared by the method. The invention relates to a universal tumor vaccine composition and atomizing spray contains a variety of anti-tumor cell factors, can be very good on the tumor susceptible play the role of prevention and health care.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種通用腫瘤疫苗組合物和噴劑及其制備方法
本專利技術(shù)涉及抗腫瘤疫苗領(lǐng)域，更特別地，涉及一種通用腫瘤疫苗組合物和噴劑及其制備方法。
技術(shù)介紹
癌癥嚴(yán)重危及人類的健康和生命，據(jù)國際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的數(shù)據(jù)顯示，每年全球約800萬人死于癌癥。分析檢測(cè)數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn)，癌癥的發(fā)生存在地區(qū)性和家族性現(xiàn)象。如2003-2007年全國32個(gè)腫瘤登記處主要分布在沿海地區(qū)，其中包括7個(gè)癌癥高發(fā)現(xiàn)場(chǎng)，即江蘇啟東、浙江嘉善、福建長樂、河南林州、四川鹽亭、廣西扶綏、山東臨朐等。癌家族是指一個(gè)家系中惡性腫瘤的發(fā)病率高(約20％)，發(fā)病年齡較早，通常按常染色體顯性方式遺傳，以及某些腫瘤(如腺癌)發(fā)病率很高等。Lynch將上述特點(diǎn)歸納為“癌家族綜合征”。曾經(jīng)報(bào)告過一個(gè)癌家族，經(jīng)70多年(1895年開始)間的五次調(diào)查，有些支系已傳至第七代，在842名后裔中共發(fā)現(xiàn)95名癌患者，其中患結(jié)腸腺癌48人和子宮內(nèi)膜腺癌18人者占多數(shù)。這95人中有13人腫瘤為多發(fā)性，19人癌發(fā)生于40歲之前；95名患者中72人有雙親之一患癌，男性與女性各47和48人，接近1:1，符合常染色體顯性遺傳。家族性癌是指一個(gè)家族內(nèi)多個(gè)成員患同一類型的腫瘤，例如，12％～25％的結(jié)腸癌患者有腸癌家族史。許多常見腫瘤如乳腺癌、腸癌、胃癌等，通常是散發(fā)的，但一部分患者有明顯的家族史。此外，患者的一級(jí)親屬中發(fā)病率通常高于一般人群3～4倍。這類癌的遺傳方式雖然還不很清楚，但表明一些腫瘤家族聚集現(xiàn)象，或家族成員對(duì)這些腫瘤的易感性增高。比如鼻咽癌有明顯的家族聚集現(xiàn)象，許多鼻咽癌患者有家族患癌病史。鼻咽癌具有垂直和水平的家族發(fā)生傾向。不同種族由于遺傳基因及表觀遺傳學(xué)的差異，以及生活習(xí)慣的不同，有些腫瘤會(huì)在一些種族中高發(fā)。這是癌癥在不同種族發(fā)病情況的差異。同樣，相對(duì)于腫瘤，部分地區(qū)、部分家族也顯現(xiàn)出強(qiáng)大的抗腫瘤能力，長壽現(xiàn)象也同樣具有區(qū)域性和家族性，長壽村在沿海地區(qū)也并不少見，個(gè)別家族內(nèi)群體抗腫瘤能力強(qiáng)，平均壽命較長的現(xiàn)像也存在。腫瘤的發(fā)生一方面與環(huán)境污染、生活習(xí)慣有著密切關(guān)系，另一方面我國的腫瘤防治工作也一直存在重治輕防的問題，腫瘤的預(yù)防保健教育未能廣泛開展，或者僅存在于喊口號(hào)階段，沒有實(shí)際行動(dòng)。公眾對(duì)于腫瘤的預(yù)防保健認(rèn)識(shí)不夠，或者不知如何進(jìn)行腫瘤的預(yù)防保健。由此可見，對(duì)腫瘤的預(yù)防保健措施的細(xì)化將成為腫瘤防治工作的重點(diǎn)。因此，需要一種新的通用腫瘤疫苗。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
為解決以上問題，本專利技術(shù)提供了一種制備通用腫瘤疫苗組合物的方法，其包括以下步驟：S1：根據(jù)抗腫瘤能力指標(biāo)從健康群體中篩選具有抗腫瘤能力者；S2：從所述具有抗腫瘤能力者采集外周血；S3：從所述外周血中分離得到單核細(xì)胞和血漿；S4：提取所述血漿中的蛋白質(zhì)，得到蛋白粗提物I；S5：將所述單核細(xì)胞培養(yǎng)成一種或多種免疫細(xì)胞培養(yǎng)物；S6：從所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)物提取蛋白粗提物II；S7：將所述蛋白粗提物I與蛋白粗提物II混勻，凍干，得到的粉末即所述通用腫瘤疫苗組合物。進(jìn)一步地，S1中篩選所述具有抗腫瘤能力者的指標(biāo)包括：身高、體重、血壓、脈率、心肺功能、血常規(guī)、尿常規(guī)、血糖、肝腎功能、胸片、心電圖、彩超、既往史、家族史、腫瘤易感基因檢測(cè)和免疫功能檢測(cè)。進(jìn)一步地，S4中通過飽和硫酸銨沉淀法來提取所述血漿中的蛋白質(zhì)。進(jìn)一步地，S5中，所述免疫細(xì)胞為DC、CIK和NK細(xì)胞中的一種或多種組合。進(jìn)一步地，S6包括以下步驟：S6.1：從所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)物分離免疫細(xì)胞，留下無細(xì)胞培養(yǎng)液待用；S6.2：破碎所述免疫細(xì)胞，離心后收集上清液，將所述上清夜與所述無細(xì)胞培養(yǎng)液混合，得到細(xì)胞粗提物；S6.3：通過飽和硫酸銨沉淀法從所述細(xì)胞粗提物中提取蛋白質(zhì)，得到蛋白粗提物II。進(jìn)一步地，在S7中，凍干前向所述蛋白粗提物I與蛋白粗提物II的混合物中添加抗壞血酸作為蛋白保護(hù)劑，然后再進(jìn)行凍干。本專利技術(shù)還公開了一種通用腫瘤疫苗組合物，其通過上述方法制備得到。本專利技術(shù)還公開了一種通用腫瘤疫苗霧化噴劑，其通過對(duì)上述通用腫瘤疫苗組合物進(jìn)行殺滅細(xì)菌和病毒處理后溶解于藥學(xué)可接受的溶劑中，得到所述通用腫瘤疫苗霧化噴劑。進(jìn)一步，所述藥學(xué)可接受的溶劑為無菌水。進(jìn)一步，通過使用鈷60照射來殺滅所述通用腫瘤疫苗組合物中的細(xì)菌和病毒。健康極具抗腫瘤能力的人群其本身的免疫能力強(qiáng)，血液中含有具有抗腫瘤能力的因子，抗腫瘤的細(xì)胞因子呈高表達(dá)狀態(tài)，提取其血漿總同樣含有高表達(dá)的細(xì)胞因子，另外，從他們的血液中提取的免疫細(xì)胞免疫功能強(qiáng)，免疫細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中分泌多種細(xì)胞因子。因此，本專利技術(shù)的通用腫瘤疫苗組合物和霧化噴劑中包含多種抗腫瘤細(xì)胞因子，例如IL-1家族(IL-1α、IL-1β、IL-1Ra等)、IL-2、IL-12家族(IL-12、IL-23、IL-27和IL-35等)、IL-17家族(IL-17A、IL-17F等)、IL-18、TNF-α、GM-CSF、IFN-γ等有效成分。各種細(xì)胞因子在抗腫瘤的過程中起著重要的作用。血漿中的抗腫瘤因子和體外培養(yǎng)過程分泌的具有抗腫瘤作用的因子共同作為霧化噴劑的試劑，可以很好的對(duì)腫瘤易感人群起到預(yù)防保健的作用。具體實(shí)施方式以下結(jié)合實(shí)例對(duì)本專利技術(shù)的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本專利技術(shù)，并非用于限定本專利技術(shù)的范圍。1.具有抗腫瘤能力者的篩選從健康人群中篩選出具有抗腫瘤能力者，篩選方案如表1所示，選擇一級(jí)(評(píng)分＞85分)的人作為外周血供體。表1具有抗腫瘤能力者的篩選2.通用腫瘤疫苗組合物的制備通過以下方法制備通用腫瘤疫苗組合物1)從極具抗腫瘤能力的群體中選擇志愿者，用血細(xì)胞單采機(jī)采集含有PBMC的外周血100ml；2)將上述含PBMC的外周血2000r/min離心10-20min,分離單個(gè)核細(xì)胞與血漿；3)取血漿,加生理鹽水稀釋,邊攪拌邊緩慢逐滴加入飽和硫酸銨溶液至硫酸銨終濃度50％,4℃靜置6h或過夜,4000r/min離心15-30min,分離沉淀，將沉淀溶于生理鹽水,超濾除鹽濃縮，即得蛋白粗提物I；4)取單個(gè)核細(xì)胞，按照常規(guī)方法分別培養(yǎng)DC、CIK細(xì)胞；5)收集DC、CIK細(xì)胞，剩下的無細(xì)胞培養(yǎng)液待用；通過超聲破碎或反復(fù)凍融的方法裂解上述細(xì)胞，然后1500×g離心10min，收集上清，將所述上清與所述無細(xì)胞培養(yǎng)液混勻，得到細(xì)胞粗提物；將所述細(xì)胞粗提物進(jìn)行硫酸銨沉淀，然后透析除鹽，即得蛋白粗提物II；6)將蛋白粗提物1和蛋白粗提物2混勻后加入0.03mg/ml的抗壞血酸作為蛋白保護(hù)劑，而后制成凍干粉，即得到所述通用腫瘤疫苗組合物。在以上方法中，通過以下步驟來培養(yǎng)DC細(xì)胞，并制備腫瘤通用負(fù)載物質(zhì)：1)在PBMC培養(yǎng)物中加入誘導(dǎo)因子來誘導(dǎo)PMBC分化成DC細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)必須在千級(jí)超潔凈工作間進(jìn)行，所有可能開放的操作均應(yīng)該在百級(jí)超潔凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。培養(yǎng)期間對(duì)細(xì)胞制品進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)量控制，確保無污染。2)質(zhì)量控制：對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀測(cè)和免疫表型檢測(cè)，確保誘導(dǎo)出功能及表型更加成熟的免疫細(xì)胞；并作出無菌試驗(yàn)、無熱源和支原體試驗(yàn)，確保細(xì)胞的安全性；3)利用腫瘤通用負(fù)載物質(zhì)沖擊DC，使DC成熟，攜帶抗腫瘤信號(hào)。3.制備霧化噴劑1)于10℃用鈷60照射通用腫瘤疫苗組合物干粉，進(jìn)行病毒滅活處理，將滅活后的干粉分裝保存，鈷60輻照劑量為15-30kGy；2)用雙蒸水溶解分裝后的凍干粉，制成噴劑溶液，本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種制備通用腫瘤疫苗組合物的方法，其特征在于，包括以下步驟：S1：根據(jù)抗腫瘤能力指標(biāo)從健康群體中篩選具有抗腫瘤能力者；S2：從所述具有抗腫瘤能力者采集外周血；S3：從所述外周血中分離得到單核細(xì)胞和血漿；S4：提取所述血漿中的蛋白質(zhì)，得到蛋白粗提物I；S5：將所述單核細(xì)胞培養(yǎng)成一種或多種免疫細(xì)胞培養(yǎng)物；S6：從所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)物提取蛋白粗提物II；S7：將所述蛋白粗提物I與蛋白粗提物II混勻，凍干，得到的粉末即所述通用腫瘤疫苗組合物。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種制備通用腫瘤疫苗組合物的方法，其特征在于，包括以下步驟：S1：根據(jù)抗腫瘤能力指標(biāo)從健康群體中篩選具有抗腫瘤能力者；S2：從所述具有抗腫瘤能力者采集外周血；S3：從所述外周血中分離得到單核細(xì)胞和血漿；S4：提取所述血漿中的蛋白質(zhì)，得到蛋白粗提物I；S5：將所述單核細(xì)胞培養(yǎng)成一種或多種免疫細(xì)胞培養(yǎng)物；S6：從所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)物提取蛋白粗提物II；S7：將所述蛋白粗提物I與蛋白粗提物II混勻，凍干，得到的粉末即所述通用腫瘤疫苗組合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，S1中篩選所述具有抗腫瘤能力者的指標(biāo)包括：身高、體重、血壓、脈率、心肺功能、血常規(guī)、尿常規(guī)、血糖、肝腎功能、胸片、心電圖、彩超、既往史、家族史、腫瘤易感基因檢測(cè)和免疫功能檢測(cè)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，S4中通過飽和硫酸銨沉淀法來提取所述血漿中的蛋白質(zhì)。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，S5中，所述免疫細(xì)胞為DC、CIK和NK細(xì)胞中的一種或多種組合。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：閆小君，羅進(jìn)，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：美國安泰健康投資管理公司，
類型：發(fā)明
國別省市：美國,US