一種甜菊素質量檢測方法技術

本發明專利技術涉及一種藥品的檢測方法，具體講，涉及一種甜菊素質量檢測方法，所述的檢測方法包括供試品溶液制備、對照品溶液制備、色譜條件的確定和測定方法，本發明專利技術的甜菊素的質量檢測方法主要是對色譜條件的改進，使用兩個不同的色譜串聯對樣品進行測定，并且可以確定甜菊糖苷的種類，建立了一種有效的甜菊素的含量測定方法，選擇系統性適用性、回收率、精密度、重復性、定量限、線形、耐用性等項目，進行驗證，符合標準。

【技術實現步驟摘要】
一種甜菊素質量檢測方法
本專利技術涉及一種藥品的檢測方法，具體講，涉及一種甜菊素質量檢測方法。
技術介紹
甜葉菊為菊科植物甜葉菊的干燥葉，原產地在南美洲巴拉圭東北部與巴西接壤的阿曼拜山脈中，后來被引入中國。甜葉菊化學成分多種多樣，其中甜味成分是各種糖苷，其含量占10％以上，這些糖苷中，含量高，且有經濟價值的糖苷體有甜菊苷(stevioside)、瑞鮑迪苷A(rebaudiosideA)、瑞鮑迪苷C(rebaudiosideC)、杜克苷A(dulcosideA)等，甜菊素(又名甜菊糖苷，甜菊糖)為上述各種甜味苷的總稱，是以(C38H60O18)為主的混合苷，甜菊素的甜度是蔗糖的200-300倍，其熱量卻只有蔗糖的1/300，經大量藥物實驗證明，甜菊素無毒副作用，無致癌物，安全性高。甜菊素是天然高甜、低熱的保健型甜味劑，可用于醫藥品的呈味改良劑和矯味劑，也可作為醫藥輔助治療劑，是繼蔗糖、甜菜糖之外第三種有開發價值和健康推崇的天然蔗糖替代品，被稱為第三大天然糖源。目前甜菊素的相關質量檢測方法有三種：(1)根據中國藥典2010年二部，系指以甜菊素為主的混合苷，甜菊素按干燥品計，含甜菊素(C38H60O18)不得少于95.0％，含量測定采用滴定法，計算的滴定度為40.24，是由甜菊素(分子量為804.88)的反應方程式計算所得；由于目前市場上的甜菊素基本上是混合苷，混合苷中其他甜菊糖苷的分子量比甜菊素有大有小，比如：瑞鮑迪苷A分子量為967.02，瑞鮑迪苷C分子量為951.02，瑞鮑迪苷D分子量為1129.15，甜葉懸鉤子苷分子量為642.73，甜菊雙糖苷分子量為642.73，所以采用滴定法計算甜菊素中甜菊苷的含量并不十分準確。(2)甜菊糖苷，收載于國標GB8270-2014，系指以甜葉菊干葉為原料，經提取、精制而得的甜菊糖苷，主要糖苷為甜菊糖苷和瑞鮑迪苷A，其他已知糖苷為瑞鮑迪苷B、C、D、F，杜克苷A，甜茶苷，甜菊雙糖苷。含量不得少于85.0％。含量測定有兩種方法，均為液相色譜法，大同小異，只對照品和計算方式不一樣。(3)甜菊糖苷，收載于FAOJECFA-2010(聯合國糧食及農業組織-聯合食品添加劑專家委員會)，系指以甜葉菊干葉為原料，經提取、精制而得的甜菊糖混合苷；按干燥品計，甜菊糖苷的質量主要是甜菊糖中的9種成分，這9種成分包括甜菊苷，瑞鮑迪苷A、B、C、D、F，杜克苷A，甜葉懸鉤子苷，甜菊雙糖苷，這9種甜菊糖苷的總量不得少于95.0％。國標GB8270-2014和FAOJECFA-2010含量測定均采用液相色譜法，色譜條件基本相同，采用C18(十八烷基硅烷鍵合硅膠，以下簡稱C18)色譜柱，以甜菊素1種對照品溶液，測定9種甜菊糖苷的含量，或者配制9種甜菊糖苷對照品溶液，測定9種甜菊糖苷的含量。申請號為201410288581.3的中國專利技術專利公開了一種評價甜菊糖品質的方法，所述的評價甜菊糖品質的方法包括采用色譜分析方法測定甜菊糖中9種主要糖苷的百分含量，色譜條件為：色譜柱：C18柱(250×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-10mmol/L磷酸鈉(32:68)，pH2.6；流速為1ml/min；檢測波長為210nm；柱溫為40℃，此種方法檢測的待測成分與相鄰共存物之間的分離度達不到要求，并且由于色譜柱的不同，9種甜菊糖苷的保留時間并不相同，僅僅憑一種色譜圖所得的標準色譜峰，并不能準確定位除甜菊素外的其他8種甜菊糖苷。鑒于以上原因，本專利技術人經過研究，建立了一種有效的甜菊素的含量測定方法，選擇系統性適用性、回收率、精密度、重復性、定量限、線形、耐用性等項目，進行驗證，均符合中國藥典2015年版質量標準分析方法驗證指導原則的要求。
技術實現思路
本專利技術的目的是在于克服上述缺陷，提供了一種新的甜菊素質量檢測方法，選用兩根色譜柱串聯使用，達到了規定的分離度要求，并且還根據國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜應用服務系統發布的中藥指紋圖譜軟件，制定了甜菊素電子標準圖譜，從而確定了6種甜菊糖苷。為了實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：一種甜菊素質量檢測方法，所述的質量檢測方法包括如下步驟：(1)供試品溶液制備：精密稱取甜菊素，加入溶液使其均勻溶解，并稀釋配成1mg/1ml供試品溶液；(2)對照品溶液制備：精密稱取甜菊苷對照品，加入溶液使其溶解，制備成1mg/1ml的對照品溶液；(3)色譜條件：兩根填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠的色譜柱串聯，流動相為乙腈-10mmol/L磷酸二氫鈉溶液，流動速率為1.0ml/min，柱溫為40℃，檢測波長為210nm，理論塔板數按甜菊苷峰計算不低于15000；(4)測定方法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液，注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，得到對照品指紋圖譜和供試品指紋圖譜。進一步的，步驟(1)和步驟(2)中，所述的溶液為乙腈和水以體積比為3:7配成的混合溶液。進一步的，步驟(3)中所述的兩根色譜柱為不同品牌?，F有技術中采用一般的色譜柱進行分離，分離度達不到中國藥典2015版規定要求，待測成分與相鄰共存物之間的分離度大于1.5，因此本專利技術中采用兩個不同的色譜柱串聯而成，進行測定，另一方面由于色譜柱的不同，不同種甜菊糖苷的保留時間并不相同，僅僅憑一種色譜峰柱所得的標準色譜圖，并不能準確定位除甜菊素外的其他幾種甜菊糖苷，因此采用不同的色譜柱串聯。進一步的步驟(3)中所述的流動相乙腈-10mmol/L磷酸二氫鈉溶液的體積比為32:68、34:66、38:72，優選為34:66。進一步的，所述的質量檢測方法還包括甜菊糖苷種類的確定：采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件對所述的供試品指紋圖譜與所述的對照品指紋圖譜進行分析，相似度≥0.90為合格產品。進一步的，所述的供試品指紋圖譜與所述的對照品指紋圖譜進行分析包括如下步驟：(1)復原標準圖譜：按照甜菊糖苷的標準圖譜的色譜條件進行供試品的測定，得到一致的標準色譜圖；(2)供試品色譜圖：按照權利要求1中所述的色譜條件進行測定，測定供試品，分別精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，得到供試品色譜圖；(3)對照色譜圖：按中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，根據供試品溶液的色譜圖生成對照色譜圖；(4)校正因子：甜菊苷的校正因子為1.00，除甜菊苷以外的其他甜菊糖苷的分子量與所述的甜菊苷的分子量的比值為校正因子；(5)樣品測定：根據權利要求1所述的檢測方法測定樣品，將樣品色譜圖與對照色譜圖進行分析對比。進一步的，步驟(1)中甜菊糖苷的標準圖譜為FAOJECFA-2010，所述的色譜條件為色譜柱為CapcellpakC18MGⅡ4.6×250mm×5μm，流動相為乙腈-10mmol磷酸二氫鉀溶液體積比32:68，pH為2.6，流動速率為1.0ml/min，精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀，測定。本專利技術中由于9種甜菊糖苷的對照品較難購買，為了節約成本和檢驗方便，采用校正因子法測定供試品中甜菊糖苷的含量，由于9種甜菊糖苷的母核完全相同，而且其最大吸收波長都確定為210nm，結合FAOJECFA-2010甜菊素標準，將甜菊素的校正因子定為1.00，以其余甜菊糖苷的分子量和甜菊苷分子量的比值，作為校正因子，因此各甜菊糖苷的校正因子為：甜菊糖1.0本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種甜菊素質量檢測方法，其特征在于，所述的質量檢測方法包括如下步驟：(1)供試品溶液制備：精密稱取甜菊素，加入溶液使其均勻溶解，并稀釋配成1mg/1ml供試品溶液；(2)對照品溶液制備：精密稱取甜菊苷對照品，加入溶液使其溶解，制備成1mg/1ml的對照品溶液；(3)色譜條件：兩根填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠的色譜柱串聯，流動相為乙腈?10mmol/L磷酸二氫鈉溶液，流動速率為1.0ml/min，柱溫為40℃，檢測波長為210nm，理論塔板數按甜菊苷峰計算應不低于15000；(4)測定方法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液，注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，得到對照品指紋圖譜和供試品指紋圖譜。

【技術特征摘要】
1.一種甜菊素質量檢測方法，其特征在于，所述的質量檢測方法包括如下步驟：(1)供試品溶液制備：精密稱取甜菊素，加入溶液使其均勻溶解，并稀釋配成1mg/1ml供試品溶液；(2)對照品溶液制備：精密稱取甜菊苷對照品，加入溶液使其溶解，制備成1mg/1ml的對照品溶液；(3)色譜條件：兩根填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠的色譜柱串聯，流動相為乙腈-10mmol/L磷酸二氫鈉溶液，流動速率為1.0ml/min，柱溫為40℃，檢測波長為210nm，理論塔板數按甜菊苷峰計算應不低于15000；(4)測定方法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液，注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，得到對照品指紋圖譜和供試品指紋圖譜。2.根據權利要求1所述的甜菊素質量檢測方法，其特征在于，步驟(1)和步驟(2)中，所述的溶液為乙腈和水以體積比為3:7配成的混合溶液。3.根據權利要求1所述的甜菊素質量檢測方法，其特征在于，步驟(3)中所述的兩根色譜柱為不同品牌。4.根據權利要求1所述的甜菊素質量檢測方法，其特征在于，步驟(3)中所述的流動相乙腈-10mmol/L磷酸二氫鈉溶液的體積比為32:68、34:66、38:72，優選為34:66。5.根據權利要求1-4任意一項所述的甜菊素質量檢測方法，其特征在于，所述的質量檢測方法還包括甜菊糖苷...

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄒節明，雷肖琳，
申請(專利權)人：桂林三金藥業股份有限公司，
類型：發明
國別省市：廣西,45