無熱量甜味劑及合成方法技術

公開了稱為萊鮑迪苷V和萊鮑迪苷W的甜菊醇糖苷。還公開了生成萊鮑迪苷M(Reb?M)、萊鮑迪苷G(Reb?G)、萊鮑迪苷KA(Reb?KA)、萊鮑迪苷V(Reb?V)和萊鮑迪苷(Reb?W)的方法。本公開總體上涉及天然甜味劑。更具體地，本公開涉及無熱量甜味劑和合成所述無熱量甜味劑的方法。

Non caloric sweetening agent and synthetic method

Disclosed is called rebaudioside V and rebaudiodside W steviol glycosides. Also disclosed to generate rebaudioside M (Reb M), rebaudioside G (Reb G), rebaudioside KA (Reb KA), rebaudioside V (Reb V) and Eli Bondy (Reb W) method. The present disclosure relates generally to natural sweeteners. More specifically, the present disclosure relates to a method for the use of a calorie free sweetener and the synthesis of said calorie free sweetener.

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】無熱量甜味劑及合成方法相關申請案的交叉引用本申請要求保護2014年10月3日提交的，標題為“無熱量甜味劑及合成方法”的美國臨時專利申請第62/059,498號及2014年12月31日提交的，標題為“無熱量甜味劑及合成方法”的美國臨時專利申請第62/098,929號的優先權，所述專利申請的公開內容據此通過引用整體并入。支持提交序列表的聲明本文提供了序列表的紙質復印件和含有命名為“19452382_1.txt”，大小為60,601字節(正如在MICROSOFTEXPLORER中所測量)的文件的序列表的計算機可讀形式并且通過引用并入本文。該序列表由SEQIDNO:1-12組成。公開背景本公開總體上涉及天然甜味劑。更具體地，本公開涉及無熱量甜味劑及合成無熱量甜味劑的方法。甜菊醇糖苷是從甜葉菊(Steviarebaudiana)葉片分離的天然產物。甜菊醇糖苷廣泛地用作高強度、低熱量的甜味劑并且明顯比蔗糖更甜。作為天然甜味劑，不同的甜菊醇葡糖苷具有不同的甜度和后味。甜菊醇糖苷的甜度明顯高于蔗糖的甜度。例如，甜菊苷比蔗糖甜100-150倍，具有苦的后味。萊鮑迪苷C(rebaudiosideC)比蔗糖甜40-60倍。杜爾可苷A(dulcosideA)比蔗糖甜約30倍。天然存在的甜菊醇糖苷共有相同的基本甜菊醇結構，但是在C13和C19位置的碳水化合物殘基(例如，葡萄糖、鼠李糖和木糖殘基)的含量上不同。具有已知結構的甜菊醇糖苷包括，甜菊醇、甜菊苷、萊鮑迪苷A、萊鮑迪苷B、萊鮑迪苷C、萊鮑迪苷D、萊鮑迪苷E、萊鮑迪苷F和杜爾可苷A(參見例如，表1)。其它甜菊醇糖苷為萊鮑迪苷M、萊鮑迪苷N和萊鮑迪苷O。表1.甜菊醇糖苷。按干重計，甜菊苷、萊鮑迪苷A、萊鮑迪苷C和杜爾可苷A分別占葉中甜菊醇糖苷總重量的9.1、3.8、0.6和0.3％，而其它甜菊醇糖苷以低得多的量存在。來自甜葉菊植株的提取物可商購，通常含有作為主要化合物的甜菊苷和萊鮑迪苷A。其它甜菊醇糖苷在甜葉菊提取物中作為微量組分存在。例如，商用制劑中萊鮑迪苷A的量可以在總甜菊醇糖苷含量的約20％至大于90％變化，而萊鮑迪苷B的量可為總甜菊醇糖苷的約1-2％，萊鮑迪苷C的量可為總甜菊醇糖苷的約7-15％，且萊鮑迪苷D的量可為總甜菊醇糖苷的約2％。大多數甜菊醇糖苷是使用尿苷5’-二磷酸葡萄糖(UDP-葡萄糖)作為糖部分的供體，通過通常由UDP-糖基轉移酶(UGT)催化的甜菊醇的幾個糖基化反應形成的。植物中的UGT構成了酶的非常不同的類，所述酶將葡萄糖殘基從UDP-葡萄糖轉移到甜菊醇。例如，甜菊苷的C-13-O-葡萄糖的C-3’的糖基化產生萊鮑迪苷A；且甜菊苷的19-O-葡萄糖的C-2’的糖基化產生萊鮑迪苷E。進一步地萊鮑迪苷A(在C-2’-19-O-葡萄糖處)或萊鮑迪苷E(在C-3’-13-O-葡萄糖處)的糖基化生成萊鮑迪苷D。(圖1)。替代性甜味劑正受到越來越多的關注，因為意識到許多疾病與高糖食品和飲料的消耗相關。雖然人造甜味劑可用，但許多人造甜味劑如甘素(dulcin)、環己氨基磺酸鈉和糖精由于對其安全性的考慮已被一些國家禁止或限制。因此，天然來源的無熱量甜味劑變得越來越受歡迎。廣泛使用甜葉菊甜味劑的主要障礙之一是其不良的口味屬性。因此，需要開發替代性甜味劑及其生產方法以提供甜味潛能和風味性質的最佳組合。專利技術概述本公開總體上涉及天然甜味劑。更具體地，本公開涉及無熱量甜味劑和合成無熱量甜味劑的方法。合成萊鮑迪苷V。一方面，本公開涉及由以下化學結構組成的合成萊鮑迪苷(萊鮑迪苷V)：合成萊鮑迪苷W。一方面，本公開涉及由以下化學結構組成的合成萊鮑迪苷(萊鮑迪苷W)：由萊鮑迪苷G生成萊鮑迪苷V的方法。另一方面，本公開涉及一種由萊鮑迪苷G合成萊鮑迪苷V的方法。該方法包括制備反應混合物，所述反應混合物包含萊鮑迪苷G，選自蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸-葡萄糖(UDP-葡萄糖)的底物，和HV1UDP-糖基轉移酶，有或無蔗糖合成酶(SUS)；以及溫育所述反應混合物足夠時間以生成萊鮑迪苷V，其中葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷G以生成萊鮑迪苷V。由萊鮑迪苷G生成萊鮑迪苷V的方法。另一方面，本公開涉及一種由萊鮑迪苷G合成萊鮑迪苷V的方法。該方法包括制備反應混合物，所述反應混合物包含萊鮑迪苷G，選自蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸-葡萄糖(UDP-葡萄糖)的底物，選自尿苷二磷酸糖基轉移酶(EUGT11)、UDP-糖基轉移酶-蔗糖合成酶(SUS)融合酶的尿苷二磷酸糖基轉移酶(UDP-糖基轉移酶)，有或無蔗糖合成酶(SUS)；以及溫育所述反應混合物足夠時間以生成萊鮑迪苷V，其中葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷G以生成萊鮑迪苷V。由萊鮑迪苷KA生成萊鮑迪苷V的方法。另一方面，本公開涉及一種由萊鮑迪苷KA合成萊鮑迪苷V的方法。該方法包括制備反應混合物，所述反應混合物包含萊鮑迪苷KA，選自蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸-葡萄糖(UDP-葡萄糖)的底物，選自UDP-糖基轉移酶(UGT76G1；SEQIDNO:1)和UDP-糖基轉移酶-蔗糖合成酶融合酶的尿苷二磷酸糖基轉移酶(UDP-糖基轉移酶)，有或無蔗糖合成酶(SUS)；以及溫育所述反應混合物足夠時間以生成萊鮑迪苷V，其中葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷KA以生成萊鮑迪苷V。由甜茶苷生成萊鮑迪苷V的方法。另一方面，本公開涉及一種由甜茶苷合成萊鮑迪苷V的方法。該方法包括制備反應混合物，所述反應混合物包含甜茶苷，選自蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸-葡萄糖(UDP-葡萄糖)的底物，選自UDP-糖基轉移酶(UGT76G1)、HV1和UDP-糖基轉移酶-蔗糖合成酶融合酶的尿苷二磷酸糖基轉移酶(UDP-糖基轉移酶)，有或無蔗糖合成酶(SUS)；以及溫育所述反應混合物足夠時間以生成萊鮑迪苷V，其中葡萄糖共價偶聯至甜茶苷以生成萊鮑迪苷KA。連續地，葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷KA以生成萊鮑迪苷V。葡萄糖共價偶聯至甜茶苷以生成萊鮑迪苷G。連續地，葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷G以生成萊鮑迪苷V。由甜茶苷生成萊鮑迪苷V的方法。另一方面，本公開涉及一種由甜茶苷合成萊鮑迪苷V的方法。該方法包括制備反應混合物，所述反應混合物包含甜茶苷，選自蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸-葡萄糖(UDP-葡萄糖)的底物，選自UDP-糖基轉移酶(UGT76G1)、EUGT11和UDP-糖基轉移酶-蔗糖合成酶融合酶的尿苷二磷酸糖基轉移酶(UDP-糖基轉移酶)，有或無蔗糖合成酶；以及溫育所述反應混合物足夠時間以生成萊鮑迪苷V，其中葡萄糖共價偶聯至甜茶苷以生成萊鮑迪苷KA并且葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷KA以生成萊鮑迪苷V。葡萄糖共價偶聯至甜茶苷以生成萊鮑迪苷G并且葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷G以生成萊鮑迪苷V。由萊鮑迪苷V生成萊鮑迪苷W的方法。另一方面，本公開涉及一種由萊鮑迪苷V合成萊鮑迪苷W的方法。該方法包括制備反應混合物，所述反應混合物包含萊鮑迪苷V，選自蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸-葡萄糖(UDP-葡萄糖)的底物，選自UDP-糖基轉移酶(UGT76G1)和UDP-糖基轉移酶-蔗糖合成酶融合酶的尿苷二磷酸糖基轉移酶(UDP-糖基轉移酶)，有或無蔗糖合成酶；以及溫育所述反應混合物足夠本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種由萊鮑迪苷KA合成萊鮑迪苷E的方法，所述方法包括：制備反應混合物，所述反應混合物包含萊鮑迪苷KA，選自蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸?葡萄糖(UDP?葡萄糖)的底物，及選自HV1、EUGT11和UDP?糖基轉移酶融合酶的UDP?糖基轉移酶；以及溫育所述反應混合物足夠時間以生成萊鮑迪苷E，其中葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷KA的C2’13?O?葡萄糖以生成萊鮑迪苷E。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2014.10.03 US 62/059,498;2014.12.31 US 62/098,9291.一種由萊鮑迪苷KA合成萊鮑迪苷E的方法，所述方法包括：制備反應混合物，所述反應混合物包含萊鮑迪苷KA，選自蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸-葡萄糖(UDP-葡萄糖)的底物，及選自HV1、EUGT11和UDP-糖基轉移酶融合酶的UDP-糖基轉移酶；以及溫育所述反應混合物足夠時間以生成萊鮑迪苷E，其中葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷KA的C2’13-O-葡萄糖以生成萊鮑迪苷E。2.根據權利要求1所述的方法，其還包括向所述反應混合物中添加蔗糖合成酶。3.根據權利要求2所述的方法，其中所述蔗糖合成酶選自擬南芥蔗糖合成酶1；擬南芥蔗糖合成酶3；和綠豆蔗糖合成酶。4.根據權利要求3所述的方法，其中所述蔗糖合成酶為阿拉伯芥蔗糖合成酶1。5.根據權利要求1所述的方法，其中所述UDP-糖基轉移酶融合酶選自偶聯至蔗糖合成酶結構域的EUGT11尿苷二磷酸糖基轉移酶結構域。6.根據權利要求5所述的方法，其中所述蔗糖合成酶結構域選自擬南芥蔗糖合成酶1；擬南芥蔗糖合成酶3；和綠豆蔗糖合成酶。7.根據權利要求6所述的方法，其中所述蔗糖合成酶結構域為阿拉伯芥蔗糖合成酶1。8.一種由甜茶苷合成萊鮑迪苷E的方法，所述方法包括：制備反應混合物，所述反應混合物包含甜茶苷，選自蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸-葡萄糖(UDP-葡萄糖)的底物，及選自HV1、EUGT11和UDP-糖基轉移酶融合酶(EUS)的UDP-糖基轉移酶；和任選地，蔗糖合成酶；以及溫育所述反應混合物足夠時間以生成萊鮑迪苷E，其中葡萄糖共價偶聯至甜茶苷以生成萊鮑迪苷KA或甜菊苷，并且葡萄糖共價偶聯至萊鮑迪苷KA或甜菊苷以生成萊鮑迪苷E。9.根據權利要求8所述的方法，其還包括向所述反應混合物中添加蔗糖合成酶。10.根據權利要求9所述的方法，其中所述蔗糖合成酶選自擬南芥蔗糖合成酶1；擬南芥蔗糖合成酶3；和綠豆蔗糖合成酶。11.根據權利要求10所述的方法，其中所述蔗糖合成酶為阿拉伯芥蔗糖合成酶1。12.根據權利要求8所述的方法，其中所述UDP-糖基轉移酶融合酶選自偶聯至蔗糖合成酶結構域的EUGT11尿苷二磷酸糖基轉移酶結構域。13.根據權利要求12所述的方法，其中所述蔗糖合成酶結構域選自擬南芥蔗糖合成酶1；擬南芥蔗糖合成酶3；和綠豆蔗糖合成酶。14.根據權利要求13所述的方法，其中所述蔗糖合成酶結構域為阿拉伯芥蔗糖合成酶1。15.一種由甜茶苷合成萊鮑迪苷D2的方法，所述方法包括：制備反應混...

【專利技術屬性】
技術研發人員：毛國紅，X·于，
申請(專利權)人：康納根有限公司，
類型：發明
國別省市：美國,US