用于自體抗體相關疾病的適體制造技術

本發明專利技術涉及用于治療和/或診斷與針對G?蛋白偶聯受體的自體抗體相關的自體免疫疾病的新適體分子、包含這類適體分子的藥物組合物、包含這類適體分子的血液成分分離柱和用于確定用作適體分子的序列的核苷酸序列的方法。

Aptamer for autoantibody related diseases

The invention relates to a method for diagnosis and treatment and / or for G protein coupled receptor autoantibodies associated with autoimmune diseases of the new aptamer molecules, and pharmaceutical compositions comprising such aptamer molecules containing blood component separation column the aptamer molecules and a method for determining the nucleotide sequence of the aptamer sequences as molecular the.

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】用于自體抗體相關疾病的適體
本專利技術涉及了用于治療和/或診斷與針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體相關的自體免疫疾病的新適體分子、包含這類適體分子的藥物組合物、包含這類適體分子的血液成分分離柱和用于確定用作適體分子的序列的核苷酸序列的方法。
技術介紹
免疫系統形成每種哺乳動物的必需部分。哺乳動物在防御微生物、檢測及移除異常細胞例如腫瘤細胞和在組織再生方面利用其免疫系統。因而，生物依賴于兩種相互聯系的防御機制：體液免疫和細胞免疫。當與其抗原結合時，抗體是體液免疫應答的觸發者。抗體可以按多種方式發揮作用。除中和抗原之外，抗體還激活補體系統。還存在針對身體自身抗原的抗體。作為產生這些所謂自體抗體的原因，觀察到分子模擬和/或旁觀者激活作用。自體抗體與自身抗原的特異性結合可以活化能夠促進這些抗原降解的天然殺傷細胞(NK細胞)。自體免疫疾病基于這類針對身體自身組成部分的抗體的特異性識別和結合，所述識別和結合觸發針對自身細胞或組織的免疫應答。除這種免疫刺激性效應之外，自體抗體還可以通過其他機制促進致病表型的形成。眾所周知，存在這樣的自體抗體，所述自體抗體對G-蛋白偶聯受體(如：腎上腺素能α-1受體、腎上腺素能β-1受體、腎上腺素能β-2受體、內皮素ETA受體、毒蕈堿M受體、血管緊張素IIAT1受體、蛋白酶激活的受體(PAR)受體、MAS-受體、5HT4-受體和/或M3-受體)的胞外部分具有特異性并且特異性結合時可以激活或阻斷這些受體。G-蛋白偶聯受體是從胞外間隙轉導信息至細胞中的信號轉導分子。它們屬于涵蓋超過1000種不同受體并劃分成五個亞組的受體家族。它們代表了許多不同物種中存在的經細胞膜進入細胞的信號轉導原理。GPCR的常見特性是它們具有三個不同的胞外環，所述胞外環具有物質可以與之結合并引起不同胞內反應的不同表位。體液蛋白質腎上腺素(adrenaline)能夠與腎上腺素能β-1受體結合以增加心肌細胞搏動的力量和頻率。針對GPCR的功能性致病的自體抗體往往但并非總是IgG3(糖蛋白免疫球蛋白G，亞類3)亞型并具有與不同的GPCR環及這些環內部不同位置結合的能力。這些功能性致病的抗體通過它們與GPCR的相互作用產生病態細胞功能并轉而產生機體功能。因此，存在針對不同受體的許多不同自體抗體。在心肌的情況下，這些抗體例如是針對腎上腺素能β-1受體或毒蕈堿性乙酰膽堿受體的自體抗體。在其他疾病中具有重要作用的其他抗體是針對腎上腺素能α-1受體、腎上腺素能α-2受體、腎上腺素能β-2受體、內皮素1ETA受體、毒蕈堿M2受體、血管緊張素IIAT1受體、蛋白酶激活的受體(PAR)受體、MAS-受體、5HT4-受體、M3-受體和其他受體的。從永久性激活或阻斷在疾病形成中發揮作用的相應受體意義上，生物中這類自體抗體的存在可以導致激動作用或拮抗作用。擴張性心肌病(DCM)是這樣的疾病之一，其中高百分數的患者具有與腎上腺素能β-1受體的胞外部分、尤其與腎上腺素能β-1受體的第一或第二環結合的這類激活性自體抗體。因此，提出DCM在這些患者中的自身免疫發病機制。一旦結合這些自體抗體，這些受體持續激活，因為限制GPCR激活的生理反饋機制受到抑制。存在被提出與針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體相關的其他心血管系統疾病，如，查加斯心肌病(Chagas’cardiomyopathy)、圍產期心肌病、心肌炎、肺動脈高血壓(pulmonaryhypertension)和惡性高血壓。針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體還存在于例如青光眼、糖尿病、良性前列腺增生、硬皮病、雷諾氏綜合癥(Raynaudsyndrome)和先兆子癇患者中和慢性查加斯病(Chaga’sdisease)中以及那些腎同種異體移植排異的患者中。通常，這些受體的表位區域由包含約20個氨基酸的肽鏈組成，而疾病特異性表位構成這些區域之一的3至5個氨基酸的序列。然而，對于幾種自體免疫疾病的形成和慢性化，自體抗體與這些表位的不希望的相互作用發揮重要作用。在最近研究中，可以證實，通過免疫球蛋白吸附從血液移除這些自體抗體有助于心肌再生(WallukatG,ReinkeP,DorffelWV,LutherHP,BestvaterK,FelixSB,BaumannG.(1996)Removalofautoantibodiesindilatedcardiomyopathybyimmunoadsorption.lntJCardiol.54:191-195；MüllerJ,WallukatG,DandelM,BiedaH,BrandesK,SpiegelsbergerS,NissenE,KunzeR,HetzerR(2000)Immunoglobulinadsorptioninpatientswithidiopathicdilatedcardiomyopathy.Circulation.101:385-391.W.V.Dorffel,S.B.Felix,G.Wallukat,S.Brehme,K.Bestvater,T.Hofmann,F.K.Kleber,G.Baumann,P.Reinke(1997)Short-termhemodynamiceffectsofimmunoadsorptionindilatedcardiomyopathy.Circulation95,1994-1997和W.V.Dorffel,G.Wallukat,Y.Dorffel,S.B.Felix,G.Baumann(2004)lmmunoadsorptioninidiopathicdilatedcardiomyopathy,a3-yearfollow-up.lntJ.Cardiol.97,20529-534)。已經進一步發現，某些適體可以用來干擾抗體、尤其對人β-1-腎上腺素能受體第二胞外環特異的自體抗體與其靶的相互作用(WO2012/000889A1)。適體是以對其靶分子的高親和力為特征的短鏈寡核苷酸。通過抑制相互作用，適體能夠在不需要移除這些抗體的情況下削弱或甚至永久消除對β-1-腎上腺素能受體的永久性激活。另外，用于治療和/或診斷與存在針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體相關的自體免疫疾病的適體已經在WO2012/119938A2中公開。根據一個優選的實施方案，這些適體用來削弱或消除相應的自體抗體對G-蛋白偶聯受體的激活。根據另一個優選實施方案，適體用來中和針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體和/或減少該自體抗體對它們針對的G-蛋白偶聯受體的影響。然而，目前僅可獲得數目非常有限的可以針對上述具體自體免疫疾病應用的適體并且它們在人類患者中應用時的有效性和無害性仍待證實。因此需要額外的適體，所述適體顯示對自體抗體與GPCR的相互作用的增強干擾。因此，本專利技術的目的是提供新適體用于治療和/或診斷與針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體相關的自體免疫疾病。另外，本專利技術的另一個目的是提供包含這類適體分子的藥物組合物以及包含這類適體的血液成分分離柱(apheresiscolumn)。因此，本專利技術的目的還是提供種一種用于確定新適體的核苷酸序列的方法，所述的新適體用于治療和/或診斷與針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體相關的自體免疫疾病。
技術實現思路
這個目的通過如下文闡述的本本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種適體，其包含滿足產生規則集合P定義的語法的核苷酸序列：

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2014.08.04 EP 14179715.91.一種適體，其包含滿足產生規則集合P定義的語法的核苷酸序列：條件為：a.)Q是自然數集b.)F是如下定義的自然數子集F:＝{X∈Q|(X>1)}c.)使用F，定義：(1)(2)(3)(4)(5)d.)U是如下定義的非終結符集U＝{S，M，N，D，E，Y，H，R，Z，L，BX，CX，K，V}對于BX和CX，見c)e.)W是如下定義的終結符集W＝{A，C，G，T，GX}GX表示可以根據b.)和c.)導出的全部終結符(5)f.)S∈U是起始符號所述適體用于治療與針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體相關的自體免疫疾病，其中“A”意指腺嘌呤核苷酸，“C”意指胞嘧啶核苷酸，“G”意指鳥嘌呤核苷酸并且如果所述核苷酸序列是DNA序列，則“T”意指胸腺嘧啶核苷酸，并且如果所述核苷酸序列是RNA序列，則“T”意指尿嘧啶核苷酸，其中所述適體不包含核苷酸序列GGTTGGTGTGGTTGG(SEQIDNo:22)、GGTTGGTGTGGT(SEQIDNO:23)或CGCCTAGGTTGGGTAGGGTGGTGGCG(SEQIDNo:24)。2.根據權利要求1所述用途的適體，其中所述適體用來抑制對G-蛋白偶聯受體特異的自體抗體與其靶蛋白的相互作用。3.根據權利要求1所述用途的適體，其中所述適體用于治療其中可以檢測到針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體的患者。4.根據權利要求1至3中任一項所述用途的適體，其中所述核苷酸序列具有至多593個核苷酸的長度。5.根據權利要求1至4中任一項所述用途的適體，其中所述核苷酸序列是DNA序列，或其中所述核苷酸序列是RNA序列。6.根據前述權利要求中任一項所述用途的適體，其中包含于所述適體中的核苷酸序列是以下任一個序列：(5'-GTTGTTTGGGGTGG-3'SEQIDNo:1)、(5'-GTTGTTTGGGGTGGT-3'SEQIDNo:2)(5'-GGTTGGGGTGGGTGGGGTGGGTGGG-3'SEQIDNo:3)、(5'-TTTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTG-3'SEQIDNo:4)、(5'-TTTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3'SEQIDNo:5)、(5'-TTTGGTGGTGGTGGTTTTGGTGGTGGTGG-3'SEQIDNo:6)、(5'-TTTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGG-3'SEQIDNo:7)、(5'-TTTGGTGGTGGTGGTTTGGGTGGTGGTGG-3'SEQIDNo:8)、(5'-TGGTGGTGGTGGT-3'SEQIDNo:9)、(5'-GGTGGTGGTGG-3'SEQIDNo:10)、(5'-GGTGGTTGTGGTGG-3'SEQIDNo:11)、(5'-GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3'SEQIDNo:12)、(5'-GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3'SEQIDNo:13)、(5'-GGTGGTTGTGGTGGTTGTGGTGGTTGTGGTGG-3'SEQIDNo:14)、(5'-TTTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGGTTT-3'SEQIDNo:15)、(5'-GGTGGTGGTGTTGTGGTGGTGGTGGTTT-3'SEQIDNo:16)、(5'-TTTGGTGGTGGTGGTGTGGTGGTGGTGG-3'SEQIDNo:17)、(5'-TGGTGGTGGT-3'SEQIDNo:18)、(5'-TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG(SEQIDNO:20)。7.根據前述權利要求中任一項所述用途的適體，其中所述適體的核苷酸序列具有至少4個核苷酸的長度、優選地具有至少8個核苷酸的長度、更優選地具有至少12個核苷酸的長度和/或其中所述適體的核苷酸序列具有至多120個核苷酸的長度、優選地具有至多100個核苷酸的長度、更優選地具有至多80個核苷酸的長度。8.根據前述權利要求中任一項所述用途的適體，其中所述適體能夠與自體抗體相互作用，優選地所述適體能夠與對G-蛋白偶聯受體特異的自體抗體相互作用，優選地所述適體能夠與對以下任一種人G-蛋白偶聯受體特異的自體抗體相互作用：腎上腺素能α-1受體、腎上腺素能β-1受體、腎上腺素能β-2受體、內皮素1ETA受體、毒蕈堿M受體、血管緊張素IIAT1受體、PAR受體、MAS-受體、5HT4-受體和/或M3受體。9.根據前述權利要求中任一項所述用途的適體，其中所述適體用作患有自體免疫疾病的患者的血液或其成分的治療性血液成分分離期間的選擇性組分，其中所述自體免疫疾病與針對G-蛋白偶聯受體的自體抗體的出現相關。10.根據前述權利要求中任一項所述用途的適體，其中所述...

【專利技術屬性】
技術研發人員：約翰內斯·穆勒，
申請(專利權)人：柏林制藥控股公司，
類型：發明
國別省市：瑞士,CH