一種文蛤降血壓肽的制備方法及應用技術

本發明專利技術提供一種文蛤降血壓肽的制備方法及應用，步驟如下：預處理：將文蛤去殼取肉放入去離子水浸泡，撈出瀝干，勻漿，加入蒸餾水和鹽酸溶液調節pH；酶解：加文蛤肉1.1~1.5%重量份的中性蛋白酶進行酶解，加入文蛤肉0.15~0.3%重量份的復合酶，得文蛤肉酶解液；凝膠層析：將文蛤肉酶解液進行酶滅活，離心，取上清液，加入文蛤肉1~3%重量份析出劑，靜置，超濾，凝膠層析，得文蛤降血壓肽濃縮液；凍干保存。本發明專利技術制備工藝簡單，預處理時間短，酶解液中降血壓肽含量高，提高降血壓肽含量和提取率，提取到的降血壓肽在具有降血壓功效的藥物和食品中應用。

Preparation and application of a clam peptide

The preparation method and the application, the invention provides a clam antihypertensive peptide comprises the following steps: preprocessing: clam peeled meat soaked in deionized water, remove and drain, homogenate, adding distilled water and hydrochloric acid solution to regulate the pH enzyme; Gavin: clam meat 1.1~1.5% weight portions of neutral proteinase to enzymolyze, adding compound clam meat 0.15~0.3% weight portions, to clam meat hydrolysate; gel chromatography: clam meat enzymolysis liquid enzyme inactivation, centrifugation, the supernatant was added, the clam meat 1~3% weight portions of precipitation agent, static, ultrafiltration, gel chromatography, the clam peptide concentrate; lyophilization. The invention has the advantages of simple preparation process, the pretreatment time is short, the hydrolysate of antihypertensive peptide content, improve antihypertensive peptide content and extraction rate, application of antihypertensive peptides extracted in a blood pressure lowering effect of drugs and food.

【技術實現步驟摘要】
一種文蛤降血壓肽的制備方法及應用
本專利技術屬于生物技術及功能保健領域，具體涉及一種文蛤降血壓肽的制備方法及應用。
技術介紹
高血壓是一種常見的心血管疾病，它不僅患病率高，而且常引起嚴重的心、腦、腎等其他疾病，是腦卒中、冠心病、心力衰竭和腎臟疾病主要的危險因素。目前化學合成的降壓藥物，如賴諾普利(Lisinopril)，培哚普利(Perindopril)，雖然治療高血壓的效果非常明顯，但是長期服用易引起皮疹、蛋白尿等不良反應。降血壓肽，又稱為血管緊張素轉化酶(AngioensinIConvertingEnzyme，簡稱ACE)抑制肽，是從食物蛋白中分離出的一類具有顯著降低血壓功效的多肽短鏈物質。從來源上，可分為乳蛋白(包括酪蛋白、乳清蛋白)、發酵食品、動物蛋白、植物蛋白以及天然ACE抑制肽。這些來源于食品的降血壓肽通常由蛋白酶在溫和條件下水解蛋白質而獲得，食用安全性高，其共同突出優點是只對高血壓患者起到降壓作用，對血壓正常者無降壓作用，因而不會有降壓過度現象發生。除降壓功能，它們往往具有免疫促進、抗凝血、易消化吸收和抗腫瘤等功能。現有技術提供多種從生物中提取降血壓肽的方法及應用，例如，中國專利技術專利文獻一種沙丁魚降血壓肽及其制備方法與應用授權公告號CN104031967B該專利技術屬于食品生物技術及功能保健領域，公開一種沙丁魚降血壓肽及其制備方法與應用。所述方法主要技術步驟如下：沙丁魚預處理成均漿后，先加入木瓜蛋白酶進行酶解，再加入堿性蛋白酶進行酶解；酶解完成后滅酶，并對滅酶后的酶解液進行離心；取離心后的上清液，利用超濾、凝膠層析的方法，對粗制品進行分離純化；對分離純化后的高效組分進行冷凍干燥，得到沙丁魚降血壓肽。沙丁魚產量高、價格低廉，因此以沙丁魚作為原料制備降血壓肽，能充分提高沙丁魚的綜合利用價值，并且通過酶解獲得的沙丁魚降血壓肽，不存在安全性問題，沒有化學降血壓類藥物的副作用，降壓效果理想?，F有技術通過酶解獲得沙丁魚降血壓肽，沒有化學降血壓藥物的副作用而且提高了沙丁魚的綜合利用價值，但預處理時間過長，進行了二步酶解，取得上清液后未作提高降血壓肽析出的步驟，酶解效果和提取效果有待提升，獲得的降血壓肽含量有待提高。
技術實現思路
本專利技術針對上述技術問題提供一種預處理時間短，酶解液中降血壓肽含量高，提高降血壓肽提取率的一種文蛤降血壓肽的制備方法及應用。本專利技術針對上述技術問題所采取的方案為：一種文蛤降血壓肽的制備方法，制備步驟如下：1）預處理：將文蛤去殼取肉放入去離子水浸泡8~12h，撈出瀝干，勻漿，加入文蛤肉體積的3~6倍蒸餾水和鹽酸溶液調節pH至6.5~8.5；通過去離子水浸泡將文蛤中的雜質、細菌及鹽分清除，采用的去離子水可縮短浸泡時間進而縮短提取時間，而且取得很好的浸泡效果，加入的蒸餾水配合鹽酸溶液快速調節文蛤肉的pH至指定范圍，為酶解作準備，通過制備的去離子水和鹽酸溶液明顯的縮短預處理時間，而且預處理效果優異。2）酶解：加入文蛤肉1.1~1.5%重量份的中性蛋白酶在40~50℃條件下酶解1~2h，加入文蛤肉0.15~0.3%重量份的復合酶在40~50℃條件下酶解1~3h，得文蛤肉酶解液；常規的一次酶解受限于加入酶的專一作用，降血壓肽的得率不太理想，采用兩次酶解及復合酶的方式可顯著提高降血壓肽的得率，還可以保證文蛤肉中其他的營養成分不損失，酶解的時間縮短但效果顯著提升，還節省了酶的用量，可有效的節約成本。3）凝膠層析：將文蛤肉酶解液進行酶滅活，酶滅活溫度為90~95℃，時間為5~10min，采用離心機進行離心，離心轉速3000~5000r/min，離心時間5~15min，取上清液，加入文蛤肉1~3%重量份析出劑，靜置，采用超濾膜對加入析出劑后靜置的上清液進行分離純化，超濾膜為截留分子量為3000~10000Da的超濾膜，凝膠層析，得文蛤降血壓肽濃縮液；將酶滅活使蛋白質和降血壓肽聚集沉淀，為離心作準備，離心后取得的上清液中加入析出劑，在上清液中可能存在部分降血壓肽未被提取出來，使用析出劑將這部分降血壓肽充分提取出來，提高降血壓肽的提取率，再采用超濾和凝膠層析技術獲得高純度的降血壓肽，而且不需要加任何化學試劑和不會引起溫度、pH的變化，因而不會影響降血壓肽的純度，可防止降血壓肽失活、自溶等問題。4）凍干保存。采用的凍干保存是一種使降血壓肽在低溫低壓下脫水的干燥工藝，與其他干燥方法相比，具有降血壓肽不變質、易長期儲存、脫水徹底、揮發成分損失少等優點。步驟2中復合酶由以下成分及重量份組成：木瓜蛋白酶10~15份、纖維素酶3~8份、果膠酶1~4份、α1-抗糜蛋白酶1~2份和腺苷酸環化酶0.3~1份和γ-谷氨酰轉移酶0.5~0.8份?？娠@著提高降血壓肽的得率，還可以保證文蛤肉中其他的營養成分不損失，酶解的時間縮短但效果顯著提升，還節省了酶的用量，可有效的節約成本。步驟1中去離子水中含有冰醋酸0.9~1.1份、乙醇0.9~1.1份、硫酸化油1.8~2.2份、4-氟乙酰苯胺1~2份和硝酸正丙酯0.3~0.7份。通過去離子水浸泡將文蛤中的雜質、細菌及鹽分清除，采用的去離子水可縮短浸泡時間進而縮短提取時間，而且取得很好的浸泡效果。步驟2中鹽酸溶液添加有氫氧化鈉2~5重量份和3-乙氧基-4-羥基苯甲醛1~3重量份?？焖僬{節文蛤肉的pH至指定范圍，為酶解作準備，節約提取時間。步驟3中析出劑由以下成分及重量份組成：硫酸銨3~5份、氯化鈉1~3份、硝酸鉀0.5~1份、季戊四醇0.2~0.4份、二氯異氰尿酸鈉0.05~0.1份和次磷酸鎂0.7~0.8份。在上清液中可能存在部分降血壓肽未被提取出來，使用析出劑將這部分降血壓肽充分提取出來，且上述組合物起到了一定的活性保持效果，間接提高了降血壓肽的提取率。通過從文蛤中提取降血壓肽的方法得到的文蛤降血壓肽在制備具有降血壓功效的藥物和食品中應用。與現有技術相比，本法的優點在于：采用的去離子水可縮短浸泡時間進而縮短提取時間，而且取得很好的浸泡效果，加入的蒸餾水配合鹽酸溶液快速調節文蛤肉的pH至指定范圍，通過制備的去離子水和鹽酸溶液明顯的縮短預處理時間，而且預處理效果優異。采用兩次酶解及復合酶的方式可顯著提高降血壓肽的得率，還可以保證文蛤肉中其他的營養成分不損失，酶解的時間縮短但效果顯著提升，還節省了酶的用量，可有效的節約成本。離心后取得的上清液中加入析出劑，在上清液中可能存在部分降血壓肽未被提取出來，使用析出劑將這部分降血壓肽充分提取出來，提高降血壓肽的提取率，再采用超濾和凝膠層析技術獲得高純度的降血壓肽，而且不需要加任何化學試劑和不會引起溫度、pH的變化，因而不會影響降血壓肽的純度，可防止降血壓肽失活、自溶等問題。本專利技術制備工藝簡單，預處理時間短，酶解液中降血壓肽含量高，提高降血壓肽含量和提取率，提取到的降血壓肽在具有降血壓功效的藥物和食品中應用，降血壓肽食用安全性高，對高血壓患者起到降壓作用，對血壓正常者無降壓作用，不會有降壓過渡現象。具體實施例以下結合具體實施例作進一步詳細描述：實施例1：一種文蛤降血壓肽的制備方法，制備步驟如下：1）預處理：將文蛤去殼取肉放入去離子水浸泡8~12h，撈出瀝干，勻漿，加入文蛤肉體積的3~6倍蒸餾水和鹽酸溶液調節pH至6.5~8.5；通過去離子水浸泡將本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種文蛤降血壓肽的制備方法，其特征在于以下步驟：1）預處理：將文蛤去殼取肉放入去離子水浸泡，撈出瀝干，勻漿，加入蒸餾水和鹽酸溶液調節pH；2）酶解：加入文蛤肉1.1~1.5%重量份的中性蛋白酶進行酶解，加入文蛤肉0.15~0.3%重量份的復合酶，得文蛤肉酶解液；3）凝膠層析：將文蛤肉酶解液進行酶滅活，離心，取上清液，加入文蛤肉1~3%重量份析出劑，靜置，超濾，凝膠層析，得文蛤降血壓肽濃縮液；4）凍干保存。

【技術特征摘要】
1.一種文蛤降血壓肽的制備方法，其特征在于以下步驟：1）預處理：將文蛤去殼取肉放入去離子水浸泡，撈出瀝干，勻漿，加入蒸餾水和鹽酸溶液調節pH；2）酶解：加入文蛤肉1.1~1.5%重量份的中性蛋白酶進行酶解，加入文蛤肉0.15~0.3%重量份的復合酶，得文蛤肉酶解液；3）凝膠層析：將文蛤肉酶解液進行酶滅活，離心，取上清液，加入文蛤肉1~3%重量份析出劑，靜置，超濾，凝膠層析，得文蛤降血壓肽濃縮液；4）凍干保存。2.根據權利要求1所述的一種文蛤降血壓肽的制備方法，其特征在于：所述步驟1中文蛤肉在去離子水中浸泡8~12h，加入文蛤肉體積的3~6倍蒸餾水，加入鹽酸溶液調節pH至6.5~8.5。3.根據權利要求1所述的一種文蛤降血壓肽的制備方法，其特征在于：所述步驟2中加入中性蛋白酶在40~50℃條件下酶解1~2h，加入復合酶在40~50℃條件下酶解1~3h。4.根據權利要求1所述的一種文蛤降血壓肽的制備方法，其特征在于：所述步驟2中復合酶由以下成分及重量份組成：木瓜蛋白酶10~15份、纖維素酶3~8份、果膠酶1~4份、α1-抗糜蛋白酶1~2份和腺苷酸環化酶0.3~1份和γ-谷氨酰轉移酶0.5~0.8份。5.根據權利...

【專利技術屬性】
技術研發人員：余方苗，李維，黃芳芳，唐云平，楊最素，丁國芳，
申請(專利權)人：浙江海洋大學，
類型：發明
國別省市：浙江,33