sCD40L肝癌早期篩查和診斷標志物的發現和應用制造技術

sCD40L肝癌早期篩查和診斷標志物的發現和應用，本發明專利技術涉及診斷試劑技術領域，特別涉及一種新的肝癌（HCC）早期篩查的檢測標志物和與此相關開發的肝癌篩查和早期診斷檢測試劑盒。為了提高肝癌篩查和早期診斷的準確性和靈敏度，本發明專利技術提供一種新發現的對肝癌早期診斷和高危人群的肝癌篩查具有比現有血清和血漿肝癌分子診斷標志物具有更高敏感性的標志物sCD40L，并提供磁珠化學發光法和基于液相抗體分選磁珠兩種監測體系試劑盒對血清和血漿中的sCD40L進行檢測。本發明專利技術提供的sCD40L檢測體系，具有免疫反應速度較快、特異性高、重復性好、成本低、實驗條件要求簡單等特點。

【技術實現步驟摘要】

專利技術涉及一種新的肝癌（HCC）早期診斷、復發早期診斷和肝癌危險人群（肝硬化患者）肝癌早期篩查的檢測標志物sCD40L和與此相關開發的新型肝癌篩查和早起診斷檢測試劑盒，具體地說該專利對我們發現的新型sCD40L肝癌早期篩查和早期診斷標志物及其產品（基于辣根酶或堿性磷酸酶的化學發光檢測體系和基于液相抗體分選磁珠的檢測體系構成的兩類檢測技術體系）進行保護。它的核心是我們首先發現了sCD40L是對肝癌早期診斷和高危人群的肝癌篩查具有比現有血清和血漿肝癌分子診斷標志物具有更高敏感性的標志物。它的臨床應用將極大地改變肝癌診斷嚴重滯后的局面。因此具有重要的臨床應用價值。
技術介紹
肝細胞癌(hepatoeellularcarcinoma，HCC)是我國發病率以及死亡率最高的惡性腫瘤之一。資料顯示，HCC在惡性腫瘤死亡中居第三位。我國每年新增HCC病人13.5萬人，死亡約11萬人，占全世界HCC死亡人數的45%。大多數的HCC在診斷時已是中晚期，此時癌細胞轉移快，手術后復發率高，對常用的化學治療藥如5-Fu和阿霉素等敏感性差，目前尚難取得令人滿意的治療效果，患者愈后較差。多數患者HCC的發生經歷了從慢性肝炎到肝硬化，最終發展為肝癌的病理演變歷程。因此利用肝癌早期診斷標志物篩查早期發現肝癌，尤其在高危人群中發現早期肝癌，對于挽救患者生命，降低家庭和社會醫療成本均具有重要的價值。近年來肝癌診斷的血清標志物已有許多，其中最受關注的是美國NCI的EDRN小組正推進三期臨床試驗的5個血清學標志物。它們是AFP/AFP-L3，DCP，GP73，HGF和骨橋蛋白。其中AFP-L3，DCP，GP73，HGF主要分析它們的肝癌特異性巖藻糖化的水平。它們的前期研究顯示在肝癌早期診斷中具有一定的價值。然而這些蛋白都是經過腫瘤細胞分泌或漏出，而且這些蛋白與肝細胞增殖關系密切，因此往往在肝硬化和肝癌橫向隊列比較時差異顯著，但當針對危險人群動態跟蹤篩查時，往往出現肝癌增高的患者在肝硬化階段因為肝再生結節的存在就已經增高，因此至今不能確定用其作為肝癌預警指標。多數肝癌的發生與肝臟的長期慢性病理過程密不可分，往往經歷從慢性肝炎肝硬化再到肝癌的病理過程。我們發現sCD40L作為肝癌預警標志物至少有兩大優勢。第一，它是由血小板釋放到血漿中的，而肝硬化和正常人群相比，血小板水平因脾功能亢進而顯著下降，因此sCD40L的背景水平在肝硬化患者中較正常人群顯著降低，因此在由肝硬化到肝癌發生時會有更高的敏感性。第二，肝癌時，sCD40L從血小板釋放是一個酶促反應過程，存在持續的級聯放大作用，因此和AFP、GP73等這些肝癌分泌型血漿分子標志物相比，敏感性和特異性大大的增強，使肝硬化危險人群的肝癌有效篩查真的成為可能。
技術實現思路
本專利技術目的在于我們發現了一種可用于肝癌早期篩查，肝癌復發早期診斷和肝癌常規診斷的一種血漿分子標志物，我們對該標志物的使用進行專利保護。保護的內容包括利用該標志物（sCD40L）進行（1）肝癌高危人群的臨床和科研動態篩查；（2）肝癌患者臨床診斷；（3）肝癌患者肝移植、肝癌微創治療和肝癌切除術后的復發早期診斷。我們同事利用該標志物開發基于sCD40L的磁珠化學發光法和基于液相抗體分選磁珠的檢測體系構成的兩類診斷試劑盒用于上述三類診斷。本專利技術的專利技術思路基于下述二方面的。第一，HCC目前在我國已占癌癥死亡的第二位，80%來自于肝硬化的患者，因此是一個有著特殊危險人群的癌癥，發現特異的肝癌血清或血漿分子標志物用于該特殊人群的肝癌早期篩查一直是全世界相關醫務工作者最關注的技術；第二，雖然而至今為止仍沒有發現一個有效地可用于肝癌早期篩查的分子標志物，美國國家腫瘤研究院正集中對5個在肝癌早期診斷具有潛在價值的血漿分子標志物進行三期臨床試驗。為了達成本專利技術上述目的，我們對該標志物與現在全世界公認的臨床上用于肝癌血清學診斷的標志物AFP進行了對比，AFP的檢測利用臨床通用的羅氏AFP酶聯化學發光檢測法：（1）利用橫斷面標本驗證發現sCD40L是一個完全優于AFP的臨床肝癌檢測標志物。雖然至今為止，已有AFP/AFP-L3，DCP，GP73，HGF和骨橋蛋白等標志物被用于肝癌的診斷，但臨床上普遍用的還是AFP,但它的陽性率不足60%,且往往只有中晚期才敏感,因此發現新的標志物應非常重要.我們針對我們發現的sCD40L標志物在正常人群,慢性肝炎,肝硬化和肝癌四類橫斷面人群(各50例)進行了分析，結果見圖1,不僅HCC與正常人群,慢性肝炎,肝硬化之間有顯著差異(P<0.01),而且肝硬化患者的水平較正常人群顯著降低（P<0.05）.而該人群的AFP水平雖然在少數HCC晚期（20%）顯著增高，但多數處于低水平，因離散度大而沒有顯著差異（圖2）。（2）利用肝癌患者肝移植、肝癌微創治療和肝癌切除術前后及復發標本驗證發現sCD40L是一個完全優于AFP的臨床肝癌復發早期診斷的檢測標志物。首先我們在10例肝癌射頻微創治療復發的患者中進行了早期復發診斷分析，結果顯示，10例HCC患者有8例sCD40L在微創治療前血漿中的含量處于高水平（圖3的第一點），微創治療后的第3天到第7天就降到最低水平（圖3的第三和第四點）。非常有趣的是在第二次復發的早期（直徑<3CM）sCD40L又迅速增高（圖3的第五點）。微創治療后sCD40L的水平又迅速下降（圖3的第六和第七點）。而AFP在上述10例患者中只有4例的AFP在微創治療前血漿中的含量處于高水平，也存在微創治療后的下降，但在sCD40L增高的HCC復發時間點都不能檢測到AFP水平的增高（圖3），提示AFP在肝癌復發診斷的敏感性遠低于sCD40L.然后我們利用50例肝癌肝移植的患者的移植前后血漿sCD40L水平分析顯示sCD40L水平在移植后5到7天的血漿中的水平顯著降低（圖4）。這進一步說明血漿sCD40L與肝癌的存在密切相關，可用于肝癌肝移植、肝癌切除術后及肝癌微創治療后肝癌復發或轉移復發的早期診斷。（3）利用肝硬化人群的動態篩查驗證發現sCD40L是一個至今為止最有希望用于針對肝癌危險人群的臨床肝癌早期篩查診斷的檢測標志物。多數患者HCC的發生經歷了從慢性肝炎到肝硬化，最終發展為肝癌的病理演變歷程。因此利用肝癌早期診斷標志物篩查早期發現肝癌，尤其在高危人群中發現早期肝癌，對于挽救患者生命，降低家庭和社會醫療成本均具有重要的價值。我們針對135例肝硬化動態篩查隊列的檢測顯示，對于同一個患者，sCD40L的水平在連續6個月以上間隔的兩個時間點的檢測結果顯示一致性達到95%（圖5），而11例在這一隊列中發現的早期肝癌，肝癌確診點的血漿sCD40L較上一個監測點高2到5倍（圖6），而這11例由肝硬化到肝癌的AFP動態檢測結果顯示，AFP在肝癌確診點的血漿水平和上一個監測點之間沒有顯著差異（圖7）。同時sCD40L可用于肝硬化到肝癌患者的早期預警篩查而AFP卻不能。本專利技術的有益效果：（1）本專利技術發現了一個可以用于肝癌早期篩查、肝癌復發早期診斷和肝癌診斷的血漿分子標志物（sCD40L）.肝癌在中國占腫瘤死亡率的第二位，高死亡率的重要原因是無法早期診斷，因此sCD40L早期診斷對于挽救肝癌患者的生命非常重要。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
發現一種新的檢測標志物sCD40L，用于肝癌（HCC）診斷，其特征在于，所述標志物是一種由血小板釋放的血漿分子標志物。

【技術特征摘要】
1.發現一種新的檢測標志物sCD40L，用于肝癌（HCC）診斷，其特征在于，所述標志物是一種由血小板釋放的血漿分子標志物。2.根據權利要求1所述的用于肝癌（HCC）診斷，其特征在于可用于肝癌（HCC）早期診斷、復發早期診斷和肝癌危險人群（肝硬化患者）肝癌早期篩查。3.根據權利要求1所述的血小板釋放的血漿分子標志物，其特征在于，肝癌時sCD40L從血小板釋放是一個酶促反應過程，存在持續的級聯放大作用，因此和AFP、GP73等這些肝癌分泌型血漿分子標志物相比，敏感性和特異性大大的增強。4.根據權利要求1所述的血漿分子標志物，其特征在于，sCD40L由血小板釋...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳德喜，
申請(專利權)人：南京南泰生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32