一種提高細胞活性并促進血管化的新方法技術

本發明專利技術提出了提高細胞活性的方法，該方法包括：將間充質干細胞依據細胞表面標志物進行分選處理；以及將目標細胞與分選處理后間充質干細胞以及填充劑進行接觸，所述填充劑包括選自膠原蛋白、透明質酸、鈣羥基磷灰石、聚乳酸和富血小板血漿的至少之一。該方法用于提高細胞活性，如成纖維細胞的活性，相比于現有技術，具有免疫原性低、見效快、自然性、效果持久、風險低、療效好的優勢。該方法可有效用于創傷修復等領域。

A new method for improving the activity of cells and promoting vascularization

The invention provides methods to improve cell activity, the method comprises: mesenchymal stem cells based on cell surface marker sorting processing; and the target cells and sorting after mesenchymal stem cells and filler contacts, the filler comprising at least one of a selected protein, hyaluronic acid, collagen, calcium hydroxyapatite poly lactic acid and platelet rich plasma. Compared with the prior art, the method has the advantages of low immunogenicity, quick effect, naturalness, lasting effect, low risk and good curative effect. This method can be used in the field of trauma repair.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物醫藥領域，具體的，本專利技術涉及提高細胞活性的方法。
技術介紹
皮膚作為人體的最大器官，具有屏障、保護、調節體溫和感覺的功能。由于炎癥、潰瘍、燙傷、燒傷等因素造成的皮膚缺損，嚴重的可危及生命。目前臨床通常采用自體皮瓣或皮膚移植的方法治療缺損創面，但面臨供皮區新的創傷缺陷，以及供皮區來源的不足等問題。此外移植物與移植部位臨近的皮膚也存在顏色、質地、功能上的差異。因此，如何有效開展皮膚損傷創面的修復仍是人們不斷探求和解決的問題。皮膚可分表皮、真皮及皮下組織三層，其中真皮層是由細胞和細胞外基質共同構成，成纖維細胞是真皮層的主要細胞，其正常的增殖、分化維系著皮膚正常的結構和生理功能；細胞外基質是由細胞合成并分泌、圍繞細胞相互作用的一類大分子物質，主要由四大類分子組成：膠原、彈性蛋白、糖蛋白及蛋白多糖。膠原纖維、網狀纖維和彈性纖維通過一定方式相互作用，交織成網，埋于以透明質酸為主要成分形成的凝膠狀基質中。在皮膚創傷愈合的過程中，成纖維細胞會大量增殖并分泌膠原等細胞外基質以及細胞因子成分，進一步復合血管結構形成類似真皮層的組織。因此在皮膚創傷愈合的過程中，成纖維細胞的活化將對創面修復起到重要的調控作用。然而，目前創傷修復的技術仍有待進一步改進。
技術實現思路
本專利技術旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本專利技術提出了一種可以用于修復創傷的提高細胞活性的方法，該方法具有免疫原性低、見效快、自然性、療效好、效果持久、風險低的優勢。在本專利技術的第一方面，本專利技術提出了一種提高細胞活性的方法。根據本專利技術的實施例，該方法包括：將間充質干細胞進行細胞表面標志物分選處理；以及將目標細胞與分選處理后間充質干細胞以及填充劑進行接觸，所述填充劑包括選自膠原蛋白、透明質酸、鈣羥基磷灰石、聚乳酸和富血小板血漿的至少之一。利用根據本專利技術實施例的提高細胞活性的方法，以用來創傷修復，相比于現有技術，克服了自體皮膚移植見效慢、效果不穩定的缺陷。此外，根據本專利技術實施例的提高細胞活性的方法，填充劑與間充質干細胞聯合使用，填充劑可以將間充質干細胞維持在一定的空間和體積范圍內，不僅可以起到保護和潤滑細胞的作用，還能夠提高該范圍內有效因子的作用濃度，更高效的促進目標細胞活性的增加。本專利技術實施例的方法，免疫原性低、見效更快、自然性、效果更加持久、安全有效。根據本專利技術的實施例，上述提高細胞活性的方法還可以進一步包括如下附加技術特征至少之一：根據本專利技術的實施例，所述間充質干細胞為臍帶間充質干細胞。臍帶間充質干細胞來源廣泛，且臍帶間充質干細胞免疫原性更低，更加安全，臍帶間充質干細胞則能夠不斷分泌膠原蛋白并進一步分泌包括SCF、bFGF、VEGF、IGF等在內的因子，刺激真皮層中成纖維細胞存活與增殖并進一步分泌膠原蛋白、透明質酸和彈性纖維。此外，臍帶間充質干細胞以旁分泌方式產生多種血管生成因子，可以促進形成新的毛細血管網。不僅如此，由于臍帶間充質干細胞在一定條件下也可轉化為內皮細胞參與微血管的形成，起到營養真皮及皮下相關細胞的作用，本專利技術實施例的方法用于提高細胞活性更加持久、有效。根據本專利技術的實施例，所述間充質干細胞為P1～P6代間充質干細胞。專利技術人通過實驗發現，大于P6代的間充質干細胞細胞狀態不如早代次的細胞、分泌的細胞因子量也有所減少，P1～P6代間充質干細胞本身狀態良好、細胞活性和因子分泌較強，用于提高細胞活性效果更佳。根據本專利技術的實施例，所述細胞表面標志物包括選自NG-2、Cx43、DLK1、PDGFR-α(CD140a)、PDGFR-β(CD140b)、CD13、CD44、CD105、CD133、CD146、CD248、Flt-1和KDR(CD309)的至少之一。專利技術人發現，間充質干細胞經過依據NG-2、Cx43、DLK1、PDGFR-α(CD140a)、PDGFR-β(CD140b)、CD13、CD44、CD105、CD133、CD146、CD248、Flt-1和KDR(CD309)的至少之一的細胞表面標志物分選后，所得的間充質干細胞對營養細胞、細胞進一步的血管化有明顯的促進作用，采用上述分選后的間充質干細胞的用于提高細胞活性，藥效更好。根據本專利技術的實施例，所述分選處理后間充質干細胞以懸浮于培養基、懸浮于生理鹽水或貼壁培養于培養基中的形式提供的。根據本專利技術的實施例，所述間充質干細胞以上述三種形式的其中一種提供，可保持間充干細胞的良好細胞狀態。根據本專利技術的實施例，所述分選處理后間充質干細胞以懸浮于培養基或懸浮于生理鹽水中的形式提供，所述間充質干細胞的密度為0.1*106-10*106個/ml。專利技術人通過實驗發現，間充質干細胞在培養基或生理鹽水中的懸浮密度為0.1*106-10*106個/ml，可進一步保證間充質干細胞的良好狀態并提供合適大小的體積比，進而使得本專利技術實施例的方法用于提高細胞活性的效果更佳。根據本專利技術的實施例，所述培養基或所述生理鹽水與所述填充劑的體積比為1:0.5～1:5。專利技術人發現，間充質干細胞的在培養基或生理鹽水中的懸浮密度為0.1*106-10*106個/ml，培養基或生理鹽水與填充劑的體積比為1:0.5～1:5，使得本專利技術實施例的用于提高細胞活性的方法的效果更佳。根據本專利技術的實施例，所述分選處理后間充質干細胞以貼壁培養于培養基中的形式提供，所述間充質干細胞的貼壁密度為1*104～3*104個/cm2。專利技術人通過實驗發現，間充質干細胞貼壁培養于培養基中，貼壁密度為1*104～3*104個/cm2，可進一步保證間充質干細胞的良好狀態，進而使得本專利技術實施例的方法用于提高細胞活性的效果更佳。根據本專利技術的實施例，所述培養基與所述填充劑的體積比為1:0.5～1:5。專利技術人發現，培養基與填充劑的體積比在1:0.5～1:5范圍內，所述方法在提高細胞的活性上效果更加顯著。根據本專利技術的實施例，所述目標細胞、所述分選處理后間充質干細胞的個數比為1：0.1～1：10。專利技術人發現，目標細胞、分選處理后間充質干細胞的個數比在1:0.1～1：10范圍內，對提高目標細胞的活性更加快速、有效。附圖說明圖1是根據本專利技術實施例的臍帶間充質干細胞的形態圖；以及圖2是根據本專利技術實施例的通過流式細胞檢測鑒定所選擇的臍帶間充質干細胞的表面標志物的結果圖。具體實施方式下面詳細描述本專利技術的實施例。下面描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本專利技術，而不能理解為對本專利技術的限制。提高細胞活性的方法在本專利技術的第一方面，本專利技術提出了一種提高細胞活性的方法。根據本專利技術的實施例，該方法包括：將間充質干細胞依據細胞表面標志物進行分選處理；以及將目標細胞與分選處理后間充質干細胞以及填充劑進行接觸，所述填充劑包括選自膠原蛋白、透明質酸、鈣羥基磷灰石、聚乳酸和富血小板血漿的至少之一。利用根據本專利技術實施例的提高細胞活性的方法，以用來創傷修復，相比于現有技術，克服了自體成纖維細胞移植見效慢、效果不穩定的缺陷。根據本專利技術實施例的方法，分選后的間充質干細胞群更為單一，注射到真皮層與皮下脂肪層時更有利于膠原蛋白的分泌，也可更有效的活化、營養自體細胞，從而刺激血管的發生，最終使得更多的營養物質被運送到創傷部位的皮膚。這樣可以使得該部位的細胞獲得更多的營養，進一步刺激自體細胞分本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種提高細胞活性的方法，其特征在于，包括：將間充質干細胞依據細胞表面標志物進行分選處理；以及將目標細胞與分選處理后間充質干細胞以及填充劑進行接觸，所述填充劑包括選自膠原蛋白、透明質酸、鈣羥基磷灰石、聚乳酸和富血小板血漿的至少之一。

【技術特征摘要】
1.一種提高細胞活性的方法，其特征在于，包括：將間充質干細胞依據細胞表面標志物進行分選處理；以及將目標細胞與分選處理后間充質干細胞以及填充劑進行接觸，所述填充劑包括選自膠原蛋白、透明質酸、鈣羥基磷灰石、聚乳酸和富血小板血漿的至少之一。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述間充質干細胞為臍帶間充質干細胞。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述間充質干細胞為P1～P6代間充質干細胞。4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞表面標志物包括選自NG-2、Cx43、DLK1、PDGFR-α、PDGFR-β、CD13、CD44、CD105、CD133、CD146、CD248、Flt-1和KDR的至少之一。5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述分選處理后間充質干細胞預以懸浮于培養...

【專利技術屬性】
技術研發人員：裴雪濤，何麗娟，房芳，謝小燕，岳文，南雪，姚海雷，
申請(專利權)人：中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所，華南生物醫藥研究院，
類型：發明
國別省市：北京;11