本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種啤酒及其原輔料中AFB1的超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，現(xiàn)有技術(shù)中測定食品中霉菌毒素的含量所采用的方法多為高效液相色譜法，其具有操作復(fù)雜、成本高、準(zhǔn)確性低等問題，本發(fā)明專利技術(shù)所建立的超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法對現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)，具有以下優(yōu)點：利用穿漏模式，無損耗；省去衍生環(huán)節(jié)，操作簡單；節(jié)省成本；回收率高、準(zhǔn)確性好；可定性定量。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及食品檢測領(lǐng)域，具體涉及一種超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的檢測方法，用于檢測啤酒及其原輔料中黃曲霉毒素B1(AFB1)的含量。
技術(shù)介紹
黃曲霉毒素是黃曲霉菌的代謝產(chǎn)物，對人和畜禽有強(qiáng)烈的毒性，1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為1類致癌物。黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。凡含有淀粉較多的食品，比如大豆、玉米、大米、小麥、花生果仁、油菜籽等均易生長黃曲霉菌，因而極易含有黃曲霉毒素。黃曲霉毒素主要有B1，B2，G1，G2以及另外兩種代謝產(chǎn)物M1，M2，在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也最強(qiáng)。啤酒的原輔料主要有大麥、玉米、大米、小麥等，這些原輔料均屬于糧食類物質(zhì)，因此極易被黃曲霉毒素污染，因此，準(zhǔn)確檢測其中黃曲霉毒素的含量尤為重要。液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS/MS)又叫液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，它以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)。樣品在質(zhì)譜部分和流動相分離，被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢的互補(bǔ)，將色譜對復(fù)雜樣品的高分離能力，與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點結(jié)合起來，在藥物分析、食品分析和環(huán)境分析等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。然而，傳統(tǒng)的高效液相色譜法在測定食品中霉菌毒素含量的過程中具有操作復(fù)雜，成本高，準(zhǔn)確度低等問題。
技術(shù)實現(xiàn)思路
針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述缺陷，本專利技術(shù)提供了一種啤酒及其原輔料中黃曲霉毒素B1的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，該方法省去了衍生環(huán)節(jié)，操作簡單，能夠有效節(jié)約成本，準(zhǔn)確性好。本專利技術(shù)采取的技術(shù)方案如下：啤酒及其原輔料中AFB1的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，液相色譜條件為：色譜柱：(C18，1.7μm)色譜柱；流動相：乙腈和質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流速：0.5mL/min；質(zhì)譜條件為：離子源：電噴霧離子源；電離方式：正離子電離ESI+；監(jiān)測模式：MRM；毛細(xì)管電壓：1.7KV；脫溶劑氣流量：650L/H；錐孔氣流量：50L/H。優(yōu)選的，所述液相色譜儀流動相梯度洗脫程序為：其中，A流動相為乙腈，B流動相為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液，兩者按體積百分比混合。優(yōu)選的，所述質(zhì)譜儀的采集參數(shù)為：優(yōu)選的，被檢測固體樣品中黃曲霉毒素B1提取方法包括如下步驟：先將樣品粉碎為粉末狀，然后用體積分?jǐn)?shù)84％的乙腈水溶液超聲提取30min，靜置30min后取上清液加入用乙腈飽和過的正己烷再次超聲提取30min，5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10min，取下層溶液即可；樣品與乙腈水溶液的質(zhì)量體積比為1:5。優(yōu)選的，所述固體樣品為大麥麥芽、大麥、大米、小麥麥芽或玉米。優(yōu)選的，被檢測液體樣品中黃曲霉毒素B1提取方法包括如下步驟：先將液體樣品過濾脫氣，然后用體積分?jǐn)?shù)84％的乙腈水溶液超聲提取30min，靜置30min后取上清液加入用乙腈飽和過的正己烷再次超聲提取30min，5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10min，取下層溶液即可；樣品與乙腈水溶液的體積比為1:5。優(yōu)選的，所述液體樣品為啤酒或麥汁。優(yōu)選的，被檢測樣品中黃曲霉毒素B1提取后獲得的提取液通過黃曲霉毒素多功能專用柱進(jìn)行純化，然后與質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液按1:1的體積比進(jìn)行混勻，混勻后在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10min，取上清液用0.22μm的濾膜過濾，然后進(jìn)行黃曲霉毒素B1檢測。優(yōu)選的，被檢測樣品中AFB1含量的計算公式為：公式中，x——AFB1的含量，單位μg/kg；Csi——基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液黃曲霉毒素i的濃度，單位μg/L；Ai——試樣溶液黃曲霉毒素i的峰面積；Asi——基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中黃曲霉毒素i的峰面積；V1——樣品定容體積，單位mL；m——樣品質(zhì)量，單位mg；V2——樣品體積，單位mL；f——稀釋倍數(shù)；Ci——樣品上機(jī)液中黃曲霉毒素i的濃度，單位μg/L。優(yōu)選的，所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制方法包括如下步驟：稱取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液作儲備液，將儲備液稀釋100倍作為工作液，工作液的進(jìn)樣量為10μL。做標(biāo)準(zhǔn)曲線時，必要時可將工作液用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液稀釋，用移液器分別量取合適的體積，UPLC-MS/MS檢測。本專利技術(shù)的有益效果在于：現(xiàn)有技術(shù)中測定食品中霉菌毒素的含量所采用的方法多為高效液相色譜法，其具有操作復(fù)雜、成本高、準(zhǔn)確性低等問題，本專利技術(shù)所建立的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法對現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)，具有以下優(yōu)點：1)利用穿漏模式，無損耗；2)省去衍生環(huán)節(jié)，操作簡單；3)節(jié)省成本；4)回收率高、準(zhǔn)確性好；5)可定性定量。具體實施方式下面將對本專利技術(shù)技術(shù)方案的實施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。以下實施例僅用于更加清楚地說明本專利技術(shù)的技術(shù)方案，因此只作為示例，而不能以此來限制本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。本專利技術(shù)所述檢測方法采用的儀器設(shè)備為三級四重桿質(zhì)譜儀(液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀)。本專利技術(shù)所述檢測方法主要針對啤酒原輔料、麥汁及啤酒中黃曲霉毒素B1的檢測。所述啤酒原輔料主要包括大麥麥芽、大麥、大米、小麥麥芽或玉米。本專利技術(shù)所述超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法包括如下步驟：(1)樣品中AFB1提取固體樣品中AFB1提?。汗腆w樣品(大麥麥芽、大麥、大米、小麥麥芽或玉米)細(xì)粉碎，準(zhǔn)確稱取5g于25mL容量瓶中，用乙腈/水(乙腈：水體積比為84：16)溶液定容，定容后超聲提取30min，靜置30min，然后取上清液加入5mL乙腈飽和過的正己烷，超聲提取30min，離心10min(轉(zhuǎn)速5000r/min)，取下層溶液即可；液體樣品中AFB1提?。簻?zhǔn)確量取過濾脫氣后的液體樣品(麥汁或啤酒)5mL，置于25mL容量瓶中，用乙腈/水(乙腈：水體積比為84：16)溶液定容，定容后超聲提取30min，靜置30min，然后取上清液加入5mL乙腈飽和過的正己烷，超聲提取30min，離心10min(轉(zhuǎn)速5000r/min)，取下層溶液即可；(2)AFB1提取液純化取10mL下層溶液(AFB1提取液)過黃曲霉毒素多功能專用柱，棄去剛開始的3mL過柱液，收集余下液體，取1mL收集液與1mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液混勻，混勻后離心10min(轉(zhuǎn)速10000r/min)，然后取上清液用0.22μm有機(jī)濾膜過濾；(3)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測取步驟(2)過濾好的濾液進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測，液相色譜條件為：色譜柱：(C18，50mm×2.1mm，粒徑1.7μm)色譜柱；流動相：乙腈和質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流速：0.5mL/min；液相色譜儀流動相梯度洗脫程序為：時間(min)流速(mL/min)流動相A％流動相B％00.50015.085.02.000.50015.085.03.000.50035.065.04.000.50090.010.04.010.50015.085.07.000.50015.085.0其中，A流動相為乙腈，B流動相為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液，兩者按體積百分比本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
啤酒及其原輔料中AFB1的超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，其特征在于，高效液相色譜條件為：色譜柱：(C18，1.7μm)色譜柱；流動相：乙腈和質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流速：0.5mL/min；質(zhì)譜條件為：離子源：電噴霧離子源；電離方式：正離子電離ESI+；監(jiān)測模式：MRM；毛細(xì)管電壓：1.7KV；脫溶劑氣流量：650L/H；錐孔氣流量：50L/H。
【技術(shù)特征摘要】
1.啤酒及其原輔料中AFB1的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，其特征在于，高效液相色譜條件為：色譜柱：(C18，1.7μm)色譜柱；流動相：乙腈和質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流速：0.5mL/min；質(zhì)譜條件為：離子源：電噴霧離子源；電離方式：正離子電離ESI+；監(jiān)測模式：MRM；毛細(xì)管電壓：1.7KV；脫溶劑氣流量：650L/H；錐孔氣流量：50L/H。2.如權(quán)利要求1所述的啤酒及其原輔料中AFB1的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，其特征在于，所述液相色譜儀流動相梯度洗脫程序為：時間(min)流速(mL/min)流動相A％流動相B％00.50015.085.02.000.50015.085.03.000.50035.065.04.000.50090.010.04.010.50015.085.07.000.50015.085.0其中，A流動相為乙腈，B流動相為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％的甲酸水溶液，兩者按體積百分比混合。3.如權(quán)利要求1所述的啤酒及其原輔料中AFB1的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，其特征在于，所述質(zhì)譜儀的采集參數(shù)為：4.如權(quán)利要求1所述的啤酒及其原輔料中AFB1的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，其特征在于，被檢測固體樣品中黃曲霉毒素B1提取方法包括如下步驟：先將樣品粉碎為粉末狀，然后用體積分?jǐn)?shù)84％的乙腈水溶液超聲提取30min，靜置30min后取上清液加入用乙腈飽和過的正己烷再次超聲提取30min，5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10min，取下層溶液即可；樣品與乙腈水溶液的質(zhì)量體積比為1:5。5.如權(quán)利要求4所述的啤酒及其原輔料中AFB1的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，其特征在于，所述固體樣品為大麥麥芽、大麥、大米、小麥麥芽或玉米。6.如權(quán)利要求1所述的啤酒及其原輔...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：代兵，劉秀婷，謝高彥，疏仁宗，郭春景，馬艷粉，吳一鳴，周翠英，鄒雙雙，田紅，張寶，張波，
申請(專利權(quán))人：浙江國正檢測技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江;33
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