乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用制造技術

本發明專利技術涉及乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用，所述藥物用于治療或預防MPTP的毒理學作用，所述乳鐵蛋白是脫鐵乳鐵蛋白或全鐵乳鐵蛋白，這兩種藥物均能降低腦內黑質鐵的水平，發揮對PD的神經保護作用，APO?Lf與HOLO?Lf對外周鐵水平均沒有影響，既不螯合鐵造成貧血，也不增加鐵造成鐵負載。在一個實施方案中，所述乳鐵蛋白是脫鐵乳鐵蛋白或全鐵乳鐵蛋白。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于蛋白質藥物領域，具體地涉及乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用。
技術介紹
帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)是一種常見的中樞神經系統退行性疾病，臨床表現主要有靜止性震顫、肌僵直、運動減少和姿勢反射障礙等癥狀。PD的神經病理學基礎是黑質致密帶(substantianigraparscompacta，SNpc)多巴胺(dopamine,DA)能神經元的變性脫失以及由此而導致的紋狀體DA含量降低。PD的病因目前尚未完全明了，但黑質(substantianigra,SN)鐵聚積被認為參與了PD的發病。PD患者的中腦SNpc有大量的激活的小膠質細胞，這些激活的小膠質細胞和殘存的DA能神經元又有大量的鐵沉積，然而小膠質細胞激活和鐵聚積之間的關系尚未闡明。乳鐵蛋白(lactoferrin，Lf)是一種鐵結合性糖蛋白，屬于轉鐵蛋白家族成員之一，由許多外分泌腺分泌，存在于人類和其他哺乳動物的淚液、唾液、乳汁和嗜中性粒細胞中。乳鐵蛋白受體(lactoferrinreceptor，LfR)廣泛存在于人體內的不同組織和細胞類型中，其作用是通過受體介導的內吞參與Lf內化。Lf可以結合轉運三價鐵離子，是鐵在機體內代謝及轉運的關鍵載體。Lf還具有廣泛的生物學功能：抗氧化應激，抗癌，調控免疫炎癥反應等，可能與其鐵結合特性無關。在體內Lf主要以兩種形式存在：不含鐵形式(apo-lactoferrin，apo-Lf)和鐵飽和形式(holo-lactoferrin，holo-Lf)。在腦內只有激活的小膠質細胞合成釋放Lf，1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP)模型小鼠中LfmRNA的表達水平升高。LfR主要在神經元上表達，腦組織染色發現PD患者中腦的神經元和微血管中LfR反應性表達增加，提示Lf/LfR與PD鐵聚積和神經元進行性退化之間有一定關聯性。乳鐵蛋白(lactoferrin，Lf)是一種鐵結合性糖蛋白，屬于轉鐵蛋白家族成員之一，由許多外分泌腺分泌，存在于人類和其他哺乳動物的淚液、唾液、乳汁和嗜中性粒細胞中。乳鐵蛋白受體(lactoferrinreceptor，LfR)廣泛存在于人體內的不同組織和細胞類型中，其作用是通過受體介導的內吞參與Lf內化。Lf可以結合轉運三價鐵離子，是鐵在機體內代謝及轉運的關鍵載體。Lf還具有廣泛的生物學功能：抗氧化應激，抗癌，調控免疫炎癥反應等，可能與其鐵結合特性無關。在體內Lf主要以兩種形式存在：不含鐵形式(apo-lactoferrin，apo-Lf)和鐵飽和形式(holo-lactoferrin，holo-Lf)。在腦內只有激活的小膠質細胞合成釋放Lf，1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP)模型小鼠中LfmRNA的表達水平升高。LfR主要在神經元上表達，腦組織染色發現PD患者中腦的神經元和微血管中LfR反應性表達增加，提示Lf/LfR與PD鐵聚積和神經元進行性退化之間有一定關聯性。我們以前的研究結果表明，Lf對體外培養的神經元具有保護作用。本實驗的目的是在體研究Lf是否影響了PD中樞神經系統和外周的鐵代謝，并探討兩種形式的Lf—鐵游離形式(Apo-Lf)和鐵飽和形式(Holo-Lf)的區別。在具體的機制方面，我們研究了Lf是否來通過調節鐵轉運蛋白表達的影響鐵在中樞以及外周的分布，以及它是否發揮了抗氧化和抗凋亡的保護作用。中國專利申請200410004604.X公開了活化乳鐵蛋白的制造方法。中國專利申請200880114714.8公開了脫鐵乳鐵蛋白組合物及其用于治療病毒性丙型肝炎的方法。這些現有技術都公開了脫鐵乳鐵蛋白對于治療的疾病的重要性。然而，現有技術關于脫鐵乳鐵蛋白對于治療帕金森病的療效未見報道。
技術實現思路
為解決上述現有技術存在的問題，本專利技術的目的在于提供一種用于治療帕金森病的乳鐵蛋白。為達到上述目的，本專利技術的技術方案為：乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用，所述藥物用于治療或預防MPTP的毒理學作用。乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用，所述藥物用于治療或預防帕金森病。所述乳鐵蛋白是脫鐵乳鐵蛋白或全鐵乳鐵蛋白，這兩種藥物均能降低腦內黑質鐵的水平，發揮對PD的神經保護作用，APO-Lf與HOLO-Lf對外周鐵水平均沒有影響，既不螯合鐵造成貧血，也不增加鐵造成鐵負載，APO-Lf與HOLO-Lf降低腦內黑質鐵的作用與鐵螯合不相關，通過調節鐵轉運蛋白的表達而實現降低腦鐵的功能，即降低鐵轉入蛋白DMT1的表達，增加鐵轉出蛋白Fpn1表達。所述脫鐵乳鐵蛋白的濃度為10mg/kg；所述全鐵乳鐵蛋白的濃度為15mg/kg。其中，APO-Lf與HOLO-Lf除了降低腦鐵水平發揮神經保護作用之外，還能通過抗凋亡，增加Bcl-2，Bcl-2/Bax及降低CleavedCaspase-3，抗氧化，增加SOD1發揮神經保護作用。其中所述乳鐵蛋白減輕MPTP所致實驗動物脾臟質量的丟失。其中所述乳鐵蛋白拮抗MPTP對黑質DA能神經元的神經毒作用。其中所述乳鐵蛋白可拮抗MPTP導致脾臟鐵減少的毒性作用，從而維持脾臟內的鐵儲存量；但對肝臟鐵的水平沒有影響。其中所述乳鐵蛋白減輕MPTP所致紋狀體內DA含量的降低。其中所述乳鐵蛋白降低MPTP處理組黑質的鐵沉積水平。相對于現有技術，本專利技術的有益效果為：本專利技術基于以下意料不到的發現：脫鐵乳鐵蛋白和乳鐵蛋白促進了帕金森病的治療。1.乳鐵蛋白在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療或預防MPTP的毒理學作用。2.乳鐵蛋白在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療或預防帕金森病。3.項1或2的用途，其中所述乳鐵蛋白是脫鐵乳鐵蛋白或全鐵乳鐵蛋白。4.項3的用途，其中所述脫鐵乳鐵蛋白Apo-Lf的濃度為10mg/kg。5.項3的用途，其中所述全鐵乳鐵蛋白Holo-Lf的濃度為15mg/kg。6.項1的用途，其中所述乳鐵蛋白減輕MPTP所致實驗動物脾臟質量的丟失。7.項1的用途，其中所述乳鐵蛋白拮抗MPTP對黑質DA能神經元的神經毒作用。8.項1的用途，其中所述乳鐵蛋白減輕MPTP所致紋狀體內DA含量的降低。9.項1的用途，其中所述乳鐵蛋白降低MPTP處理組黑質的鐵沉積水平。附圖說明圖1:MPTP組小鼠在接受Lf處理后體重損失減輕(Figure.1A)，爬竿實驗時間縮短(Fugure.1B)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。圖2MPTP小鼠在接受Lf處理后脾臟組織重量損失程度降低，高劑量Lf的效果更為顯著。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。圖3Lf通過拮抗MPTP所致的小鼠黑質TH陽性細胞數量減少發揮對DA神經元的保護作用。15mg/kgHolo-Lf和10mg/kgApo-Lf均表現出最佳保護作用。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。圖4Lf拮抗MPTP所致的紋狀體中DA與其代謝產本文檔來自技高網...

【技術保護點】
乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用，所述藥物用于治療或預防MPTP的毒理學作用。

【技術特征摘要】
1.乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用，所述藥物用于治療或預防MPTP的毒理學作用。2.乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用，所述藥物用于治療或預防帕金森病。3.權利要求1或2的用途，其中所述乳鐵蛋白是脫鐵乳鐵蛋白或全鐵乳鐵蛋白，這兩種藥物均能降低腦內黑質鐵的水平，發揮對PD的神經保護作用，APO-Lf與HOLO-Lf對外周鐵水平均沒有影響，既不螯合鐵造成貧血，也不增加鐵造成鐵負載，APO-Lf與HOLO-Lf降低腦內黑質鐵的作用與鐵螯合不相關，通過調節鐵轉運蛋白的表達而實現降低腦鐵的功能，即降低鐵轉入蛋白DMT1的表達，增加鐵轉出蛋白Fpn1表達。4.權利要求3的用途，其中所述脫鐵乳鐵蛋白Apo-Lf的濃度為10mg/kg；所述全鐵乳鐵蛋白Holo-Lf的濃度為15...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王俊，謝俊霞，劉卉瑩，吳昊，
申請(專利權)人：青島大學，
類型：發明
國別省市：山東;37