一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法技術

本發明專利技術提供了一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，包括以下步驟：制備草莓不同基因型的通用誘導培養基，將草莓莖尖進行初代培養并檢測篩選出無病毒植株作為增殖母株；制備草莓不同基因型的通用增殖培養基；將增殖母株進行增殖培養；然后進行生根培養并進行馴化移栽。本發明專利技術確定了適合草莓不同品種進行莖尖組織培養的通用培養基配方，將誘導培養基和第一增殖培養基統一為一種，無需針對不同品種篩選不同的培養基配方，以及增殖培養基配方降低了細胞分裂素(6-BA)的使用濃度，從而避免產生大量弱小芽叢以及細長、無效的組培苗，而且，采用交替增殖培養的方法，控制繼代次數保持在8次，減少了變異的發生，而且易于進行標準化生產。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物
，具體涉及到一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法。
技術介紹
草莓生產中病毒病危害嚴重，制約草莓生產的發展。脫毒種苗的培育和應用是解決這一問題的有效途徑。由于各地對脫毒苗繁育采用的技術標準不統一，導致組織培養繁育的種苗脫毒率不高、未經病毒檢測、種苗變異率增加、苗木質量混亂，已給草莓生產帶來了危害和巨大的潛在風險。本專利技術主要解決的技術問題是：莖尖組織培養脫毒、組培變異率的控制、優質組培苗快速繁殖。草莓因長期無性繁殖，在生產上受到多種病毒的侵染從而引起草莓植株發病稱之為草莓病毒病。草莓植株中病毒的長期積累存在會使植株出現生長勢減弱、個體矮化、葉片變小、心葉黃化、畸形果多、果實變小、產量下降、品質變劣等品種退化現象，嚴重時可引起毀滅性災害，給草莓生產帶來巨大損失。在草莓生產中造成嚴重危害的病毒主要有草莓皺縮病毒(SCV)、草莓斑駁病毒(SMoV)、草莓鑲脈病毒(SVBV)和草莓輕型黃邊病毒(SMYEV)等。對草莓病毒病的防治目前尚無有效化學藥劑，生產中解決的辦法之一是采用脫毒種苗進行無病毒栽培。目前草莓脫毒的主要方法是莖尖組織培養脫毒。現有技術存在以下幾個缺陷：1、草莓基因型(品種)不同，所用的誘導培養基、增殖培養基、生根培養基激素配比不同，需要針對各個品種篩選不同的培養基配方，費時費力。2、莖尖誘導培養基和增殖培養基選用不同的配方分別進行配制，程序繁瑣，效率低。3、增殖培養基激素種類和濃度配比選用不當。BA濃度偏高，最高達到3.0mg/L，導致產生大量芽叢，增殖系數過高，增殖苗弱小、細長，易于玻璃化，從而大大增加變異率，而且成苗率低；使用NAA(或2，4-D)等生長素，易于產生愈傷組織，從而增加變異率。4、繼代次數過多，甚至不加控制連續多年進行繼代增殖，在組培逆境條件下長時間脅迫培養，導致組培苗變異的發生。
技術實現思路
針對現有技術存在上述的不足，本專利技術提供了一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，適合草莓不同品種進行莖尖組織培養的通用培養基配方，無需針對不同品種篩選不同的培養基配方，以及增殖培養基配方降低了細胞分裂素(6-BA)的使用濃度，從而避免產生大量弱小芽叢以及細長、無效的組培苗，而且，采用交替增殖培養的方法，控制繼代次數保持在8次，減少了變異的發生，而且易于進行標準化生產。本專利技術的技術方案為，一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，包括以下步驟：制備草莓不同基因型的通用誘導培養基和增殖培養基；基于上述誘導培養基將草莓莖尖進行初代培養并檢測篩選出無病毒植株作為增殖母株；將增殖母株進行增殖培養；將經過增殖培養的增殖母株進行生根培養并進行馴化移栽。上述的培養方法，其中，所述制備草莓不同基因型的通用誘導培養基和增殖培養基的步驟中，其中通用增殖培養基包括第一增殖培養基和第二增殖培養基，所述第一增殖培養基由以下成分組成：MS培養基、6-BA0.5mg/L、IBA0.1mg/L，所述第二增殖培養基由以下成分組成：MS培養基、6-BA0.3～0.4mg/L、IBA0.1mg/L。上述的培養方法，其中，所述MS培養基中的NH4NO3添加量為原來的1/2。上述的培養方法，其中，所述基于上述誘導培養基將草莓莖尖進行初代培養并檢測篩選出無病毒植株作為增殖母株的步驟包括：選擇外植體；剝取外植體的莖尖；將外植體的莖尖進行初代培養；通過病毒檢測篩選出經過初代培養的植株作為增殖母株。上述的培養方法，其中，所述選擇外植體的步驟包括：在6～8月份晴天的中午，選擇無病蟲、品種純正的健壯植株，切取帶生長點的匍匐莖段2～3厘米，用流水沖洗干凈；所述剝取外植體的莖尖的步驟包括：將表面清洗過的外植體置于超凈工作臺上，用70％乙醇表面消毒30秒，棄乙醇，加0.1％升汞消毒2分鐘，并不斷搖動，然后用無菌水沖洗5～8次，用無菌濾紙吸干水分，再置于解剖鏡下用解剖刀切取0.2～0.3mm的莖尖。上述的培養方法，其中，所述將外植體的莖尖進行初代培養的步驟包括：將剝取的莖尖接種于莖尖誘導培養基中，誘導培養至莖尖萌發1.5～2.0cm，然后轉至新鮮培養基中培養成苗。上述的培養方法，其中，所述通過病毒檢測篩選出經過初代培養的植株作為增殖母株的步驟包括：將經過培養成苗的植株取下部成熟葉片，提取總RNA或DNA，反轉錄后用特異性引物分別進行PCR擴增SCV、SMoV、SVBV和SMYEV的4種病毒的外殼蛋白基因，電泳檢測有無擴增條帶，篩選無病毒植株并作為增殖母株，淘汰帶病毒植株。上述的培養方法，其中，所述將增殖母株進行增殖培養的步驟包括：步驟一：將增殖母株接種于第一增殖培養基上連續繼代2次；步驟二：將第一增殖培養基上連續繼代2次的試管苗接種于第二增殖培養基上并連續繼代2次；將步驟一、步驟二交替繼代增殖培養2個循環達到總繼代次數為8代。上述的培養方法，其中，所述將經過增殖培養的增殖母株進行生根培養并進行馴化移栽的步驟包括：選2～3厘米的經過增殖培養的小苗轉入生根培養基進行生根培養；將生根的組培瓶苗在自然光下煉苗4～7天，然后移栽到種苗穴盤中，植株長到4～5片葉，株高4～5厘米，有10～12厘米長的根系6～7條，即可移出定植于網室。上述的培養方法，其中，所述生根培養基由以下成分組成：1/2MS、0.1mg/LIBA，其中MS培養基中的NH4NO3添加量為原來的1/2。本專利技術提供的一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，包括以下步驟：制備草莓不同基因型的通用誘導培養基和增殖培養基；基于上述誘導培養基將草莓莖尖進行初代培養并檢測篩選出無病毒植株作為增殖母株；將增殖母株進行增殖培養；將經過增殖培養的增殖母株進行生根培養并進行馴化移栽，通過本專利技術的方法確定了適合草莓不同品種進行莖尖組織培養的通用培養基配方，無需針對不同品種篩選不同的培養基配方，而且將誘導培養基和第一增殖培養基調整為同一配方，降低了技術難度，節省了時間，培養過程更加快速高效；增殖培養基配方降低了細胞分裂素(6-BA)的使用濃度，使增殖系數維持在3.0～5.0，從而避免產生大量弱小芽叢以及細長、無效的組培苗，同時，使用生長素IBA代替NAA、2，4-D等，使再生苗從幼苗莖部直接產生，避免產生愈傷組織進行再分化，控制了組培苗變異的發生。而且，采用交替增殖培養的方法，控制繼代次數保持在8次，減少了變異的發生本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，其特征在于，包括以下步驟：制備草莓不同基因型的通用誘導培養基和增殖培養基；基于上述誘導培養基將草莓莖尖進行初代培養并檢測篩選出無病毒植株作為增殖母株；將增殖母株進行增殖培養；將經過增殖培養的增殖母株進行生根培養并進行馴化移栽。

【技術特征摘要】
1.一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，其特征在于，包括以
下步驟：
制備草莓不同基因型的通用誘導培養基和增殖培養基；
基于上述誘導培養基將草莓莖尖進行初代培養并檢測篩選出無病毒植株
作為增殖母株；
將增殖母株進行增殖培養；
將經過增殖培養的增殖母株進行生根培養并進行馴化移栽。
2.如權利要求1所述的一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，
其特征在于，所述制備草莓不同基因型的通用誘導培養基和增殖培養基的步
驟中，其中通用增殖培養基包括第一增殖培養基和第二增殖培養基，所述第
一增殖培養基由以下成分組成：MS培養基、6-BA0.5mg/L、IBA0.1mg/L，
所述第二增殖培養基由以下成分組成：MS培養基、6-BA0.3～0.4mg/L、IBA
0.1mg/L。
3.如權利要求2所述的一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，
其特征在于，所述MS培養基中的NH4NO3添加量為原來的1/2。
4.如權利要求1所述的一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，
其特征在于，所述基于上述誘導培養基將草莓莖尖進行初代培養并檢測篩選
出無病毒植株作為增殖母株的步驟包括：
選擇外植體；
剝取外植體的莖尖；
將外植體的莖尖進行初代培養；
通過病毒檢測篩選出經過初代培養的植株作為增殖母株。
5.如權利要求4所述的一種降低變異率的草莓莖尖脫毒組織培養方法，
其特征在于，所述選擇外植體的步驟包括：在6～8月份晴天的中午，選擇無
病蟲、品種純正的健壯植株，切取帶生長點的匍匐莖段2～3厘米，用流水沖
洗干凈；所述剝取外植體的莖尖的步驟包括：將表面清洗過的外植體置于超
凈工作臺上，用70％乙醇表面消毒30秒，棄乙醇，加0.1％升汞消毒2分鐘，

\t并不斷搖動，然后用無菌水沖洗5～8次，用無菌濾紙吸干水分，再置于解剖
鏡下用解剖刀...

【專利技術屬性】
技術研發人員：周厚成，趙霞，李亮杰，李剛，秦豹，彭卓，
申請(專利權)人：中國農業科學院東海農業綜合試驗站，中國農業科學院鄭州果樹研究所，
類型：發明
國別省市：江蘇;32