FGF脂質體及其制備方法技術

本發明專利技術提供了一種FGF脂質體的制備方法，其包括以下步驟：將磷脂和膽固醇溶解于叔丁醇中，形成脂質體透明溶液；將凍干保護劑溶于去離子水中，得到凍干保護劑水溶液；均勻混合所述脂質體透明溶液與所述凍干保護劑水溶液，得到脂質體叔丁醇/水共溶液；冷凍干燥所述脂質體叔丁醇/水共溶液，得到凍干脂質體固體；將FGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，得到FGF甘油水溶液；再與所述凍干脂質體固體混合，經過整粒處理，得到包含有FGF脂質體和游離FGF蛋白的懸浮液；再進行分離處理得到FGF脂質體顆粒。本發明專利技術還提供一種FGF脂質體。該FGF脂質體可以保證其中的FGF蛋白具有更好的穩定性和皮膚吸收效果細胞。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種納米脂質體及其制備方法，尤其涉及一種成纖維細胞生長因子（(FibroblastGrowthFactor，縮寫：FGF）脂質體及其制備方法。
技術介紹
FGF是一種多功能強力的細胞因子，其包括酸性成纖維細胞生長因子（aFGF）或堿性成纖維細胞生長因子（bFGF），可促進各種組織損傷的修復，改善傷口的愈合。而且與表皮生長因子（EGF）相比較，EGF可促進I型膠原的合成，導致瘢痕疙瘩形成；而FGF能通過對αI型前膠原基因表達的下行調節作用，抑制成纖維細胞的膠原合成，減少成纖維細胞的膠原蛋白的過量沉積，有助于防止瘢痕疙瘩的產生。此外，aFGF還可以促進成纖維細胞的代謝和膠原蛋白的形成，對皮膚光澤、滋潤、柔軟、減皺、祛粉刺、祛色斑、增白、改善皮膚彈性、損傷皮膚修復等方面有重要效果。因此，隨著人們生活水平的提高，人們也越來越注重儀容，將FGF應用到生活美容和醫學美容領域中是一個重要的研究方向。但是，將FGF應用到美容領域中，需要考慮解決FGF的穩定性、皮膚吸收性以及與其它活性物質的兼容性。脂質體可以將活性成分包裹到脂質體中，而且還可以將活性成分從其中釋放出來，從而可以極大提高這些活性成分的穩定性，同時，由于脂質體膜成分與人體細胞生物膜的成分極其接近，因此脂質體的生物相容性好，安全性高。所以，將FGF與脂質體結合形成FGF脂質體，則可以解決FGF應用到美容領域中存在的主要問題。然而，現有的FGF脂質體的穩定性和皮膚吸收性雖然較單獨使用FGF有所提高，但其穩定性、皮膚吸收性、安全性等性能還不能滿足現有需求，需要進一步提高。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術確有必要提供一種FGF脂質體及其制備方法，以解決上述問題。本專利技術提供一種FGF脂質體的制備方法，其包括以下步驟：制備凍干脂質體固體將磷脂和膽固醇按照2:1～5:1的質量比溶解于叔丁醇中，形成脂質體透明溶液；將凍干保護劑溶于去離子水中，得到凍干保護劑水溶液；均勻混合所述脂質體透明溶液與所述凍干保護劑水溶液，得到脂質體叔丁醇/水共溶液，且該脂質體叔丁醇/水共溶液中的脂質體與凍干保護劑的質量比為1:1～1:4；冷凍干燥所述脂質體叔丁醇/水共溶液，得到凍干脂質體固體；制備懸浮液將FGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，得到濃度為0.1～0.5mg/ml的FGF甘油水溶液；再均勻混合所述FGF甘油水溶液與所述凍干脂質體固體，使所述凍干脂質體固體重新水化；然后進行重新整粒處理，得到包含有FGF脂質體顆粒和游離FGF蛋白的懸浮液；分離制備成品將所述FGF脂質體顆粒從所述懸浮液中分離出來，得到FGF脂質體成品。基于上述，所述凍干保護劑水溶液的質量百分濃度為4%～6%。基于上述，在所述制備懸浮液的步驟中，在將所述FGF甘油水溶液與所述凍干脂質體固體混合之后，再采用100nm微孔濾膜進行整粒處理，得到所述懸浮液。基于上述，所述分離制備成品的步驟包括采用超濾離心法、透析法、凝膠柱層析法或超速離心法對所述懸浮液進行處理，以將所述FGF脂質體顆粒和所述游離FGF蛋白進行分離。基于上述，所述磷脂為天然大豆磷脂、氫化磷脂、合成磷脂雙肉豆蔻磷脂酰膽堿(DMPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂甘油(DMPG)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二硬脂酸磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)或聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)。基于上述，所述凍干保護劑為乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖和海藻糖中的一種或多種。基于上述，所述FGF蛋白為bFGF蛋白或者aFGF蛋白。其中，在上述制備FGF脂質體的過程中，各個步驟中所述形成的溶液，比如，所述脂質體透明溶液、所述凍干保護劑水溶液、所述脂質體叔丁醇/水共溶液、所述FGF甘油水溶液等各種溶液都需要進過滅菌處理，其中滅菌處理的方法可以包括0.22μm微孔濾膜過濾處理法或60鈷15～20kGy射線照射法等。本專利技術提供的上述FGF脂質體顆粒的制備方法采用叔丁醇作為溶劑溶解磷脂和膽固醇，得到所述脂質體透明溶液，再與所述凍干保護劑水溶液混合，然后經凍干后得到結構疏松的凍干脂質體固體，加入水相后可迅速水化制成脂質體；叔丁醇作為溶劑可溶解由磷脂和膽固醇形成的脂質體，毒性小，且可與水溶液以任意比例混勻，凝固點高，可在凍干機中完全凍結，蒸汽壓高，有利于升華，節省凍干時間。而且叔丁醇毒性低，在凍干過程中，大部分叔丁醇可在一次干燥階段升華，在產品中殘留量低，所以，在脂質體制備過程中不需要單獨蒸發叔丁醇，從而使得本專利技術提供的上述FGF脂質體的制備方法比較簡單。另外，在制備所述FGF脂質體的過程中，采用3%甘油水溶液水化所述凍干脂質體固體，甘油是一種水溶性物質，對機體無毒，因此，在制備過程中無需除去甘油。另外，甘油還可以增加所述FGF脂質體顆粒的穩定性，使得所述FGF脂質體顆粒包裹的FGF蛋白具有更好的穩定性和皮膚吸收效果細胞，使所述FGF脂質體顆粒具有更好的皮膚透過性。本專利技術還提供一種由上述方法制備的FGF脂質體，其包括脂質體顆粒和包裹在該脂質體顆粒中的FGF蛋白。基于上述，所述FGF脂質體的粒徑分布范圍為50～250nm，平均粒徑為130～150nm。因此，本專利技術提供的FGF脂質體顆粒粒徑分布范圍為50～250nm，且90%以上的FGF脂質體顆粒的粒徑小于230nm，而且其平均粒徑為130～150nm，保證了該FGF脂質體顆粒包裹的FGF蛋白具有更好的穩定性和皮膚吸收效果細胞，使所述FGF脂質體顆粒具有更好的皮膚透過性，從而使得所述FGF脂質體顆粒可應用于生活美容或醫學美容中。此外，本專利技術最終的產品為流動性良好的粉末，便于使用、運輸和貯存。另外，本專利技術采用單相溶液凍干-重新水化-擠出法制備所述FGF脂質體顆粒，制備方法簡單易操作、可重復性高、且具有較高的包封率與載藥量，包封率可達到83.5%～86.4%；原料成分簡單無毒，安全穩定。具體實施方式下面通過具體實施方式，對本專利技術的技術方案做進一步的詳細描述。實施例1本實施例提供一種aFGF脂質體的制備方法，該方法包括以下步驟：將0.4g的大豆卵磷脂和0.1g的膽固醇溶解于10g的叔丁醇中形成大豆卵磷脂透明溶液，然后經過0.22μm微孔濾膜過濾處理，得到無菌大豆卵磷脂脂質體透明溶液；將0.5g的蔗糖溶于去離子水中，得到濃度為5%的蔗糖溶液，然后經過0.22μm微孔濾膜過濾處理，得到無菌蔗糖溶液；混合所述無菌大豆卵磷脂脂質體透明溶液與所述無菌蔗糖溶液，并采用超聲勻質處理成勻相，然后反復采用0.22μm微孔濾膜過濾，得到大豆卵磷脂脂質體叔丁醇/水共溶液，且該大豆卵磷脂脂質體叔丁醇/水共溶液中的脂質體與蔗糖的質量比為1:3；將所述大豆卵磷脂叔丁醇/水共溶液進行冷凍干燥24h，得到凍干大豆卵磷脂固體；將20mg的aFGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，過濾除菌，得到濃度為0.2mg/ml的aFGF甘油水溶液；再將所述aFGF甘油水溶液與所述凍干大豆卵磷脂固體混合，使所述凍干大豆卵磷脂固體重新水化；然后采用100nm微孔濾膜進行重新整粒處理，得到包含有aFGF脂質體和游離aFGF蛋白的懸浮液；采用超濾離心法處理所述懸浮液，分離本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種FGF脂質體的制備方法，其包括以下步驟：制備凍干脂質體固體?將磷脂和膽固醇按照2:1～5:1的質量比溶解于叔丁醇中，形成脂質體透明溶液；將凍干保護劑溶于去離子水中，得到凍干保護劑水溶液；均勻混合所述脂質體透明溶液與所述凍干保護劑水溶液，得到脂質體叔丁醇/水共溶液，且該脂質體叔丁醇/水共溶液中的脂質體與凍干保護劑的質量比為1:1～1:4；冷凍干燥所述脂質體叔丁醇/水共溶液，得到凍干脂質體固體；制備懸浮液?將FGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，得到濃度為0.1～0.5?mg/ml的FGF甘油水溶液；再均勻混合所述FGF甘油水溶液與所述凍干脂質體固體，使所述凍干脂質體固體重新水化；然后進行重新整粒處理，得到包含有FGF脂質體顆粒和游離FGF蛋白的懸浮液；分離制備成品?將所述FGF脂質體顆粒從所述懸浮液中分離出來，得到FGF脂質體成品。

【技術特征摘要】
1.一種FGF脂質體的制備方法，其包括以下步驟：制備凍干脂質體固體將磷脂和膽固醇按照2:1～5:1的質量比溶解于叔丁醇中，形成脂質體透明溶液；將凍干保護劑溶于去離子水中，得到凍干保護劑水溶液；均勻混合所述脂質體透明溶液與所述凍干保護劑水溶液，得到脂質體叔丁醇/水共溶液，且該脂質體叔丁醇/水共溶液中的脂質體與凍干保護劑的質量比為1:1～1:4；冷凍干燥所述脂質體叔丁醇/水共溶液，得到凍干脂質體固體；制備懸浮液將FGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，得到濃度為0.1～0.5mg/ml的FGF甘油水溶液；再均勻混合所述FGF甘油水溶液與所述凍干脂質體固體，使所述凍干脂質體固體重新水化；然后進行重新整粒處理，得到包含有FGF脂質體顆粒和游離FGF蛋白的懸浮液；分離制備成品將所述FGF脂質體顆粒從所述懸浮液中分離出來，得到FGF脂質體成品。2.根據權利要求1所述的FGF脂質體的制備方法，其特征在于，所述凍干保護劑水溶液的質量百分濃度為4%～6%。3.根據權利要求1或2所述的FGF脂質體的制備方法，其特征在于，在所述制備懸浮液的步驟中，在將所述FGF甘油水溶液與所述凍干脂質體固體混合之后，再采用100nm微孔濾...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王學慶，
申請(專利權)人：河南佰柯生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：河南;41