本發明專利技術公開了一種脂質和多糖的復合物脂多糖作為哺乳動物高原腦水腫標志物的用途。本發明專利技術利用鱟試劑檢測進入高原低氧環境后哺乳動物血漿中脂多糖的含量,當血漿中脂多糖的含量超過0.5EU/ml時,哺乳動物腦組織含水量明顯增加。血漿中脂多糖的含量可作為哺乳動物高原腦水腫發生的生物標志物，為哺乳動物發生高原腦水腫的預警和診斷提供實驗依據。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于高原腦水腫的生物標志物，具體涉及脂多糖在檢測哺乳動物高原腦水腫中的應用。
技術介紹
急性高原病主要包括急性高山病、高原肺水腫和高原腦水腫，其中急性高山病發病率最高，影響范圍最廣，其發病與低氧血癥引起的水鈉潴留和腦血管通透增高導致腦水腫，顱內壓增高等有關，其中腦血管通透性增加，血管收縮舒張失衡是急性高原病的重要機制，此類疾病發展迅猛、極易導致擴大的炎癥反應、死亡率高，嚴重危及急進高原人群的健康。因此，尋找高原腦水腫的生物標志物對于此類疾病的預測和預警具有十分重要的意義。研究發現：炎癥介質是血管通透性增加,血管收縮舒張失衡的重要調節因素。機體的炎癥狀態是急性高原病的重要誘發因素，但目前關于其具體機制仍不清楚。低氧可影響和啟動炎癥免疫反應，模擬急性高原暴露可引起健康志愿者外周血白細胞升高，血清中IL-6顯著升高；低氧性肺動脈高壓小鼠肺血管周圍有大量炎癥細胞浸潤，肺組織中炎癥因子(IL-1β、IL-6、MCP-1等)表達顯著增高；肺血管組織中ICAM-1、VCAM-1和E-selectin等細胞粘附分子表達也顯著增多；缺氧誘導的內皮細胞ICAM1、整合素家族等細胞粘附分子表達上調。由此可見，炎癥是影響高原病發生、發展的關鍵環節。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是大腸桿菌細胞壁上的主要成分，也是其主要的致病成分，與腦水腫的發生密切相關。LPS為革蘭氏陰性細菌細胞壁的組成成分，釋放入血后被稱為內毒素，可與動物體內CD14/TLR4/MD2受體結合，對血腦屏障功能的破壞具有重要作用，短時間內可引發強烈的外周和腦部炎癥反應。同時，革蘭氏陰性細菌感染產生的內毒素造成機體組織細胞損害和功能障礙，對腸黏膜的屏障功能造成破壞，黏膜通透性增加，導致細菌易位。此外，LPS注射可導致腦內IL-1β和TNF-α在mRNA和蛋白水平均明顯升高，出現意識障礙及抑郁樣行為，因此常被用為腦內炎癥因子升高的模型。因此，通過血漿內毒素的定量測定，能較早地預示患者體內存在相應的病原菌感染，連續檢測還能反映病程的發展及預后并評估臨床療效，可作為哺乳動物高原腦水腫的生物標記分子，用于高原腦水腫發生的預測和預警。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種檢測哺乳動物高原腦水腫的生物標志物脂多糖及其應用脂多糖(LPS)的用途，用于檢測哺乳動物高原腦水腫的生物標志物。所述脂多糖在哺乳動物血漿中的含量，當血漿中LPS的含量超過0.5EU/ml時，哺乳動物腦組織含水量增加，判定為高原腦水腫癥狀。所述哺乳動物為鼠，人，狗，貓，羊，牛或鹿。本專利技術的有益效果：本專利技術的實驗結果證明血漿LPS的含量增加與高原腦水腫的發生有明顯的相關性。脂多糖可以作為高原腦水腫的發生檢測的標志物，其靈敏性和準確性均能達到檢測的要求。附圖說明圖1是正常小鼠與高原腦水腫小鼠血漿LPS含量柱形圖；每組n＝20,**p＜0.01。圖2是血漿中LPS含量增加后，高原低氧小鼠腦含水量柱形圖，每組n＝20，**p＜0.01。具體實施方式下面結合附圖，對本專利技術的具體實施方式進行詳細描述，但應當理解本專利技術的保護范圍并不受具體實施方式的限制。取雄性C57BL/6小鼠100只，其中50只小鼠放入低壓低氧艙進行高原低氧處理(模擬海拔高度6,000m)，6小時后取血漿和腦組織進行小鼠血漿內毒素含量及腦組織含水量測定及的測定，小鼠血漿內毒素采用廈門鱟試劑實驗試劑廠生產的鱟試劑進行檢測。1)血漿內毒素含量的檢測參照試劑盒說明書進行操作，步驟為：1.細菌內毒素標準溶液的配置標準曲線所采用的內毒素溶度為0.1，0.25，0.5，1.0EU/ml。稀釋方法如下：取細菌內毒素工作品1支，按細菌內毒素工作品使用說明書稀釋為10EU/ml的內毒素溶液，在稀釋為1EU/ml，以1EU/ml的內毒素溶液為母液稀釋成0.1，0.25，0.5EU/ml的濃度梯度，配制好的標準液在4小時內用完。2.陰性對照為細菌內毒素檢查用水鱟試劑：按照示量加細菌內毒素檢查用水于鱟試劑中，輕輕震蕩使其完全溶解，10min內用完。顯色基質：按照標示量加細菌內毒素檢查用水于顯色基質中，輕輕振搖使其完全溶解，在4℃條件下貯存8h內用完。偶氮化試劑1：按標示量加反應終止劑鹽酸于偶氮化試劑1中，偶氮化試劑2：按標示量加細菌內毒素檢查用水于偶氮化試劑2中，偶氮化試劑3：按標示量加細菌內毒素檢查用水于偶氮化試劑3中，偶氮化試劑溶液可于4℃環境中貯存1周。2.具體操作過程a)取無熱原試管，加入100ul細菌內毒素檢查用水，內毒素標準溶液以及待測樣品，待測樣品為正常小鼠血漿及高原腦水腫小鼠血漿，再加入100ul鱟試劑溶液，混勻，37℃溫育60分鐘b)溫育結束,加入100ul顯色基質溶液，混勻，37℃溫育6分鐘c)溫育結束，加入500ul偶氮化試劑1溶液，混勻d)加入500ul偶氮化試劑2溶液，混勻e)加入500ul偶氮化試劑3溶液，混勻，靜置5min，于545nm波長處讀取吸光度值。f)數據處理：建立標準曲線：Y＝bX+a，r≥0.980，根據曲線計算內毒素含量。結果如圖1所示，高原低氧小鼠血漿LPS含量顯著高于正常小鼠，血漿中LPS含量可作為小鼠高原腦水腫發生的標志物，該檢測方法簡單適用。2)小鼠腦組織含水量的測定每組取20只鼠于高原低氧后處死,即刻取腦組織用電子天平稱重(濕重,精確到0.1mg),然后置于100℃恒溫箱烘烤24h后稱重(干重)。按Blliot公式計算,腦組織含水量＝(濕重-干重)/濕重×100％。根據多次試驗確定，當血漿中LPS的含量超過0.5EU/ml時，哺乳動物腦組織含水量增加(如圖1所示)，判定為高原腦水腫癥狀。以上公開的僅為本專利技術的具體實施例，但是，本專利技術并非局限于此，任何本領域的技術人員能思之的變化都應落入本專利技術的保護范圍。本文檔來自技高網...
【技術保護點】
脂多糖的用途，其特征在于，用于哺乳動物高原腦水腫的生物標志物。
【技術特征摘要】
1.脂多糖的用途，其特征在于，用于哺乳動物高原腦水腫的生物標志物。2.根據權利要求1所述的脂多糖的用途，其特征在于，檢測哺乳動物血漿中脂多糖的含量，當血漿中脂多糖的含...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃欣，周延召，趙名，趙彤，吳麗穎，范明，朱玲玲，
申請(專利權)人：中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所，
類型：發明
國別省市：北京;11
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