前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法技術

本發明專利技術公開了一種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法，前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒包括：前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒和抑制素單克隆抗體標記的化學發光標記物。這種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒能夠以全自動化學發光免疫分析儀為檢測工具，完成前列腺特異性抗原同源異構體的檢測這種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，經過實驗，其檢測靈敏度達到1pg/mL，相對于傳統的前列腺特異性抗原同源異構體的檢測方法靈敏度至少提高了10倍，這種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒的檢測精度較高。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及體外檢測領域，尤其涉及一種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。
技術介紹
前列腺癌已經成為西方世界發病率最高的腫瘤之一，據估計，每年全球新患病的前列腺癌患者有約914,000人，因為前列腺癌而死亡的患者約為258,000人，近些年中國的前列腺癌發病例在逐年攀升。早期發現前列腺癌對前列腺癌的治療十分重要，目前，前列腺癌診斷的金標準仍舊是前列腺穿刺活檢。上世紀80年代末，人類發現了前列腺特異性抗原(Prostate-specific Antigen，PSA)是前列腺癌預測的重要標志物。然而，在多年的運用中，PSA的局限性也日益凸顯，特異度較低的缺陷導致了臨床上過度穿刺、過度治療的發生，為病人造成了心理負擔，為社會造成經濟負擔。因此，人們致力于尋找新的特異性腫瘤標志物用于預測前列腺癌。近年來，隨著分子生物學的飛速發展，人們發現了多種前列腺癌的腫瘤特異性標志物，部分已應用于臨床，同時隨著人類基因組學的發展，人們相繼發現了前列腺癌風險基因，并期待將基因檢測作為初步篩查前列腺癌高危人群的工具。最近，一種被稱為前列腺特異性抗原同源異構體(p2PSA)的PSA前體被發現，研究證實p2PSA及其衍生指標與前列腺癌在歐洲人群中有著顯著的關聯，對于臨床上預測前列腺癌具有重要意義。目前臨床檢測p2PSA的常見方法有酶聯免疫吸附法、放射免疫分析法、酶促化學發光法，但這些方法都存在著一些不足之處。一、酶聯免疫吸附法酶聯免疫吸附法(ELISA)被廣泛應用，但該方法也存在著下述的不足之處：(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；(2)定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；(3)缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；(4)檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果的準確性；(5)檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發生操作差錯，檢測結果的準確度和精密度較差；(6)在檢測項目成套試劑的數量配置及使用上均為項目數×48/96人份，如果需要檢測10個項目，則試劑的配置及使用數須為10×48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10個不同的項目，也需要配置10×48/96人份的試劑，存在著不夠經濟合理的缺點。二、放射免疫分析法放射免疫分析方法放射性污染大、加樣步驟繁瑣、操作復雜、操作時間長、測定結果不穩定、試劑保存時間短、試劑盒操作自動化程度低、配套儀器價格昂貴等不足之處。二、化學發光法化學發光法按發光原理可分為直接化學發光和酶促化學發光。酶促化學發光主要有辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶兩種，但都有一定的局限性，辣根過氧化物酶主要缺點為：魯米諾在沒有辣根過氧化物酶存在情況下，也會被H2O2氧化自身發光，本底相對較高，影響信噪比，反應動力學復雜，影響因素多，結果不夠穩定，要得到靈敏度高且平臺期長的底物不容易。堿性磷酸酶主要缺點為：底物達到平臺期的時間長，底物成本高，導致檢測成本高，患者負擔重。吖啶酯作為標記物的直接化學發光相比酶促化學發光具有明細優勢，主要表現在：反應不需要催化劑，只要堿性環境即可進行，反應迅速，背景發光低，信噪比高，干擾因素少，試劑穩定性好，可以兩點定標，體系簡單，激發液成本低，吖啶酯易與蛋白質聯結，且聯結后光子產率不減少。
技術實現思路
基于此，有必要提供一種檢測靈敏度較高的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。一種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，包括：前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒和抑制素單克隆抗體標記的化學發光標記物。所述前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒中，所述前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體與所述羧基化的磁微粒的比例為1：25～35。所述抑制素單克隆抗體標記的化學發光標記物中，所述前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體與所述化學發光標記物的比例為50：1～10。所述羧基化的磁微粒的粒徑為0.05μm～1μm。所述化學發光標記物為魯米諾、異魯米諾、三聯吡啶釕或吖啶酯。所述的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，還包括化學發光底物液，所述化學發光底物液包括A液和B液。所述A液為H2O2溶液，所述B液為NaOH溶液。所述的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，還包括前
列腺特異性抗原同源異構體定標品。所述前列腺特異性抗原同源異構體定標品為濃度分別為0pg/mL、50pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL和1600pg/mL的前列腺特異性抗原同源異構體的溶液。一種上述的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟：取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液重懸，接著加入EDC水溶液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體，室溫下混懸2h～10h，磁分離去除上清后用Tris緩沖液重懸，得到前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒；以及取前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體，加入碳酸鹽緩沖液后混勻，然后加入化學發光標記物后混勻，室溫下避光反應1h～2h后除雜，得到抑制素單克隆抗體標記的化學發光標記物。這種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒能夠以全自動化學發光免疫分析儀為檢測工具，完成前列腺特異性抗原同源異構體的檢測這種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，經過實驗，其檢測靈敏度達到1pg/mL，相對于傳統的前列腺特異性抗原同源異構體的檢測方法靈敏度至少提高了10倍，這種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒的檢測精度較高。附圖說明圖1為一實施方式的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒的制備方法的流程圖；圖2為實施例3得到的前列腺特異性抗原同源異構體標準曲線圖。具體實施方式為使本專利技術的上述目的、特征和優點能夠更加明顯易懂，下面結合附圖和
具體實施例對本專利技術的具體實施方式做詳細的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細節以便于充分理解本專利技術。但是本專利技術能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領域技術人員可以在不違背本專利技術內涵的情況下做類似改進，因此本專利技術不受下面公開的具體實施的限制。一實施方式的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，包括：前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒和抑制素單克隆抗體標記的化學發光標記物。優選的，前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒中，前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體與羧基化的磁微粒的比例為1：25～35。優選的，抑制素單本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括：前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒和抑制素單克隆抗體標記的化學發光標記物。

【技術特征摘要】
1.一種前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括：前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒和抑制素單克隆抗體標記的化學發光標記物。2.根據權利要求1所述的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒中，所述前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體與所述羧基化的磁微粒的比例為1：25～35。3.根據權利要求1所述的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述抑制素單克隆抗體標記的化學發光標記物中，所述前列腺特異性抗原同源異構體單克隆抗體與所述化學發光標記物的比例為50：1～10。4.根據權利要求1所述的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述羧基化的磁微粒的粒徑為0.05μm～1μm。5.根據權利要求1所述的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述化學發光標記物為魯米諾、異魯米諾、三聯吡啶釕或吖啶酯。6.根據權利要求1所述的前列腺特異性抗原同源異構體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，還包括化學發光底物液，所述化學發光底物液包括A液和B液。7.根據權利要求6所述的前列腺特異性抗原同源...

【專利技術屬性】
技術研發人員：段桂開，錢純亙，夏福臻，王剛，祝亮，
申請(專利權)人：深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44