本發(fā)明專利技術(shù)公開了診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的標(biāo)志物群，包括谷胱甘肽、β?羥基丁酸、脯氨酸、富馬酸、苯丙氨酸、乳酸中的一個(gè)或多個(gè)。單個(gè)用于診斷區(qū)分穩(wěn)定型心絞痛患者和冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者時(shí)，ROC曲線下面積(AUC)均大于0.7，具有臨床診斷意義；聯(lián)合用于診斷時(shí)，隨著聯(lián)合個(gè)數(shù)的增加，AUC進(jìn)一步提高，6個(gè)全部聯(lián)合時(shí)最高，AUC達(dá)0.988，在最佳cutoff值下，靈敏度和特異性分別為98.5％和98.3％。本發(fā)明專利技術(shù)提供的代謝標(biāo)志物群能準(zhǔn)確地診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛，靈敏度高、特異性強(qiáng)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的標(biāo)志物群
本專利技術(shù)屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，涉及冠心病診斷分型的代謝標(biāo)志物，具體涉及一組用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群。
技術(shù)介紹
冠心病亦稱為缺血性心臟病，涉及供應(yīng)心肌血液的動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化，即冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變引起血管腔狹窄或斑塊形成甚至破裂、完全堵塞，造成心肌缺血、缺氧或壞死而導(dǎo)致心臟缺血性疾病，從而引起臨床上心絞痛、心肌梗死等一系列嚴(yán)重的心血管事件。冠心病是人類健康的主要?dú)⑹?，具發(fā)病率高、致殘率高、復(fù)發(fā)率高、病死率高、并發(fā)癥多等特點(diǎn)，已經(jīng)成為威脅我國(guó)人民健康的主要疾病。目前，基于病理生理機(jī)制，將冠心病分為慢性穩(wěn)定性冠心病(即穩(wěn)定型心絞痛)和急性冠脈綜合征；急性冠脈綜合征又進(jìn)一步分為不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死。冠心病從無(wú)至有、從輕至重通常包括如下發(fā)展階段：冠狀動(dòng)脈正?！跔顒?dòng)脈粥樣硬化→穩(wěn)定型心絞痛→不穩(wěn)定型心絞痛→急性心肌梗死。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病的主要病因，是冠心病的早期病癥。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是一種常見的進(jìn)行性動(dòng)脈疾病，病變主要累及中等大小的肌層動(dòng)脈，動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積，平滑肌細(xì)胞增生，形成局限性斑塊，可使動(dòng)脈壁變硬，嚴(yán)重時(shí)斑塊破裂導(dǎo)致血栓、栓塞、出血，受累管腔部分或完全閉塞，臨床表現(xiàn)為動(dòng)脈粥樣硬化血管并發(fā)癥的發(fā)生。動(dòng)脈粥樣硬化早期病變可發(fā)生在10歲之前，病變引起動(dòng)脈狹窄需經(jīng)歷20至30年時(shí)間，早期無(wú)臨床癥狀，不易被發(fā)現(xiàn)和重視，因此對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的早期預(yù)防和診斷可以有效地防止冠心病的發(fā)生。冠狀動(dòng)脈造影可以對(duì)冠狀動(dòng)脈的狹窄程度作出準(zhǔn)確的判斷，是診斷冠心病的金標(biāo)準(zhǔn)[冠狀動(dòng)脈造影金標(biāo)準(zhǔn)與臨床常規(guī)診斷冠心病差異性比較研究，舒榮文等，海軍醫(yī)學(xué)雜志2015年04期]。作為冠心病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，冠脈造影只能發(fā)現(xiàn)血管狹窄程度，而且它還是一種介入測(cè)量手段，需要介入手術(shù)，且診斷昂貴。另一方面，醫(yī)生還需要依據(jù)對(duì)患者的心電圖、心動(dòng)圖、平板運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)、CT等檢查結(jié)果作出最終診斷，由于醫(yī)生主觀性判斷、病人敘述不清等情況的出現(xiàn)，對(duì)冠心病的診斷仍存在較大的誤診和漏診，這對(duì)病人的預(yù)后影響非常大。為了改善患者的生活質(zhì)量，降低患者受到的生命威脅，我們亟需發(fā)展一種具有診斷率高、經(jīng)濟(jì)、無(wú)侵入性、操作簡(jiǎn)便等特性的診斷方法。代謝組學(xué)是研究生物體內(nèi)源性代謝物質(zhì)的整體及其隨內(nèi)因和外因變化的科學(xué)，是系統(tǒng)生物學(xué)的一個(gè)重要組成部分。它可以對(duì)體液如血液和尿液進(jìn)行快速及無(wú)侵入性的分析，通過代謝譜的差異獲得可以指示各種生化反應(yīng)的代謝標(biāo)志物。目前常用的分析技術(shù)包括核磁共振(NMR)、質(zhì)譜(LC-MS/GC-MS)等。LC-MS/GC-MS具有對(duì)樣本制備要求低、靈敏度高、動(dòng)態(tài)范圍寬等特點(diǎn)，可用于檢測(cè)樣本中濃度相差大的代謝物，因而成為代謝組學(xué)的研究中應(yīng)用越來(lái)越多的技術(shù)平臺(tái)。血漿分析是臨床上常用的一種疾病診斷方法，因其簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)且相對(duì)無(wú)創(chuàng)的優(yōu)點(diǎn)而被廣泛采用。目前尚未有人使用血漿代謝物水平對(duì)冠心病進(jìn)行診斷分型。應(yīng)用血漿代謝組學(xué)尋找冠狀動(dòng)脈正常人與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者及不同分型冠心病患者血漿代謝物的水平差異對(duì)于臨床早期快速確診冠心病并進(jìn)行分型具有重要意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)第一目的在于提供一組用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群，該組代謝標(biāo)志物同時(shí)存在于血漿中，可同時(shí)分析測(cè)定；本專利技術(shù)的第二目的在于提供一種能夠靈敏地分析檢測(cè)所述代謝標(biāo)志物群的方法；本專利技術(shù)的第三目的在于提供一種基于所述代謝標(biāo)志物群的檢測(cè)試劑盒，用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛，提高診斷便利性，促進(jìn)診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化。上述目的是通過如下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一組用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群，包括一個(gè)或多個(gè)如下所述的代謝標(biāo)志物：谷胱甘肽、β-羥基丁酸、脯氨酸、富馬酸、苯丙氨酸、乳酸。進(jìn)一步地，所述的用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群包括任意兩個(gè)所述的代謝標(biāo)志物。進(jìn)一步地，所述的用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群包括任意三個(gè)所述的代謝標(biāo)志物。進(jìn)一步地，所述的用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群包括任意四個(gè)所述的代謝標(biāo)志物。進(jìn)一步地，所述的用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群包括任意五個(gè)所述的代謝標(biāo)志物。進(jìn)一步地，所述的用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群包括全部六個(gè)所述的代謝標(biāo)志物。進(jìn)一步地，所述代謝標(biāo)志物為血漿代謝標(biāo)志物。一種定性或定量分析所述的用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群的方法為：采用液質(zhì)聯(lián)用和/或氣質(zhì)聯(lián)用對(duì)所述的代謝標(biāo)志物進(jìn)行定性或定量分析。液質(zhì)和氣質(zhì)檢測(cè)限低、靈敏度高，能靈敏地分析檢測(cè)生物樣本中的代謝標(biāo)志物并對(duì)其定量。一種用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的檢測(cè)試劑盒，包括所述的代謝標(biāo)志物群的標(biāo)準(zhǔn)品，所述標(biāo)準(zhǔn)品為各代謝標(biāo)志物的化學(xué)單體或混合物。使用標(biāo)準(zhǔn)品可以對(duì)生物樣本中的代謝標(biāo)志物進(jìn)行快速準(zhǔn)確地定性、定量分析。試劑盒有助于實(shí)現(xiàn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化，提高檢測(cè)便利性和重現(xiàn)性。進(jìn)一步地，所述檢測(cè)試劑盒還包括溶解所述標(biāo)準(zhǔn)品的溶劑和/或提取富集所述代謝標(biāo)志物的溶劑。本專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：(1)本專利技術(shù)提供的代謝標(biāo)志物群能準(zhǔn)確地診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛。ROC曲線評(píng)價(jià)方法中，ROC曲線下面積AUC在大于0.5的情況下，越接近于1，說(shuō)明診斷效果越好。AUC在0.5～0.7時(shí)有較低準(zhǔn)確性，AUC在0.7～0.9時(shí)有一定準(zhǔn)確性，AUC在0.9以上時(shí)有較高準(zhǔn)確性。經(jīng)驗(yàn)證，本專利技術(shù)提供的代謝標(biāo)志物群中的單個(gè)用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛時(shí)，AUC均在0.7以上；多個(gè)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，AUC比單個(gè)更接近于1，診斷效果更好；六個(gè)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，AUC最接近于1，診斷區(qū)分效果最好。(2)本專利技術(shù)提供的分析檢測(cè)所述代謝標(biāo)志物的方法靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。(3)本專利技術(shù)提供的檢測(cè)試劑盒可以用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛，提高診斷便利性，促進(jìn)診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本專利技術(shù)實(shí)質(zhì)性內(nèi)容。使用的儀器或試劑未做詳細(xì)說(shuō)明的均為常規(guī)儀器和試劑；未具體描述的試驗(yàn)操作方法均為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的常規(guī)操作方法。實(shí)施例1：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者和穩(wěn)定型心絞痛患者之間血漿差異代謝物的篩選表征一、對(duì)象和方法1、標(biāo)本來(lái)源在取得患者同意后，收集江蘇省人民醫(yī)院2010年9月～2015年6月480例冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者、280例穩(wěn)定型心絞痛患者和350例健康人的外周靜脈血血漿，所有患者或健康人均經(jīng)冠脈造影證實(shí)。健康人的年齡、性別與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者、穩(wěn)定型心絞痛患者相匹配。所有冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者、穩(wěn)定型心絞痛患者和健康人均有正常心肺肝腎及造血功能。采血時(shí)間均為清晨空腹?fàn)顟B(tài)。2、主要試劑乙腈及甲酸(UPLC純)購(gòu)于美國(guó)ROE公司；色譜級(jí)別甲醇和氯仿購(gòu)于江蘇漢邦科技有限公司；氯化甲氧胺及N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺(含1％三甲基氯硅烷)購(gòu)于美國(guó)Sigma-Aldrich公司；去離子水由美國(guó)密理博(Millipore)公司的MIlli-Q超純水系統(tǒng)制備；標(biāo)準(zhǔn)品包括谷胱甘肽、β-羥基丁酸、脯氨酸、富馬酸、苯丙氨酸、乳酸，購(gòu)于美國(guó)Sig本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一組用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的代謝標(biāo)志物群，其特征在于，包括一個(gè)或多個(gè)如下所述的代謝標(biāo)志物：谷胱甘肽、β?羥基丁酸、脯氨酸、富馬酸、苯丙氨酸、乳酸。
【技術(shù)特征摘要】
1.一組血漿代謝標(biāo)志物組合物在制備診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和穩(wěn)定型心絞痛的診斷試劑中的應(yīng)用，其特征在于：該代謝標(biāo)志物組合物包...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：齊煉文，李萍，朱偉，陳彥，范勇，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)藥科大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：江蘇;32
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