膠體金免疫檢測盤制造技術

本實用新型專利技術提供的膠體金免疫檢測盤包括樣本室、液流通道、金室、引流墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、閥門以及上蓋組成，檢測盤采用的高分子材料具有抗蛋白吸附特性，檢測盤的樣本室由三部分構成，上層為樣本處理層，內壁有促凝劑，中間為可活動部分，頂部設有加樣口，可活動部分可按壓下沉至下層，下層通過液流通道與金室聯通，金室內壁有標記了抗體或抗原的膠體金干粉，金室通過液流通道和閥門與引流墊聯通，引流墊壓住硝酸纖維素膜T線端，吸水紙壓住硝酸纖維素膜C線端，硝酸纖維素膜上包被與標記抗體或抗原相匹配的抗體或抗原，一個檢測盤可以有多個項目檢測通道，各通道呈點對稱排布，通道數量根據實際需求選擇。

【技術實現步驟摘要】

本專利涉及一種新型膠體金免疫檢測盤，該技術是將膠體金免疫層析技術和微處理技術結合起來，利用各自的優點實現快速檢測。
技術介紹
近年來，醫生對更快速、更廉價、能提供更可靠結果的技術的需求，推動了POCT市場的不斷發展。POCT，即時檢驗(point-of-caretesting)，是在采樣現場即刻進行分析，省去標本在實驗室檢驗時的復雜處理程序，快速得到檢驗結果的一類新方法。免疫層析技術是以抗原與抗體的特異性、可逆性結合反應為基礎的分析技術，其最大特點是具有高度選擇性。待測物、抗體和標記物是免疫分析中的三個基本要素。它往往以條狀纖維層析材料為固相，通過毛細作用使樣品溶液在層析條上涌動，并同時使樣品中的待測物與層析材料上針對待測物的抗體發生高特異性和高親和性的免疫反應，層析過程中免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區域（檢測帶），通過可目測的標記物（膠體金）而達到直觀的實驗現象，而游離的標記物則越過檢測帶，達到與結合標記物自動分離之目的。膠體金免疫層析技術靈敏度高，特異性強，同時兼具直觀檢測和定量檢測的特性，是實現POCT的優良手段之一。傳統的膠體金免疫檢測試劑一般由樣品墊、金墊、NC膜、吸水紙構成，所需要的樣本量一般在80μL以上，樣本量相對較高，對于血液樣本的檢測而言，并不能直接取指血檢測，往往需要有采血過程，這就嚴重限制了膠體金免疫層析技術在POCT上的應用。傳統膠體金免疫檢測試劑每次檢測只能檢測1至3項，并不能完成一個系列的檢測，使得檢測成本增加。目前市場上并沒有將樣本處理以及系列檢測整合在一起的產品，膠體金免疫檢測盤將解決這個問題，在保證膠體金免疫檢測特異性和靈敏度的情況下，集合樣本處理和多項同時檢測，節省檢測時間，簡化檢測步驟，節約檢測成本。
技術實現思路
本技術的目的是設計開發出一種膠體金免疫檢測盤，不需要對樣本進行前期處理，取指血即可同時檢測多個項目，簡化檢測過程，使得檢測更簡單、省時、高效。本技術提供的膠體金免疫檢測盤包括樣本室、液流通道、金室、引流墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、閥門以及上蓋組成，檢測盤采用的高分子材料具有抗蛋白吸附特性，檢測盤的樣本室由三部分構成，上層為樣本處理層，內壁有促凝劑，中間可活動部分為樣本運輸結構，將處理好的樣本運至下層，中心有支撐結構，中間可活動部分比上層凸出一層的高度，頂部設有加樣口，可活動部分可按壓下沉至下層，下層通過液流通道與金室連通，金室內壁有標記了抗體或抗原的膠體金干粉，金室通過液流通道和閥門與引流墊連通，引流墊壓住硝酸纖維素膜T線端，吸水紙壓住硝酸纖維素膜C線端，硝酸纖維素膜上包被與標記抗體或抗原相匹配的抗體或抗原，引流墊、硝酸纖維素膜、吸水紙通過膠帶使其背面相連，檢測盤及上蓋設有固定點，檢測盤上蓋邊緣在每個吸水紙上方貼有檢測項目名稱，一個檢測盤可以有多個項目檢測通道，各通道呈點對稱排布，通道數量根據實際需求選擇。本技術提供的膠體金免疫檢測盤，由于樣本室、液流通道和金室體積小、比表面積大，所以每項檢測所需要的樣本量小，僅需要一滴液體樣本即可。本技術的有益效果：1.檢測樣本量小。每一項檢測僅需要一滴液體樣本，血液樣本的檢測取指血即可完成檢測，減輕被檢人痛苦；2.檢測效率高。一次點樣可同時檢測多個項目，節省檢驗時間；3.檢驗操作簡單。血液樣本的前處理過程在檢測盤上進行，無需進行靜脈取血操作，簡化操作步驟；4.檢驗時間短。無需進行血清血漿制備，全血樣本可以直接用，縮短檢驗時間；5.靈敏度高、特異型好。本技術應用免疫層析技術，同時檢測盤的比表面積大，保證了檢測的高靈敏度、高特異性。附圖說明圖1為本技術檢測盤單項檢測結構俯視圖圖2為本技術檢測盤剖面圖圖3為本技術檢測盤示意圖圖4(1)為本技術檢測陽性結果示意圖圖4(2)為本技術檢測陰性結果示意圖圖4(3)、圖4(4)為本技術檢測無效示意圖。具體實施方式下面通過具體實施例對膠體金免疫檢測盤進行詳細說明。1.膠體金免疫檢測盤結構介紹檢測盤采用聚氨酯材料，具有抗蛋白吸附的特性。圖1所示樣本室1由三部分構成，圖2所示樣本室上層9為樣本處理層，內壁有促凝劑，圖2所示中間可活動部分10為樣本運輸結構，將處理好的樣本運至下層，中心有支撐結構，中間可活動部分比上層凸出一層的高度，頂部設有圖1所示加樣口8，可活動部分可按壓下沉至圖2所示樣本室下層11，下層通過圖1所示液流通道2與圖1所示金室3連通。圖1所示液流通道2寬度為2.5mm，圖1所示金室3直徑為3mm，圖2所示樣本室下層11以及檢測盤的其余部分厚度均為1mm。圖1所示閥門4的作用原理是通過縮小液流通道的寬度增加液流本身的表面張力，使液流在沒有外力的作用下不能通過閥門，當施加的外力即離心力達到一定值之后液流方可通過閥門，經試驗測得在轉速達到800rpm液流即可通過閥門，閥門處液流通道寬1.5mm。圖1所示引流墊5、硝酸纖維素膜6、吸水紙7背部通過膠代鏈接為一體，在引流墊和吸水紙部分的檢測盤上蓋上有固定凸點將三者固定。2.標記膠體金的制備將0.02%氯金酸溶液攪拌煮沸，加入2%檸檬酸三鈉1%體積，使檸檬酸三鈉終濃度為0.02%，持續加熱攪拌，溶液由藍色逐漸變為酒紅色即可，停止加熱，攪拌冷卻至室溫。取上述膠體金溶液，用0.02mol/LNaOH調pH值至7.4±0.1，加入10μg乙型肝炎病毒單克隆抗體a，混勻，搖床搖30min；每毫升膠體金溶液中加入20μL的10%BSA，混勻，搖床搖15min；8000g離心10min，棄上清；加入1/100膠體金溶液體積的復溶液制成100倍濃縮液；測540nm處的OD值，用復溶液稀釋至5OD備用。復溶液配置：0.1%BSA、0.5%Tween-20、0.5%蔗糖、0.05mol/L硼酸鹽緩沖液（pH8.0）。3.硝酸纖維素膜包被用1*PBS（pH7.4）將羊抗鼠多克隆抗體稀釋到1.5mg/mL,將乙型肝炎病毒單克隆抗體b稀釋到1.2mg/mL，用劃膜機將稀釋好的羊抗鼠抗體和乙型肝炎病毒單克隆抗體b包被于1cm寬硝酸纖維素膜上，分別作為C線（質控線）和T線（檢測線），包被參數為0.12μL/mm。將硝酸纖維素膜置于37℃干燥3小時備用。4.促凝劑制備將高純度兔腦粉用1×PB稀釋至10mg/mL，備用。5.膠體金免疫檢測盤組裝取500μL促凝劑放入圖2所示樣本室上層9中，取10μL標記膠體金放入圖本文檔來自技高網...

【技術保護點】
膠體金免疫檢測盤包括樣本室、液流通道、金室、引流墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、閥門以及上蓋，檢測盤采用的高分子材料具有抗蛋白吸附特性，檢測盤的樣本室由三部分構成，上層為樣本處理層，內壁有促凝劑，中間可活動部分為樣本運輸結構，將處理好的樣本運至下層，中心有支撐結構，中間可活動部分比上層凸出一層的高度，頂部設有加樣口，可活動部分可按壓下沉至下層，下層通過液流通道與金室聯通，金室內壁有標記了抗體或抗原的膠體金干粉，金室通過液流通道和閥門與引流墊聯通，引流墊壓住硝酸纖維素膜T線端，吸水紙壓住硝酸纖維素膜C線端，硝酸纖維素膜上包被與標記抗體或抗原相匹配的抗體或抗原，引流墊、硝酸纖維素膜、吸水紙通過膠帶使其背面相連，檢測盤及上蓋設有固定點，檢測盤上蓋邊緣在每個吸水紙上方貼有檢測項目名稱，一個檢測盤可以有多個項目檢測通道，各通道呈點對稱排布。

【技術特征摘要】
1.膠體金免疫檢測盤包括樣本室、液流通道、金室、引流墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、閥
門以及上蓋，檢測盤采用的高分子材料具有抗蛋白吸附特性，檢測盤的樣本室由三部分構
成，上層為樣本處理層，內壁有促凝劑，中間可活動部分為樣本運輸結構，將處理好的樣本
運至下層，中心有支撐結構，中間可活動部分比上層凸出一層的高度，頂部設有加樣口，可
活動部分可按壓下沉至下層，下層通過液流通道與金室聯通，金室內壁有標記了抗體或抗
原的膠體金干粉，金室通過液流通...

【專利技術屬性】
技術研發人員：司英杰，劉琳，李梅，殷娟娟，向榮，王昊，張賢剛，張賢強，朱正宇，李亞峰，
申請(專利權)人：德康潤生物科技天津有限公司，
類型：新型
國別省市：天津;12