治療慢性乙型肝炎病毒感染的STING激動劑的用途制造技術(shù)

本文提供治療患有乙型肝炎病毒(HBV)感染的受試者的方法。更具體地說，本文公開了在巨噬細胞、樹突細胞和/或肝臟非實質(zhì)細胞中用小分子STING激動劑刺激先天細胞因子應(yīng)答以便抑制HBV在肝細胞中的復(fù)制的方法。所述方法特別適用于治療慢性HBV感染。本文還公開了鑒別適用于治療HBV感染的化合物的方法。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】相關(guān)申請的交叉引用本申請要求2013年10月21日提交的美國臨時申請?zhí)?1/893,526的優(yōu)先權(quán)，所述申請的公開內(nèi)容據(jù)此以引用的方式整體并入。政府權(quán)利該項工作得到了國立衛(wèi)生研究院授予TimothyM.Block博士的資助AI104636的支持。政府對本文公開的主題享有某些權(quán)利。
本公開提供治療患有乙型肝炎病毒(HBV)感染的受試者的方法。更具體地說，本文公開了在巨噬細胞、樹突細胞和/或肝臟非實質(zhì)細胞中用小分子STING激動劑刺激先天細胞因子應(yīng)答以便抑制HBV在肝細胞中的復(fù)制的方法。所公開的方法特別適用于治療慢性HBV感染。本文還公開了鑒別適用于治療HBV感染的化合物的方法。背景病毒感染是由宿主模式識別受體(PRR)快速識別，如Toll樣受體(TLR)、RIG-I樣受體(RLR)等等，它們激活細胞應(yīng)答，從而產(chǎn)生I型干擾素(IFN)、促炎性細胞因子及趨化因子。此早期細胞因子應(yīng)答不僅限制病毒復(fù)制和蔓延，而且協(xié)調(diào)更特異性和更強的適應(yīng)性免疫應(yīng)答的發(fā)生，從而最終消除病毒。PRR介導(dǎo)的先天細胞因子應(yīng)答在防御病毒感染中的重要作用是由以下事實充分說明：缺乏編碼PRR或其信號傳導(dǎo)元件的基因的人和小鼠易受病毒感染。為了建立感染，致病性病毒已經(jīng)進化出了多個機制以躲避和/或?qū)筆RR介導(dǎo)的先天性免疫應(yīng)答。實際上，PRR介導(dǎo)的細胞因子應(yīng)答的失敗或不適當(dāng)?shù)募せ罱?jīng)常在包括慢性乙型肝炎的許多慢性病毒感染中觀察到，用病毒DNA聚合酶抑制劑來治療該種疾病的當(dāng)前抗病毒療法未能提供治愈。乙型肝炎病毒(HBV)是一種非致細胞病變嗜肝DNA病毒，其慢性感染全世界超過3億5千萬人口。慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是歸因于宿主不能發(fā)動充分的免疫應(yīng)答來清除病毒。HBV感染的結(jié)果和發(fā)病機理主要通過宿主抗病毒免疫應(yīng)答的種類和量級來確定，這通常與感染時的年齡有關(guān)。雖然超過95％的成人獲得性感染在6個月內(nèi)通過有力的和多克隆的HBV特異性T細胞應(yīng)答自發(fā)地清除，但超過90％暴露的新生兒和大約30％年齡在1-5歲的兒童發(fā)展成慢性感染，這與較弱的和經(jīng)常幾乎檢測不到的病毒特異性T細胞應(yīng)答有關(guān)。用長期的核苷類似物療法或經(jīng)由有限持續(xù)時間的聚乙二醇化α干擾素(IFN-α)療法實現(xiàn)的病毒復(fù)制的持續(xù)抑制與肝臟疾病的改善、肝臟失代償?shù)淖柚购透渭毎┑陌l(fā)病率和死亡率減輕有關(guān)。然而，HBV表面抗原(HBsAg)血清轉(zhuǎn)化(具有完全和持久感染控制的對HBV的成功免疫應(yīng)答或“功能性治愈”的標(biāo)志)很少能用當(dāng)前療法實現(xiàn)。雖然TLR和RLR激動劑的抗病毒功效已在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠以及感染了WHV或DHBV的動物中觀察到，但全身性施用實現(xiàn)抗病毒效果所必需的劑量的PRR激動劑通常與顯著的副作用有關(guān)，這是由于廣泛的細胞應(yīng)答的激活和促炎性細胞因子的大量產(chǎn)生。專利技術(shù)概述本文公開了治療患有乙型肝炎病毒感染的受試者的方法，其包括向所述受試者施用有效量的STING激動劑。還提供了鑒別適用于治療乙型肝炎病毒感染的化合物的方法，其包括：用目標(biāo)化合物處理肝臟定居的樹突細胞、巨噬細胞、非實質(zhì)細胞或其任何組合；在條件培養(yǎng)基中孵育所述細胞；從所處理的細胞中除去條件培養(yǎng)基或其部分；以及用條件培養(yǎng)基孵育乙型肝炎病毒感染的肝細胞。本文還提供了治療患有乙型肝炎病毒感染的受試者的方法，其包括：用目標(biāo)化合物處理肝臟定居的樹突細胞、巨噬細胞、非實質(zhì)細胞或其任何組合；在條件培養(yǎng)基中孵育所述細胞；從所處理的細胞中除去條件培養(yǎng)基或其部分；以及向所述受試者施用所述條件培養(yǎng)基或其部分。附圖簡述在結(jié)合附圖閱讀時，將進一步理解概述以及下面的詳細描述。為了說明所公開的方法，在附圖中示出方法的示例性實施方案；然而，所述方法不限于所公開的特定實施方案。在圖中：圖1包括圖1A-1C，示出了：A)測定策略的示例性表示；B)用TLR激動劑(直接處理)或含有從TLR激動劑處理的RAW264.7細胞收獲的50％條件培養(yǎng)基的培養(yǎng)基(間接處理)處理AML12HBV10；以及C)用從TLR激動劑處理的RAW264.7細胞收獲的條件培養(yǎng)基間接處理AML12HBV10細胞。圖2包括圖2A-2B，表示：A)從MicroSource文庫鑒別的作為先天免疫增強物的示例性類黃酮的結(jié)構(gòu)；以及B)用7,2'-二羥基黃酮化合物直接處理的或用條件培養(yǎng)基間接處理的AMLHBV10細胞的分析，所述條件培養(yǎng)基來自用7,2'-二羥基黃酮化合物處理的RAW264.7細胞。圖3包括圖3A-3D，表示：A)示例性小鼠IFN誘導(dǎo)物的結(jié)構(gòu)；B)用DMXAA(上圖)、CMA(中圖)、泰洛倫(下圖)(直接處理)直接處理的或用從用每種化合物處理12h的RAW264.7細胞收獲的50％條件培養(yǎng)基間接處理的AML12HBV10細胞的示例性分析；C)模擬處理或用125μM的DMXAA或1μg/ml的LPS處理的RAW264.7和AML12HBV10細胞的示例性分析；以及D)用較低劑量的DMXAA直接或間接處理的AML12HBV10細胞的示例性分析。圖4包括圖4A-4E，表示用DMXAA、聚I:C、Pam3CSK4直接處理的或用從用DMXAA或TLR激動劑處理的RAW264.7細胞收獲的50％條件培養(yǎng)基間接處理的AML12HBV10細胞的示例性分析。A)通過RNA印跡測定細胞內(nèi)HBVRNA；B)通過蛋白質(zhì)印跡測定HBV核心蛋白；C)通過天然瓊脂糖凝膠測定法測定HBV衣殼；D)通過天然瓊脂糖凝膠測定法測定衣殼相關(guān)的HBVDNA；以及E)通過DNA印跡雜交測定細胞質(zhì)HBV核心DNA。圖5包括圖5A-5E，表示用以下處理的RAW264.7細胞的示例性蛋白質(zhì)印跡分析：A)125μM的DMXAA，B)1μg/ml的Pam3CSK4(TLR1/2激動劑)，C)3μM的gardiquimod(TLR7激動劑)，D)10μg/ml的聚I:C(TLR3激動劑)，或E)1μg/ml的LPS(TLR4激動劑)，持續(xù)所示的時間。圖6包括圖6A-6G，表示用125μM的DMXAA、1μg/ml的Pam3CSK4(TLR1/2激動劑)、10μg/ml的聚I:C(TLR3激動劑)或3μM的gardiquimod(TLR7激動劑)處理(持續(xù)所示的時間)的RAW264.7細胞的示例性RT-PCR分析。以下的分析：A)IFN-β，B)IL6，C)IL1，D)IL10，E)TNF-α本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種治療患有乙型肝炎病毒感染的受試者的方法，其包括向所述受試者施用有效量的STING激動劑。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2013.10.21 US 61/893,5261.一種治療患有乙型肝炎病毒感染的受試者的方法，其包括向
所述受試者施用有效量的STING激動劑。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述STING激動劑刺激巨噬
細胞、樹突細胞、肝臟非實質(zhì)細胞或其任何組合中的先天細胞因子應(yīng)
答。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述先天細胞因子應(yīng)答是經(jīng)
由細胞因子介導(dǎo)的。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述先天細胞因子應(yīng)答是經(jīng)
由1型干擾素介導(dǎo)的。
5.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述STING激動
劑包括類黃酮。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述類黃酮包括10-(羧甲
基)9(10H)吖啶酮(CMA)、5,6-二甲基呫噸酮-4-乙酸(DMXAA)、異氧
黃酮、6,4’-二甲氧基黃酮、4’-甲氧基黃酮、3’,6’-二羥基黃酮、7,2’-
二羥基黃酮、大豆黃素、芒柄花黃素、凹豬屎豆堿7-甲醚、氧雜蒽酮
或其任何組合。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述類黃酮包括DMXAA。
8.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述STING激動
劑抑制受感染的肝細胞中的乙型肝炎病毒復(fù)制。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述STING激動劑降低乙型
肝炎病毒衣殼水平。
10.一種鑒別適用于治療乙型肝炎病毒感染的化合物的方法，其
包括：
用目標(biāo)化合物處理肝臟定居的樹突細胞、巨噬細胞、非實質(zhì)細胞
或其任何組合；
在條件培養(yǎng)基中孵育所處理的細胞；
從所處理的細胞中除去條件培養(yǎng)基或其部分；以及
用條件培養(yǎng)基孵育乙型肝炎病毒感染的肝細胞。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，進一步包括測量乙型肝炎病毒
復(fù)制。
12.如權(quán)利要求10或11中任一項所述的方法，其中所述處理步
驟刺激肝臟定居的樹突細胞、巨噬細胞、非實質(zhì)細胞或其任何組合內(nèi)
的先天細胞因子免疫應(yīng)答，并且釋放細胞因子到條件培養(yǎng)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：J·昌，F·郭，T·M·布洛克，JT·郭，
申請(專利權(quán))人：德雷克塞爾大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：美國;US