本發明專利技術提供了一種用于快速檢測食用向日葵雜交種SH363真實性的試劑盒，所述試劑盒包括各自獨立包裝的引物液、反應液和DNA聚合酶部分，其中，所述引物液部分含有如下引物SR-366、引物SR-495、引物SR-1067和引物SR-1079中的至少一種。所述試劑盒可以在短時間內對大量待測向日葵檢測，且檢測結果準確，穩定可靠。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于鑒定農作物種子真實性和品種純度領域，具體涉及一種基于SSR分子 標記技術建立的可快速檢測向日葵雜交種SH363真實性的試劑盒。
技術介紹
向日葵（Helianthus annuusL.)屬菊科（Composicae)向日葵屬的雙子葉植物，原 產自北美，通過人工培育形成了具有很多不同遺傳多態性的品種，具有耐鹽堿、耐干旱、耐 瘠薄、適應性強的特點，含油量豐富，油脂中亞油酸含量高，是世界第二大油科作物。向日葵 的品種繁多，其中食用向日葵由于不飽和脂肪酸含量高，尤其是亞油酸和α-麥胚酚（維生 素 Ε的一種）含量高，不僅營養豐富，還可有效防治心血管疾病，廣受人們喜愛。食用向日 葵品種豐富，有數百個地方品種散步在全國各地。隨著向日葵育種技術的不斷發展和雜交 品種的廣泛推廣，開發出了更多的具有優勢的食用向日葵雜交種，但由于食用向日葵品種 的繁多以及不法商販販賣偽劣假冒的食用向日葵品種，使得食用向日葵雜交種的保護受到 嚴重的破壞，損害了廣大的種植戶的利益，因此食用向日葵雜交種的真實性與品種純度鑒 定已越來越成為食用向日葵新品種保護以及保護種植戶利益的必要手段。 傳統的向日葵雜交種的真實性與品種純度鑒定方法依靠田間小區鑒定方法，在苗 期、蕾期、花期、灌漿期以及對收獲后的種子等進行觀測鑒定，主要依據向日葵的株、葉、花、 種子的特征特性加以評價和判斷。但上述鑒定方法存在如下缺陷：（1)受到經驗的限制， 沒有完全一致的評判標準；（2)在向日葵生長期間的鑒定還容易受到氣候與栽培條件的影 響，引起誤差或誤判；(3)需投入大量的人力、物力，成本高、耗時長，時效性差，對市場與生 產的指導不及時，難以避免給生產上帶來的損失。 隨著分子生物學技術的發展，分子標記技術越來越多的應用于農作物種子的真實 性與品種純度鑒定。分子標記技術作為一種植物基因組特征分析手段，是繼形態標記、細胞 標記和生化標記之后發展出的一種新的較理想的基因標記形式。分子標記鑒定技術是以 DNA分子多態性為基礎的一種遺傳標記，能穩定遺傳，可以反映生物的個體和群體特征。由 于分子標記可以直接反映 DNA水平上的差異，具有高度的專一性和特異性，可以用于鑒定 種子的真實性與品種純度。 SSR(simple sequence repeats)是一種常用的標記技術，具有數量豐富、多態性 高、共顯性遺傳、擴增穩定、易于檢測等方面的優點，已在許多農作物遺傳連鎖圖譜的構建、 遺傳多樣性、標記和定位基因以及分子標記輔助方面的應用。SSR技術是基于微衛星DNA， 其是一段核酸簡單重復序列，廣泛存在于真核生物的基因組中，微衛星DNA重復單位的重 復次數出現不同，在不同基因型間同一基因座位的微衛星DNA往往表現為長度等的差異， 形成了豐富的多態性。SSR的核心單位一般由2-6個核苷酸組成，兩側一般是保守序列， 可以根據微衛星兩端的單拷貝序列設計特異性引物，利用PCR技術擴增每個位點的微衛星 DNA序列，通過電泳分析微衛星DNA多態性，進而達到區別不同品種的目的。微衛星標記通 常具有共顯性的特點，F1雜交種具有雙親等位基因的互補帶型。鑒于不育系和其同型保持 性遺傳背景基本一致，只在不育基因、保持基因等特征基因上存在差異，據此特征基因選擇 DNA分子標記進行分析，從而實現植物品種的有效地區別和鑒定。SSR標記已成為現階段用 于鑒定種子純度的常用方法，已廣泛應用于玉米、水稻、大豆的新品種純度鑒定。但是目前 在食用向日葵雜交種使用SSR分子標記技術鑒定其真實性和純度的報道鮮有，建立一套適 于食用向日葵雜交種真實性和純度鑒定的SSR分子標記技術具有重要意義，可以克服傳統 的田間小區種植鑒定所帶來的不足。 SH363是北京三瑞農業科技有限公司2010年選育的食用向日葵晚熟雜交種，其親 本組合為A436XR1843,生育期為115-125天；幼苗綠莖，生長整齊，長勢旺；葉片平展，卵圓 形，葉片數30片左右，葉色深綠，葉片大，株型整齊清秀。開花期一致，舌狀花黃色。花盤 直徑20厘米左右，植株彎曲度較大，株高220厘米左右，莖桿粗壯韌性極好，抗倒伏能力極 強；平均單盤粒數多，結實率85 %左右，粒長2. 0-2. 3厘米，千粒重185g左右；籽粒為黑色 白邊有不規則白色條紋，潔凈，口感香甜，商品性極好，籽粒飽滿，籽仁率可達到50-55%。 該品種成熟時葉片干凈，抗霜霉病，抗黃萎病；菌核病的發生率很低。該品種產量三要素協 調，豐產性良好，一般畝產340公斤左右。適合中高肥力的田塊種植。田間表現整齊，高抗 病，抗倒伏，耐鹽堿。為保證該優質品種的最大經濟效益及其產業化的發展，需要一種可高 效準確的檢測試劑盒來快速鑒定所述食用向日葵雜交種SH363的真實性和品種純度，加快 雜交種的質量檢測進程。
技術實現思路
為此，本專利技術所要解決的技術問題在于提供一種可快速鑒定食用向日葵雜交種 SH363真實性的試劑盒，所述試劑盒使用方便、快捷，能夠在短時間內對大量的待測食用向 日葵雜交種SH363樣品進行快速鑒定，測定結果準確穩定可靠。 為解決上述技術問題，本專利技術提供了一種用于快速檢測食用向日葵雜交種SH363 真實性的試劑盒，所述試劑盒包括各自獨立包裝的引物液、PCR反應液和DNA聚合酶部分， 其中，所述引物液部分含有如下引物SR-366、引物SR-495、引物SR-1067和引物SR-1079中 的至少一種： SR-366-F: 5，-AACCAACTGAGCATTCTTGTGA-3，， SR-366-R: 5，-GCGCTAGGTTAAAGAGGACAAA-3，； SR-495-F: 5 ' -CCAGGATTAGGTAGCTTAGTTCG-3 '， SR-495-R: 5 ' -GCGATCTGAGGTTGACTCGT-3 ' ； SR-1067-F: 5 ' -CGTCAACTAATGCTGTCCTGATG-3 '， SR-1067-R:5,-TCGGATATGATGCTGCTAAAGGT-3,； SR-1079-F: 5 ' -TACGACTGACGATTCCATTTCTC-3 '， SR-1079-R: 5' -AACTGGATTTCACAGGGAGTGTT-3'。 所述的用于快速檢測食用向日葵雜交種SH363真實性的試劑盒，其特征在于，所 述引物液部分中的引物為引物SR-366、引物SR-495、引物SR-1067和引物SR-1079中的任 意兩種。 所述的用于快速檢測食用向日葵雜交種SH363真實性的試劑盒，所述PCR反應液 部分含有用于進行PCR擴增的含Mg2+擴增緩沖液、dNTPs以及ddH20。 所述的用于快速檢測食用向日葵雜交種SH363真實性的試劑盒，所述DNA聚合酶 為Taq DNA聚合酶。 所述的用于快速檢測食用向日葵雜交種SH363真實性的試劑盒，每支所述試劑盒 的配方為： 引物液，0·2μΜ，1μL; Taq DNA 聚合酶，2. 5units，0· 5 μ L ; 10 X 含 Mg2+ 擴增緩沖液，2mM，2· 5 μ L ; dNTPs, 2. 5mM, 2 μ L ； ddH20,17μ L〇 本專利技術提供了一種利用所述試劑盒快速檢測食用向日葵雜交種S本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用于快速檢測食用向日葵雜交種SH363真實性的試劑盒，其特征在于，包括各自獨立包裝的DNA聚合酶部分、PCR反應液部分以及引物液部分；所述引物液部分含有如下引物SR?366、引物SR?495、引物SR?1067和引物SR?1079中的至少一種；SR?366?F:5’?AACCAACTGAGCATTCTTGTGA?3’，SR?366?R:5’?GCGCTAGGTTAAAGAGGACAAA?3’；SR?495?F:5’?CCAGGATTAGGTAGCTTAGTTCG?3’，SR?495?R:5’?GCGATCTGAGGTTGACTCGT?3’；SR?1067?F:5’?CGTCAACTAATGCTGTCCTGATG?3’，SR?1067?R:5’?TCGGATATGATGCTGCTAAAGGT?3’；SR?1079?F:5’?TACGACTGACGATTCCATTTCTC?3’，SR?1079?R:5’?AACTGGATTTCACAGGGAGTGTT?3’。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：司立平，張永平，馬德甯，萬縣貞，姚梅園，
申請(專利權)人：內蒙古三瑞農業科技有限公司，北京三瑞農業科技有限公司，甘肅德瑞農業科技有限公司，
類型：發明
國別省市：內蒙古;15
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