本發明專利技術提供了一種同時定量檢測SAA/PCT/CRP的方法，利用互相獨立的人血清淀粉樣蛋白A(SAA)、人降鈣素原(PCT)和C-反應蛋白(CRP)檢測試紙，三聯卡殼和附帶了相應判定方法和標準曲線的免疫層析判讀結果記錄儀，同時快速定量檢測SAA/PCT/CRP，檢測方法簡便穩定，不需抽取大量血液樣本，降低了醫療費用，是靈敏度高并能同時快速定量檢測SAA/PCT/CRP的檢測方法。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫學檢測領域，尤其是一種同時定量檢測SAA/PCT/CRP的方法。
技術介紹
血清淀粉樣蛋白A(SAA)是一種高度異質性的急性相反應蛋白，主要由肝細胞產生，其相對分子量約為12 000AAA這種急性反應物在炎癥反應中的濃度會比其在正常時升高1000倍，升幅高于CRP，此時它經由其N端與高密度脂蛋白(HDL)結合可以置換與HDL結合的載脂蛋白A-1(ApoA-1)從而形成急性相時的SAA/HDL復合體，其半衰期僅為50分鐘左右。研究表明，在炎癥嚴重的情況下，SAA表達量的高低與壞死細胞和組織的數量密切相關。SAA的表達量在炎癥發生的第3天出現高峰，第7天回到基線。降鈣素原(PCT)是一種蛋白質，當嚴重細菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒癥和多臟器功能衰竭時它在血漿中的水平升高。自身免疫、過敏和病毒感染時PCT不會升高。局部有限的細菌感染、輕微的感染和慢性炎癥不會導致其升高。細菌內毒素在誘導過程中擔任了至關重要的作用。PCT在人體內的半衰期為25-30h，穩定性好，在正常人血清中含量極低。在導致全身炎癥反應綜合癥(SIRS)的許多情況下，諸如細菌性感染、胰腺炎、燒傷、多發傷，血中CT前肽物質的所剪切產物異常升高，其中PCT是最主要的產物，而CT無明顯變化。血PCT水平與感染及損傷的嚴重程度呈正相關，且已成為用于膿毒癥，嚴重膿毒癥，膿毒癥休克的診斷和療效監測的有效指標。PCT反映了全身炎癥反應的活躍程度。影響PCT水平的因素包括被感染器官的大小和類型、細菌的種類、炎癥的程度和免疫反應的狀況。另外，PCT只是在少數患者的大型外科術后l-4d可以測到。C反應蛋白(C-reactive protein,CRP)，1930年Tillet和Francis因在急性大葉性肺炎患者血清中發現能在鈣離子存在時與肺炎球菌C多糖起沉淀反應而得名，是人類重要的急性期反應蛋白，急性期濃度可升高上千倍，循環中的CRP半衰期為19小時。人類CRP是由肝臟產生，由五個相同的亞基依靠非共價鍵形成的環狀五聚體，這一特征性結構使其歸類于五聚素(一組具有免疫防御特性的鈣結合蛋白)家族。與C反應蛋白(CRP)類似，血清淀粉樣蛋白A的含量濃度是反映感染性疾病早期炎癥的敏感指標，有助于診斷炎癥，評估其活性，監控其活動及治療。但是，SAA檢測在診斷腎移植排斥反應伴發病毒感染的患者(特別是進行免疫抑制治療的患者)以及用腎上腺皮質激素治療的囊性纖維化患者方面，比PCT更能夠準確判斷炎癥的活動狀態PCT對嚴重細菌感染診斷有較高的診斷效能，并具有較高的靈敏度和特異度。優于CRP和SAA等感染標志物，PCT對病毒感染與細菌感染的鑒別診斷有一定的應用價值。但是，在自身免疫疾病的炎癥性疾病活動期間，PCT含量無升高，但CRP含量升高。在小兒感染性疾病早期，很難鑒別是細菌感染還是病毒感染CRP即對病毒感染缺乏敏感性，而SAA在細菌和病毒感染早期均可升高。另有研究表明CRP和SAA均可預示較差的預后，比如復發或死亡，而監測感染急性期反應，SAA是比CRP即更敏感的指標研究表明在診斷炎癥相關疾病，單獨使用一種指標CRP、PCT或SAA不能有效準確診斷，臨床上可將SAA，PCT和CRP等感染相關指標與臨床資料相結合，對感染性疾病的診斷具有重要意義。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題在于提供一種同時定量檢測SAA/PCT/CRP的方法。為解決上述技術問題，本專利技術的技術方案是:一種同時定量檢測SAA/PCT/CRP的檢測裝置，包括人血清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測試紙、人降鈣素原(PCT)檢測試紙和C-反應蛋白(CRP)檢測試紙，其中，所述人血清淀粉樣蛋白A檢測試紙由包被SAA抗體(T線)和平行包被羊抗鼠IgG(C線)的硝酸纖維素膜、含有膠體金標記的配對的抗人SAA抗體的膠體金墊、吸樣墊、樣品墊和塑料底板組成；所述人降鈣素原(PCT)檢測試紙由包被PCT抗體(T線)和平行包被抗鼠IgG(C線)的硝酸纖維素膜、含有膠體金標記的配對抗人PCT抗體的膠體金墊、吸樣墊、樣品墊和塑料底板組成；所述C-反應蛋白檢測試紙由包被CRP抗體(T線)和平行包被羊抗鼠IgG(C線)的硝酸纖維素膜、含有膠體金標記的配對的抗人CRP抗體的膠體金墊、吸樣墊、樣品墊和塑料底板組成；上述各試紙(人血清淀粉樣蛋白A檢測試紙、人降鈣素原檢測試紙和C-反應蛋白檢測試紙)中吸樣墊、硝酸纖維素膜、膠體金墊和樣品墊從塑料底板的一端依次排列至另一端。優選的，上述同時定量檢測SAA/PCT/CRP的檢測裝置，所述人血清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測試紙和C-反應蛋白(CRP)檢測試紙的樣品墊是由處理液處理的無紡布于室溫相對濕度不高于30% (—般在濕度為15-30%)的條件下干燥，密封保存而得到的，其中，所述處理液包括50mM Tri s、0.5 % Tween-20、0.I % 牛血清白蛋白(BSA)、0.5 % Trt1n-1OO ；所述人降鈣素原(PCT)檢測試紙的樣品墊由濾血濾紙和經紅細胞單抗處理后的纖維玻纖膜組成，其中，上層為纖維玻纖膜、下層為濾血濾紙，纖維玻纖膜和濾血濾紙的邊緣有l_2mm重疊，于室溫相對濕度不高于30% (—般在濕度為15-30%)的條件下干燥，密封保存而得到的。優選的，上述同時定量檢測SAA/PCT/CRP的檢測裝置，所述各試紙(人血清淀粉樣蛋白A檢測試紙、人降鈣素原檢測試紙和C-反應蛋白檢測試紙)的吸樣墊為吸水濾紙。優選的，上述同時定量檢測SAA/PCT/CRP的檢測裝置，所述各試紙的硝酸纖維素膜(NC膜)是由下述方法制備得到的:人血清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測試紙的硝酸纖維素膜:將SAA抗體用含1%的0.0lMpH 7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)配制成0.8-1.5mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4ul/cm的參數用噴膜儀進行劃線，包被試紙條的SAA抗體作為T線，同時將羊抗鼠IgG用含1%的0.0lMpH 7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)配制成l-2mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4ul/cm的參數用噴膜儀進行劃線，包被試紙條的羊抗鼠IgG作為C線，于室溫相對濕度不高于30%(—般在濕度為15-30%)的條件下干燥，密封保存備用；人降鈣素原(PCT)檢測試紙的硝酸纖維素膜:將PCT抗體用含1%的0.0lMpH 7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)配制成0.8-1.5mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4ul/cm的參數用噴膜儀進行劃線，包被試紙條的PCT抗體作為T線，同時將羊抗鼠IgG用含I %的0.0lM pH7.4磷酸鹽緩沖液(I3BS)配制成1-2mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4u I /cm的參數用噴膜儀進行劃線，包被試紙條的羊抗鼠IgG作為C線，于室溫相對濕度不高于30% (—般在濕度為15-30%)的條件下干燥，密封保存備用；C-反應蛋白(CRP)檢測試紙的硝酸纖維素膜:將CRP抗體用含1%的0.0lM pH 7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)配制成0.8-1.5mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4ul/cm的參數用噴膜儀進行劃線，包被試紙條的CRP抗體作為T線，同時將羊抗鼠IgG用含I %的0.0lM p本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種同時定量檢測SAA/PCT/CRP的方法，利用檢測裝置對SAA/PCT/CRP同時進行檢測，所述檢測裝置包括人血清淀粉樣蛋白A檢測試紙、人降鈣素原檢測試紙和C?反應蛋白檢測試紙，其中，所述人血清淀粉樣蛋白A檢測試紙由包被SAA抗體和平行包被羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜、含有膠體金標記的配對的抗人SAA抗體的膠體金墊、吸樣墊、樣品墊和塑料底板組成；所述人降鈣素原檢測試紙由包被PCT抗體和平行包被抗鼠IgG的硝酸纖維素膜、含有膠體金標記的配對抗人PCT抗體的膠體金墊、吸樣墊、樣品墊和塑料底板組成；所述C?反應蛋白檢測試紙由包被CRP抗體和平行包被羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜、含有膠體金標記的配對的抗人CRP抗體的膠體金墊、吸樣墊、樣品墊和塑料底板組成；上述各試紙中吸樣墊、硝酸纖維素膜、膠體金墊和樣品墊從塑料底板的一端依次排列至另一端；具體應用方法如下：檢測SAA：將5ul的被檢樣本或者10ul全血加入到1mL稀釋液中，所述被檢樣本包括血清或血漿，然后在稀釋液孔中加入100ul稀釋好的樣本；檢測CRP：將5ul的被檢樣本或者10ul全血加入到1mL稀釋液中，所述被檢樣本包括血清或血漿，然后在稀釋液孔中加入100ul稀釋好的樣本；檢測PCT：將10ul的被檢樣本或者20ul的全血加入到樣本孔中，所述被檢樣本包括血清或血漿，然后在稀釋液孔加入80ul稀釋液。上述稀釋液為50mM?Tris，PH7.6。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：李洲，周洪銳，陳逸桐，張梓琪，李昀地，楊延瑞，
申請(專利權)人：天津中新科炬生物制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：天津;12
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