一種裂環(huán)杜松烷型倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種裂環(huán)杜松烷型倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。制法：(1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂柱色譜分離，依次以水、30％乙醇、90～100％乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，濃縮，得到90～100％乙醇洗脫部位；(2)90～100％乙醇洗脫部位，依次經(jīng)硅膠柱色譜，Sephadex?LH-20柱色譜，ODS柱色譜分離，半制備液相HPLC分離，得到本發(fā)明專利技術(shù)的新化合物。本發(fā)明專利技術(shù)所述化合物可用于治療手足口病。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及醫(yī)藥
，特別涉及一個(gè)從現(xiàn)有中成藥制劑中提取的裂環(huán)杜松烷型倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
熱毒寧注射液(國藥準(zhǔn)字Z20050217)為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司自主研發(fā)的原中藥二類新藥，其處方為青蒿、金銀花、梔子，輔料為聚山梨酯80。熱毒寧注射液在外感風(fēng)熱所致感冒、流感、咳嗽、上呼吸道感染等疾病的臨床治療中應(yīng)用廣泛，其作用迅速、效果顯著。研究人員在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)了新的化學(xué)成分，并且發(fā)現(xiàn)此化合物在各個(gè)批次的熱毒寧注射液中均穩(wěn)定存在。經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知，這是首次在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)并鑒定出的新的化學(xué)成分，并經(jīng)過Scifinderscholar檢索發(fā)現(xiàn)該化合物為新化合物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)從熱毒寧注射液中制備提取出一種具有生物活性的杜松烷型倍半萜類化合物，并提供了其在制備治療手足口病藥物中的應(yīng)用。具體地說，本專利技術(shù)提供了一種杜松烷型倍半萜類化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示：本專利技術(shù)還提供了上述化合物的制備方法，包括如下步驟：(1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂色譜柱分離，依次以水、30％乙醇、90～100％乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得到水洗脫部位、30％乙醇洗脫部位、90～100％乙醇洗脫部位；(2)取步驟(1)的90～100％乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為9∶1的洗脫液洗，減壓濃縮的餾分B，餾分B經(jīng)SephadexLH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等度洗脫，去除色素后收集餾分，標(biāo)記為B-2，餾分B-2經(jīng)ODS柱色譜分離，甲醇-水梯度洗脫收集甲醇-水體積比為3∶2的餾分B-2-2，餾分B-2-2經(jīng)半制備液相HPLC分離，得到本專利技術(shù)的化合物。上述制備方法中，步驟(2)所述半制備液相色譜，以比例為55∶45∶0.5的甲醇-水-甲酸為流動(dòng)相，檢測波長為208與220nm，流速4mL/min，在半制備液相上的保留時(shí)間為37.4min。專利技術(shù)人通過理化性質(zhì)和現(xiàn)代波譜學(xué)手段(UV、IR、MS、CD、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR和單晶x射線衍射)對分離得到的化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，證實(shí)其為結(jié)構(gòu)如式I所示的裂環(huán)杜松烷型倍半萜類化合物。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的在于提供一種式I所示化合物在制備治療手足口病藥物中的應(yīng)用。專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)本專利技術(shù)化合物對手足口病EV71病毒有一定的抑制作用。本專利技術(shù)的再一個(gè)目的在于提供一種藥物組合物，包含上述式I所示化合物。本專利技術(shù)還提供了一種治療手足口病的藥物組合物，含有治療有效量的上述式I化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。附圖說明圖1為化合物的HR-ESI-Q-TOF-MS圖2為化合物的1H-NMR譜圖3為化合物的13C-NMR譜和DEPT-135譜圖4為化合物的1H-1HCOSY譜圖5為化合物的HSQC譜圖6為化合物的HMBC譜圖7為化合物的NOESY譜圖8為化合物的單晶x射線衍射圖圖9為化合物結(jié)構(gòu)式具體實(shí)施方式為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本專利技術(shù)的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對本專利技術(shù)作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。實(shí)施例1本專利技術(shù)化合物的制備(1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂色譜柱分離，依次以水、30％乙醇、95％乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得到水洗脫部位、30％乙醇洗脫部位、95％乙醇洗脫部位；(2)取步驟(1)的90～100％乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為9∶1的洗脫液減壓濃縮得餾分B，餾分B經(jīng)SephadexLH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等度洗脫，去除色素后收集餾分，標(biāo)記為B-2，餾分B-2經(jīng)ODS柱色譜分離，用甲醇-水梯度洗脫，收集甲醇-水體積比為3∶2的餾分B-2-2，總計(jì)105mg，餾分B-2-2經(jīng)半制備液相HPLC分離，以比例為55∶45∶0.5的甲醇-水-甲酸為流動(dòng)相，檢測波長為208與220nm，流速4mL/min，在半制備液相上的保留時(shí)間為37.4min。分離所得溶液干燥，得到本專利技術(shù)的化合物35.7mg。實(shí)施例2本專利技術(shù)化合物的結(jié)構(gòu)鑒定本化合物為白色針狀結(jié)晶。ESI-MS(positive)給出m/z587[2M+Na]+；ESI-MS(negative)給出281[M-H]-，提示化合物分子量為282。HR-ESI-Q/TOF-MS給出m/z305.1365[M+Na]+(計(jì)算值為305.1365)(見圖1)，確定化合物分子式為C15H22O5，計(jì)算不飽和度為5。本化合物的1H-NMR(400MHz，inCD3OD)(見圖2)譜共顯示了20個(gè)氫信號，低場區(qū)顯示了2個(gè)烯氫質(zhì)子信號[δ6.19(1H，brs)，5.68(1H，brs)]，高場區(qū)可見1個(gè)單峰甲基信號[δ2.12(3H，s)]，表明其與季碳直接相連，1個(gè)d峰甲基信號δ0.93(3H，d，J＝6.4Hz)，表明其與叔碳直接相連。本化合物的13C-NMR(100MHz，inCD3OD)結(jié)合DEPT-135譜(見圖3)共顯示15根碳信號，其中包括4個(gè)季碳信號(3個(gè)羰基δ211.9，178.4及169.73，1個(gè)SP2雜化的季碳信號(δ144.7)，2個(gè)甲基碳信號(δ29.9，20.0)，5個(gè)亞甲基碳信號(δ125.8，38.7，36.3，33.6，24.7)，其中亞甲基碳信號δ125.8為一個(gè)末端雙鍵的碳信號。綜合以上信息，推測化合物為一個(gè)具有15個(gè)碳原子骨架的倍半萜類化合物，結(jié)構(gòu)中含有1個(gè)環(huán)，1個(gè)雙鍵，3個(gè)羰基。本化合物的1H-1HCOSY譜中(見圖4)，觀察到H-1/H-6/H-7/H-8/H-9/H-10(H-14)和H-1/H-2/H-3之間存在明顯的相關(guān)信號，結(jié)合HSQC譜(見圖5)，推出結(jié)構(gòu)中存在一個(gè)飽和六元環(huán)的結(jié)構(gòu)A。在HMBC譜中(見圖6)，相關(guān)峰H-13/C-7，C-11，C-12；H-7/C-11，C-12，C-13；H-15/C-3，C-4以及H-6/C-5構(gòu)建了結(jié)構(gòu)片段B。結(jié)合分子式和分子量，可知15位和9位上連接羥基。由此將化合物15的平面結(jié)構(gòu)確定為2-carboxy-4-methyl-α-methylene-3-(3-oxobutyl)-cyclohexaneaceticacid。該化合物的相對構(gòu)型是通過NOESY(見圖7)實(shí)驗(yàn)確定的，在NOE譜中可以看到1-H/7-H和6-H/10-H相關(guān)，表明H-6和H-10處于分子的同一側(cè)(β)，同時(shí)化合物的絕對構(gòu)型是通過單晶x射線衍射(見圖8)技術(shù)確定的。綜合以上分析，將化合物的結(jié)構(gòu)鑒定為(1S，6R，7R，10R)-6-carboxy-10-methyl-α-methylene-1-(1-oxobutyl)-cyclohexaneaceticacid。所有的碳?xì)湫盘枤w屬參見表1。經(jīng)SciFinderScholar網(wǎng)絡(luò)檢索，發(fā)現(xiàn)化合物1未本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種裂環(huán)杜松烷型倍半萜類化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示：

【技術(shù)特征摘要】
1.一種裂環(huán)杜松烷型倍半萜類化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示：
2.權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于，包括以下
步驟：
(1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂柱色譜分離，
依次以水、30％乙醇、90～100％乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，
減壓濃縮至無醇味，得到水洗脫部位、30％乙醇洗脫部位、90～100％
乙醇洗脫部位；
(2)取步驟(1)的90～100％乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分
離，氯仿-甲醇梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為9∶1的洗脫液減壓濃
縮得餾分B，餾分B經(jīng)SephadexLH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等度
洗脫，去除色素后收集餾分，標(biāo)記為B-2，餾分B-2經(jīng)ODS...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蕭偉，姚新生，李海波，于洋，王振中，姚志紅，戴毅，高昊，
申請(專利權(quán))人：江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32