本發明專利技術涉及細胞培養技術領域，特別涉及一種NK細胞培養組合物及其培養方法。該組合物包括人工抗原遞呈細胞、IL-2、IL-15、田七皂苷、血清和基礎培養基。本發明專利技術NK細胞培養組合物可促進NK細胞的大量增殖，并且提高其細胞的殺傷活性，避免了外源性蛋白及病毒的污染，降低了生產成本，獲得的NK細胞純度較高。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術設及細胞培養
，特別設及一種NK細胞培養組合物及其培養方法。
技術介紹
細胞治療是近幾年興起的疾病治療新技術，是指利用某些具有特定功能的細胞的 特性，采用生物工程方法獲取和/或通過體外擴增、特殊培養等處理后，使運些細胞具有增 強免疫、殺死病原體和腫瘤細胞、促進組織器官再生和機體康復等治療功效，從而達到治療 疾病的目的。治療性的細胞包括：NK、丫 5T、CD3AK、DC-CIK等，其療效、特異性、整體有效 率、副作用反應等方面的情況逐步改善。NK細胞（naturalkillercell)也稱自然殺傷細胞，屬于淋己細胞譜系細胞，含有 穿孔蛋白和粒酶顆粒的細胞毒淋己細胞，對祀細胞的識別無MHC(主要組織相容性復合體， majorhistocompatibilitycomplex)限制，是重要的機體免疫細胞。NK細胞來源于骨髓， 屬于淋己細胞譜系的大顆粒淋己細胞，其占外周血淋己細胞總數的5~10%，無特異性識 另IJ，不需經過抗原呈遞及可直接殺傷腫瘤細胞，并且能分泌細胞因子調節其他免疫細胞的 功能，在腫瘤治療、抗病毒感染和清除異己細胞中有著重要的作用。NK細胞在癌癥腫瘤治療方面取得了較大進展，主要是采取與手術、放化療相結合 的治療方式，與傳統單純的放化療相比，結合NK細胞的治療，增強了患者的免疫功能或直 接殺死腫瘤細胞和病毒感染的細胞，運樣輔助因放化療造成身體虛弱、抵抗力低而造成的 二次傷害、容易感染生病等。而且細胞治療可W有效抑制腫瘤細胞的轉移擴散，并且沒有副 作用。[000引 目前，主要采用單純的抗原遞呈細胞與NK細胞共同培養的方法，來促進NK細胞的 增殖。而運種采用單純的細胞生長因子刺激NK細胞擴增的方法擴增得到的NK細胞純度低， 殺傷活力低。因此，急需提供一種擴增數量大、殺傷活性高的NK細胞培養方法。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術提供了一種NK細胞培養組合物及其培養方法。該組合物可促進NK細胞的增殖，提高對腫瘤細胞的殺傷活力。 為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供W下技術方案：[000引本專利技術提供了一種NK細胞培養組合物，包括人工抗原遞呈細胞、比-2、比-15、田 屯皂巧、血清和基礎培養基。 本專利技術組合物可促進NK細胞的增殖，并且有抑制腫瘤細胞的活性。將該組合物應 用于NK細胞的培養中，培養過程相對簡單，成本相對較低，得到的NK細胞擴增數量大，殺傷 活性局。 作為優選，組合物中各組分用量為： 人工抗原途呈細胞 （0.1~l)x 1〇(、個ZmL IL-2 200~SOOUZmL ILl 5 20~lOOU/mL 田毛皂普 IO--SOmgZmL 血清 10%體積分數 基礎培養基 余量。 在本專利技術提供的一些實施例中，組合物中人工抗原遞呈細胞的用量為（0.5~ 0. 75)X1〇6個 /mL。 在本專利技術提供的一些實施例中，組合物中各組分用量為： 人工捉原遞呈細胞 0.5x；l〇6個/1 證 IL2 200U/mL 壓-巧 20U/mL 田毛皂巧 1 OmgZmL 血清 ！0〇/〇休積分故 基礎培養基 余量。 在本專利技術提供的另一些實施例中，組合物中各組分用量為： A工抗原遞呈細胞 0.巧XIO6個ZmL IL-2 SOOUZmL 比-15 IOOLVmL 巧屯皂普' SOmgZmL 血清 10%體積分數 基減培養基 余量。 在本專利技術提供的另一些實施例中，組合物中各組分用量為： 人玉撼慕遞呈細媳 0.67X!妒個漸出 山-2 300U/inL 1L-15 50U/mL 切屯惡誓 30mg/mL 血清 10%休積分數 基礎培養基 余量。 作為優選，基礎培養基為RPMI-1640基礎培養基。 作為優選，血清為自體血清。 在本專利技術提供的一些實施例中，人工抗原遞呈細胞為4-1B化-mIkl5-K562細胞， 其制備方法為：將 4-1B化/PCR4T0P0 質粒插入GlySer-EGFP(CoOp)-pSBSO睡美人表達載體的Mie 1-化〇I位點，構建4-lBMVpSBSO轉座子； 將4-lBMVpSBS0轉座子與轉座酶SBll共轉染K562細胞，獲得4-1B化-K562細 胞；將比-15-Fc(CoOp)-pSBSO與轉座酶SBll共轉染4-1B化-K562細胞，經放射線照 射，獲得4-1B化-m比-15-K562細胞。 本專利技術還提供了一種NK細胞的培養方法，包括如下步驟： 將PBMC與人工抗原遞呈細胞混合，采用基礎培養基重懸，加入比-2、比-15、田屯 皂巧和血清，進行細胞培養，每隔3天補液一次，培養至第5~7天時加入人工抗原遞呈細 胞，培養12~16天獲得NK細胞。 作為優選，方法中各組分用量為： 人X抗原遞呈細胞（0.1~l)xl()6個/mL IL-2 200'、500U/mL IL15 20~lOOU/mL 田七皂普 10~SOmgZmL 血清 10%體積分數 基礎培養基余量:。 在本專利技術提供的一些實施例中，組合物中人工抗原遞呈細胞的用量為（0.5~ 0. 75)X1〇6個 /mL。 在本專利技術提供的一些實施例中，組合物中各組分用量為： 人工抗原遞呈細胞 0.5M〇(，個ZmL 1L-2 200lJ/mL 山-15 20U/inL 田走章導 lOmg/mL 血綠 10%體積分I免 基礎培養基余量。 在本專利技術提供的另一些實施例中，組合物中各組分用量為： 人工抗原遞呈細胞0.75x1妒個/mL IL2 SOOUZmL ILl 5 i OOUZmL 田七皂普SOmgZmL 血清 10%體積分數 基礎培養基 余量。 在本專利技術提供的另一些實施例中，組合物中各組分用量為： 人X抗原遞呈細胞化67 X106個Zm L 山-2 300U/rnL IL15 SOU/inL 田七皂每' SOmgZiTiL 血清 10%體積分數 基礎培養基 余量。 作為優選，基礎培養基為RPMI-1640基礎培養基。 作為優選，血清為自體血清。 在本專利技術提供的一些實施例中，人工抗原遞呈細胞為4-1B化-mIkl5-K562細胞， 其制備方法為：將 4-1B化/PCR4T0P0 質粒插入GlySer-EGFP(CoOp)-pSBSO睡美人表達載體的Mie 1-化〇I位點，構建4-lBMVpSBSO轉座子； 將4-lBMVpSBSO轉座子與轉座酶SBll共轉染K562細胞，獲得4-1B化-K562細 胞； 將比-15-Fc(CoOp) -pSBSO與轉座酶SBll共轉染4-1B化-K562細胞，經放射線照 射，獲得4-1B化-m比-15-K562細胞。 在本專利技術提供的一些實施例中，細胞培養的條件為37°C、濃度為5%的C〇2。[004引作為優選，PBMC的接種密度為（0. 1~1)XIO6個/血。[004引 優選地，PBMC的接種密度為化25~0.WXIO6個/血。 作為優選，補液為：補加基礎培養基、比-2、IL-15、田屯皂巧，IL-2終濃度為200~ 500U/mU比-15終濃度為20~lOOU/mU田屯皂巧終濃度為10~50mg/mU補液后細胞密 度在（0. 5 ~1. 0)X1〇6個 /mL。 在本專利技術提供的一些實施例中，細胞培養的天數為14天。 本專利技術提供了一種NK細胞培養組合物及其培養方法。該組合物本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種NK細胞培養組合物，其特征在于，包括人工抗原遞呈細胞、IL?2、IL?15、田七皂苷、血清和基礎培養基。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳海佳，王一飛，葛嘯虎，李麗娟，王小燕，
申請(專利權)人：廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44
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