本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了一種魚(yú)膠原蛋白短肽復(fù)合物的制備方法，對(duì)魚(yú)皮采用檸檬酸在80～100℃高溫處理獲得膠原蛋白，然后使用堿性蛋白酶和菠蘿蛋白酶對(duì)膠原蛋白進(jìn)行水解，再用酵母對(duì)水解后的膠原蛋白肽進(jìn)行發(fā)酵處理，得到魚(yú)膠原蛋白短肽復(fù)合物。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)方法采用酸法浸提和熱水浸提相結(jié)合的提取方法，從魚(yú)皮中獲得膠原蛋白，然后對(duì)膠原蛋白進(jìn)行食品工業(yè)用蛋白酶、果蔬汁蛋白酶酶解后，再經(jīng)微生物發(fā)酵獲得膠原蛋白肽，制得了易于消化吸收且具有較佳口感和風(fēng)味的膠原蛋白短肽復(fù)合物。本方法工藝簡(jiǎn)單，易于操作，并且具有膠原蛋白提取率高的特點(diǎn)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于生物提取
，涉及。
技術(shù)介紹
科學(xué)證實(shí)，天然蛋白質(zhì)經(jīng)水解后所產(chǎn)生的多肽具有免疫調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、降血壓、 降血脂、抗疲勞、抗氧化等生理調(diào)節(jié)功能，是當(dāng)前醫(yī)學(xué)、食品界熱衷研究的課題和極具發(fā)展 前景的功能因子。膠原蛋白作為動(dòng)物結(jié)締組織中的主要成分，是動(dòng)物體內(nèi)含量最多、分布最 廣的一類(lèi)天然蛋白質(zhì)，可以作為制備膠原蛋白肽的主要來(lái)源之一。 近些年來(lái)，伴隨著口蹄疫、瘋牛病等傳染性疾病的爆發(fā)，陸生動(dòng)物源膠原蛋白的使 用受到了越來(lái)越多的質(zhì)疑。隨后以水產(chǎn)魚(yú)類(lèi)加工副產(chǎn)物中提取的膠原蛋白作為可食用膠原 蛋白肽的原料，不僅消除了陸生動(dòng)物源膠原蛋白帶來(lái)的安全隱患，而且提高了魚(yú)類(lèi)加工副 產(chǎn)物的附加值，促進(jìn)了水產(chǎn)魚(yú)類(lèi)加工副產(chǎn)物的綜合利用步伐。 采用生物酶法水解動(dòng)植物蛋白質(zhì)，是目前制備蛋白短肽的主要方法。而經(jīng)過(guò)對(duì)關(guān) 于膠原蛋白肽提取工藝的大量文獻(xiàn)進(jìn)行具體分析后，我們發(fā)現(xiàn)按照一般方法提取的魚(yú)皮膠 原蛋白肽具有一定的腥味及苦味，且膠原蛋白肽的復(fù)合提取工藝的研究還較缺乏，尤其是 利用果蔬汁中植物酶酶解膠原蛋白肽，再經(jīng)微生物發(fā)酵的復(fù)合處理方法尚未報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)的目的是提供，用以制備易于消化 吸收、具有較佳口感和風(fēng)味的膠原蛋白短肽復(fù)合物。 本專(zhuān)利技術(shù)所采用的技術(shù)方案是，，對(duì)魚(yú)皮采 用檸檬酸在80~KKTC高溫處理獲得膠原蛋白，然后使用堿性蛋白酶和菠蘿蛋白酶對(duì)膠原 蛋白進(jìn)行水解，再用酵母對(duì)水解后的膠原蛋白肽進(jìn)行發(fā)酵處理，得到魚(yú)膠原蛋白短肽復(fù)合 物。 本專(zhuān)利技術(shù)特點(diǎn)還在于， -種魚(yú)膠原蛋白短肽復(fù)合物的制備方法，具體按以下步驟實(shí)施： 步驟1，魚(yú)皮預(yù)處理： 取魚(yú)皮去鱗并清洗干凈，用0. 8~1. 2mol/L的HC1溶液浸泡，然后用清水沖洗酸 浸泡后的魚(yú)皮；將魚(yú)皮剪碎，置于〇. 1~〇. 15mol/L的NaOH溶液中浸泡，并進(jìn)行攪拌； 步驟2，制備膠原蛋白溶液： 將步驟1預(yù)處理的魚(yú)皮用蒸餾水浸泡，然后用質(zhì)量濃度為0. 5~2%的檸檬酸溶液 常溫浸泡至魚(yú)皮軟化；用蒸餾水沖洗檸檬酸處理的魚(yú)皮至pH為6~7,再加入蒸餾水，控制 溫度進(jìn)行水浴提取；最后通過(guò)抽濾除去不溶物，獲得魚(yú)皮膠原蛋白溶液； 步驟3，堿性蛋白酶酶解： 調(diào)節(jié)步驟2中獲得的膠原蛋白溶液的pH值為8~9,添加堿性蛋白酶，置于搖床 中酶解；然后熱處理滅酶活，并離心，收集上清液，得到單一堿性蛋白酶酶解的膠原蛋白溶 液； 步驟4,菠蘿汁蛋白酶酶解： 在步驟3得到的膠原蛋白溶液中加入鮮菠蘿汁，混勻，調(diào)節(jié)pH為6~7,放于搖床 中酶解；然后熱處理滅酶活操作，并離心，收集上清液，得到堿性蛋白酶和菠蘿汁蛋白酶復(fù) 合水解的膠原蛋白溶液； 步驟5,酵母發(fā)酵： 5. 1 :將步驟4得到的膠原蛋白溶液滅菌；同時(shí)將酵母菌復(fù)水活化，得到酵母溶 液； 5. 2 :將酵母溶液加入滅菌的膠原蛋白溶液中接種發(fā)酵，然后將發(fā)酵液離心，收集 上清液并冷凍干燥，即得到白色粉末狀的魚(yú)膠原蛋白短肽復(fù)合物。 步驟1中魚(yú)皮與HC1溶液浸泡的料液比為1 :8~10g/ml，浸泡時(shí)間為20~26小 時(shí)；魚(yú)皮與NaOH溶液浸泡的料液比為1 :10~20g/ml，浸泡時(shí)間為12~48小時(shí)。 步驟2中預(yù)處理的魚(yú)皮在洗凈堿液時(shí)，蒸餾水中的浸泡時(shí)間為1~2小時(shí)；魚(yú)皮與 檸檬酸溶液浸泡的料液比為1 :10~15g/ml ;水浴提取過(guò)程中魚(yú)皮與蒸餾水的料液比為1 : 6~10g/ml，水浴提取溫度為80~100°C，提取時(shí)間2~5小時(shí)。 步驟3中堿性蛋白酶加入量為步驟2中獲得的膠原蛋白溶液體積的0. 56 %，堿性 蛋白酶是由諾維信中國(guó)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的市售商品化堿性蛋白酶。步驟3中酶解過(guò)程參數(shù)為：酶解時(shí)間4~6小時(shí)，酶解溫度為60~65 °C，搖床轉(zhuǎn) 速為100~140r/min;熱處理溫度為90~100°C，滅酶活時(shí)間為10~15min;離心轉(zhuǎn)速為 4000 ~6000r/min，離心時(shí)間為 10 ~15min。 步驟4中菠蘿汁與步驟3得到膠原蛋白溶液體積比為0. 5~1. 5 :1。步驟4中酶解過(guò)程參數(shù)為：酶解時(shí)間2~3小時(shí)，酶解溫度為60~65 °C，搖床轉(zhuǎn) 速為100~140r/min;熱處理溫度為90~100°C，滅酶活時(shí)間為10~15min;離心轉(zhuǎn)速為 4000 ~6000r/min，離心時(shí)間為 10 ~15min。 步驟5. 1中膠原蛋白溶液滅菌，具體為：將裝有膠原蛋白溶液的容器用牛皮紙包 好后放入高壓蒸汽滅菌鍋中，121~125°C高溫滅菌30~40分鐘，冷卻至35~37°C;酵母 菌復(fù)水活化，具體為：按質(zhì)量體積比為1 :1〇~15g/ml將干酵母加入到含糖5~8%的糖水 中，溫度控制在35~38°C，攪拌溶解，15-30分鐘后冷卻至28-35°C，得到酵母溶液。步驟5. 2中酵母溶液用量為膠原蛋白溶液體積的0.05~0.3 %，菌數(shù)達(dá) 5 X 106cfu/g，發(fā)酵溫度35~37°C，發(fā)酵時(shí)間25~35小時(shí)；離心轉(zhuǎn)速為4000~5000r/min， 離心時(shí)間為10~15min;冷凍干燥時(shí)間為2天。 本專(zhuān)利技術(shù)的有益效果是，本專(zhuān)利技術(shù)方法采用酸法浸提和熱水浸提相結(jié)合的提取方法， 從魚(yú)皮中獲得膠原蛋白，然后對(duì)膠原蛋白進(jìn)行食品工業(yè)用蛋白酶、果蔬汁蛋白酶酶解后，再 經(jīng)微生物發(fā)酵獲得膠原蛋白肽，制得了易于消化吸收且具有較佳口感和風(fēng)味的膠原蛋白短 肽。本方法工藝簡(jiǎn)單，易于操作，并且具有膠原蛋白提取率高的特點(diǎn)。【附圖說(shuō)明】 圖1是本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例1制得的樣品1的分子量分布圖；圖2是本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例1制得的樣品2的分子量分布圖； 圖3是本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例1制得的樣品3的分子量分布圖。【具體實(shí)施方式】 下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。 本專(zhuān)利技術(shù)提供了，采用檸檬酸和90°C高溫處 理從魚(yú)皮中獲得膠原蛋白，然后使用堿性蛋白酶和菠蘿蛋白酶對(duì)膠原蛋白進(jìn)行水解，再用 高活性干酵母對(duì)水解后的膠原蛋白肽進(jìn)行發(fā)酵處理，進(jìn)而制備出提取率高、易于消化吸收 且具有較佳口感和風(fēng)味的膠原蛋白短肽。具體按以下步驟實(shí)施： 步驟1，魚(yú)皮預(yù)處理： 取適量魚(yú)皮去鱗并清洗干凈，用0. 8~1. 2mol/L的HC1溶液浸泡20~26小時(shí)， 控制料液比1 :8~10g/ml，再用清水沖洗酸浸泡后的魚(yú)皮，去除魚(yú)皮表面色素。將魚(yú)皮剪碎 成1. 5X 1. 5cm左右大小的方塊狀，置于0. 1~0. 15mol/L的NaOH溶液中浸泡12~48小 時(shí)，控制料液比為1 :1〇~20g/ml，并同時(shí)用磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，除去雜蛋白和脂肪。步驟2，制備膠原蛋白溶液： 將預(yù)處理的魚(yú)皮用適量蒸餾水浸泡1~2小時(shí)，以便洗凈殘留的堿液。然后用質(zhì) 量濃度為〇. 5~2%的檸檬酸溶液常溫浸泡至魚(yú)皮軟化，使得膠質(zhì)膨脹，利于提膠，控制料 液比為1:10~15g/ml。用蒸餾水沖洗檸檬酸處理的魚(yú)皮至pH為6~7,再加入蒸餾水，料 液比為1 :6~10g/ml，于80~100°C溫度下水浴提取2~5小時(shí)后，通過(guò)抽濾除去不溶物， 獲得魚(yú)皮膠原蛋白溶液（含較多明膠）。低溫存儲(chǔ)備用。步驟3，堿性蛋白酶酶解：用1N的NaOH溶液，將步驟2中獲得的膠原蛋白溶液的pH調(diào)節(jié)到8~9，添加膠原 蛋白溶液體積〇. 56 %的堿性蛋白酶，置于搖床中酶解4~6小時(shí)，酶解溫度為60~65°C，搖 床轉(zhuǎn)速為本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種魚(yú)膠原蛋白短肽復(fù)合物的制備方法，其特征在于，對(duì)魚(yú)皮采用檸檬酸在80～100℃高溫處理獲得膠原蛋白，然后使用堿性蛋白酶和菠蘿蛋白酶對(duì)膠原蛋白進(jìn)行水解，再用酵母對(duì)水解后的膠原蛋白肽進(jìn)行發(fā)酵處理，得到魚(yú)膠原蛋白短肽復(fù)合物。
【技術(shù)特征摘要】
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：申鉉日，劉陽(yáng)峰，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：海南大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：海南;66
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