一株海洋石油降解菌、發(fā)酵所得化合物及其用途制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一株海洋石油降解菌、發(fā)酵所得化合物及其用途。命名為Alcanivorax?dieselolei?T6-6，保藏編號(hào)為：CGMCC?NO：9033。γ-變形菌綱，海洋螺菌目，烷烴降解菌科，食烷菌屬，柴油食烷菌種；該菌可用于石油烴的降解與清除，環(huán)境污染的治理，生產(chǎn)表面活性劑，降低水的表面張力等多種用途；該菌發(fā)酵后的次生代謝產(chǎn)物中分離得到一類化合物，其中一種為：dieseloleiT6-6，2-氨基-6-(N-2-羰基-4-十三烷基-環(huán)丁烷)己酸，為一種賴氨酸脂。該化合物對(duì)不同有機(jī)物有乳化活性，對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌及真菌有抗菌抑菌作用，有較好的細(xì)胞毒活性。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一株海洋石油降解菌、發(fā)酵所得化合物及其用途
本專利技術(shù)涉及微生物領(lǐng)域，尤其涉及一株海洋石油降解菌、發(fā)酵所得化合物及其用途。
技術(shù)介紹
海洋微生物(marinemicroorganism)是海洋中個(gè)體微小，構(gòu)造簡(jiǎn)單的低等生物的總稱。包括細(xì)菌、真菌、放線菌、霉菌、酵母、病毒、衣原體、支原體、噬菌體和微型藻及微型原生動(dòng)物等。90年代以前，關(guān)于海洋微生物次生代謝產(chǎn)物的化學(xué)研究報(bào)道很少，人們研究熱點(diǎn)一直是陸生真菌資源；到了90年代以后，關(guān)于海洋微生物次生代謝產(chǎn)物的化學(xué)研究的報(bào)道顯著增多；其中1998年和2000年發(fā)現(xiàn)的新化合物數(shù)目最多，海洋微生物來源的新化合物數(shù)目也在增加，許多化合物具有新的骨架，證明了海洋微生物具有獨(dú)特的代謝和生理機(jī)制，是潛在的新化合物及藥物先導(dǎo)化合物的豐富資源庫(kù)。食烷菌(Alcanivorax)是海洋石油污染環(huán)境中重要的烷烴降解菌。目前在世界范圍內(nèi)從表層海水到深海沉積物中均分離或檢測(cè)到了該屬細(xì)菌的存在。該屬目前已報(bào)道有6個(gè)種，第一個(gè)種AlcanivoraxborkumensisSK2是1998年由Yakimov等人分離獲得的,產(chǎn)一種糖脂類表面活性劑,葡萄糖脂(一個(gè)葡萄糖殘基連著四個(gè)3-OH脂肪酸)；從黃海表層海水分離的柴油食烷菌AlcanivoraxdieseloleiB-5，在以十六烷為唯一碳源的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中均能將發(fā)酵液表面張力降低到30mN/m以下，經(jīng)鑒定為脯氨酸酯(十六烷酸與脯氨酸脫水縮合形成的線性脂肽)。生物表面活性劑一般是由微生物(尤其是一些細(xì)菌和真菌)在一定培養(yǎng)條件下產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，通常為糖脂、磷脂、多糖脂復(fù)合物、脂蛋白-脂多肽、羥基化合物和交聯(lián)脂肪酸等。生物表面活性劑的非極性疏水基團(tuán)一般是長(zhǎng)鏈脂肪酸或是β-羥基脂肪酸、α-烷基-β-羥基脂肪酸；而極性的親水集團(tuán)則有多種形式如糖類、氨基酸類、環(huán)狀肽類、磷酸鹽、醇等，它們一般都具有良好的降低表面張力和界面張力的性能。生物表面活性劑具有一些一般化學(xué)合成表面活性劑所沒有的獨(dú)特性能：一般具有較低的臨界膠束濃度，用量少、高效；具有生物降解性，無毒，對(duì)環(huán)境友好；可應(yīng)用于環(huán)保、化妝品、藥物、食品添加劑；因其化合物性質(zhì)穩(wěn)定，故可應(yīng)用于一些極端環(huán)境如高溫、高鹽、高pH值等；生物表面活性劑可分為糖脂、脂肽、脂蛋白、磷脂、脂肪酸、聚合物表面活性劑、粒狀物表面活性劑。脂肽類生物表面活性劑的親水基團(tuán)由短肽或氨基酸組成，疏水基團(tuán)由脂肪酸組成，一種脂肽往往是多種異構(gòu)單體組成的混合體。由于脂肽中的脂肪酸鏈長(zhǎng)和支鏈數(shù)量以及氨基酸的組成具有多變性，致使脂肽表面活性劑的種類繁多。具有代表性的脂肽有surfactin,lichenysin,fengycin,iturin,mycosubtilin及bacillomycin等。目前發(fā)現(xiàn)的脂肽主要來自Bacillus屬，如B.subitilis、B.circulans、B.cereus、B.polymyxa、B.mesentericus等。除了Bacillus產(chǎn)生脂肽外，其他一些種類的微生物也產(chǎn)脂肽。例如Mycobacteriumfortuirum、Streptomycescanus、Pseudomonasfluorescens、Serratiamarcescens等。表1幾種重要的微生物表面活性劑的來源和性質(zhì)表脂肽微生物表面張力(mN/m)CMC界面張力(mN/m)Peptide-lipidB.licheniformis2712–200.1-0.3SerrawettinS.marcescens28–33//ViscosinP.fluorescens26.5150/SurfactinB.subtilis27–3223-1601
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一株海洋石油降解菌菌株AlcanivoraxdieseloleiT6-6，為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供一株海洋石油降解菌AlcanivoraxdieseloleiT6-6，保藏編號(hào)為：CGMCCNO：9033。所述海洋石油降解菌AlcanivoraxdieseloleiT6-6的制備方法，其步驟為：取第20航次西南印度洋深海海水于三角瓶中,121℃,20min，加入預(yù)先高溫高壓滅菌的4.2g/dm3的原油和柴油混合物，按質(zhì)量比1:1混合，優(yōu)選加入量為50cm3深海海水中加入0.21g原油和柴油混合物；然后加入預(yù)先高溫高壓滅菌的終濃度為1g/dm3的NH4NO3，pH＝7.5,終濃度為1g/dm3的KH2PO4溶液和0.22μm濾膜過濾除菌的終濃度為0.4μg/dm3FeSO4溶液；取50cm3深海水樣加入該三角瓶中,置于28℃,160r/min的搖床中避光培養(yǎng)；培養(yǎng)6d后,黑色油污狀消失,從中取2cm3轉(zhuǎn)接入相同的培養(yǎng)基中,共轉(zhuǎn)接5次后，最后把富集物進(jìn)行梯度稀釋，涂布于2216L平板上；固體平板添加1.5％瓊脂粉，分離單菌得到權(quán)利要求1的菌株。本專利技術(shù)還保護(hù)所述菌株的用途。所述菌株可用于石油烴的降解與清除，及其所述菌株用于石油烴的降解與清除的方法。所述菌株可用于環(huán)境污染的治理，及其所述菌株用于治理環(huán)境污染的方法。所述菌株可降低水的表面張力，及其所述菌株用于降低水表面張力的方法；任選的，所述菌株可用于生產(chǎn)生物表面活性劑，及其所述菌株用于生產(chǎn)表面活性劑的用途。所述菌株可用于革蘭氏陽性細(xì)菌及真菌的抗菌抑菌，及其所述菌株用于革蘭氏陽性細(xì)菌及真菌的抗菌抑菌的方法。所述菌株發(fā)酵可生產(chǎn)一類化合物，其特征在于，這類化合物的結(jié)構(gòu)式如下：當(dāng)n＝1時(shí)，分子式為C18H34N2O3，分子量為326，命名為2-氨基-6-(N-2-氧代-4-壬基-環(huán)丁烷)己酸；當(dāng)n＝2時(shí)，分子式為C20H38N2O3，分子量為354，命名為2-氨基-6-(N-2-氧代-4-十一烷基-環(huán)丁烷)己酸；當(dāng)n＝3時(shí)，分子式為C22H42N2O3，分子量為382，命名為2-氨基-6-(N-2-氧代-4-十三烷基-環(huán)丁烷)己酸，又叫賴氨酸脂dieseloleiT6-6；當(dāng)n＝4時(shí)，分子式為C24H46N2O3，分子量為410，命名為2-氨基-6-(N-2-氧代-4-十五烷基-環(huán)丁烷)己酸。所述的化合物賴氨酸脂dieseloleiT6-6，分子式為C22H42N2O3，是通過所述的菌株發(fā)酵制備得到，其結(jié)構(gòu)式為:所述的賴氨酸脂dieseloleiT6-6用于乳化有機(jī)物和革蘭氏陽性細(xì)菌及真菌的抗菌抑菌的用途；及其所述賴氨酸脂dieseloleiT6-6用于乳化有機(jī)物和革蘭氏陽性細(xì)菌及真菌的抗菌抑菌的方法。菌株AlcanivoraxdieseloleiT6-6和菌株AlcanivoraxdieseloleiB-5(AY683537)都具有烷烴降解能力和降低液體表面張力的能力。菌株A.dieseloleiB-5現(xiàn)已作為Alcanivorax屬dieselolei種的模式菌株被鑒定,其在中國(guó)海洋微生物菌種保藏管理中心(MarineCultureCollectionofChina；MCCC)的保藏編號(hào)為1A00001。此菌株有非常好的柴油和烷烴降解效果，在以正十六烷為唯一碳源的MSM培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好并能將發(fā)酵液的表面張力降至31mNm-1左右，是產(chǎn)生表面活性劑的菌株之一。方法步驟見文獻(xiàn)(LiuCandShaoZ.Alcanivorax本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一株海洋石油降解菌Alcanivorax?dieselolei?T6?6，保藏編號(hào)為：CGMCC?NO：9033。

【技術(shù)特征摘要】
1.一株海洋石油降解菌柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6，保藏編號(hào)為：CGMCCNO：9033。2.權(quán)利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于石油烴的降解與清除的用途。3.權(quán)利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于環(huán)境污染的治理的用途。4.權(quán)利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于降低水的表面張力的用途。5.權(quán)利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于生產(chǎn)生物表面活性劑的用途。6.權(quán)利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于制備革蘭氏陽性細(xì)菌及真菌的抗菌抑菌的藥物的用途。7.一種由權(quán)利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6發(fā)酵生產(chǎn)的一類化合物，其特征在于，這類化合物的...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：邵宗澤，史小滿，王萬鵬，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：國(guó)家海洋局第三海洋研究所，中國(guó)大洋礦產(chǎn)資源研究開發(fā)協(xié)會(huì)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：福建;35