一種炎癥誘導蛋白組分、其制備方法及產品技術

本發明專利技術公開了一種炎癥誘導蛋白組分、其制備方法及產品。所述炎癥蛋白組分為荔枝蛋白提取物，其制備方法如下：(1)將新鮮荔枝去皮、除核并榨碎制得勻漿，固液分離后保留上清液；(2)將步驟(1)中制得的上清液濃縮，透析48至96小時得到粗提物，截流量在8KD至14KD之間；(3)對步驟(2)中制得的粗提物進行冷凍干燥，并采用酚提法提取蛋白質，經丙酮洗滌后氮氣吹干，得到所述炎癥誘導蛋白組分。所述炎癥蛋白組分用于制備促炎制劑，其促炎效果明確且溫和，易于控制，成分天然無副作用，適合大量生產。

【技術實現步驟摘要】
一種炎癥誘導蛋白組分、其制備方法及產品
本專利技術屬于生物醫藥領域，更具體地，涉及一種炎癥誘導蛋白組分、其制備方法及產品。
技術介紹
促炎物質，是一類可介導多種免疫反應。近期研究發現，促炎可介導腫瘤細胞壞死，是有前景的抗腫瘤物質。目前市場上常用的促炎物質，脂多糖LPS促炎效果強烈，用量不易準確控制，副作用強烈。因此繼續開發新型的促炎物質，如炎癥誘導蛋白等。
技術實現思路
針對現有技術的以上缺陷或改進需求，本專利技術提供了一種炎癥誘導蛋白組分、其制備方法及產品，其目的在于提供一種促炎效果穩定可控副作用小的促炎蛋白，由此解決目前脂多糖促炎物質促炎效果強烈，用量不宜準確控制，副作用大的技術問題。為實現上述目的，按照本專利技術的一個方面，提供了一種炎癥蛋白組分為荔枝蛋白提取物，經鳥槍法質譜分析包括蛋白，檢測得到的肽段覆蓋率在10％以上的蛋白質包括：ADP核糖基化因子1(ADP-ribosylationfactor1)、3-磷酸甘油醛脫氫酶GAPC1(Glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPC1)、Actin-7、14-3-3樣蛋白GF14λ(14-3-3-likeproteinGF14lambda)、泛素-40S核糖體蛋白S27a-1(Ubiquitin-40SribosomalproteinS27a-1)、14-3-3樣蛋白GF14ω(14-3-3-likeproteinGF14omega)、14-3-3樣蛋白GF14υ(14-3-3-likeproteinGF14upsilon)、鈣調蛋白1(Calmodulin-1)、真核起始因子4A-1(Eukaryoticinitiationfactor4A-1)。按照本專利技術的另一方面，提供了一種所述炎癥誘導蛋白組分的制備方法，包括以下步驟：(1)將新鮮荔枝去皮、除核并榨碎制得勻漿，固液分離后保留上清液；(2)將步驟(1)中制得的上清液濃縮，透析48至96小時得到粗提物，截流量在8KD至14KD之間；(3)對步驟(2)中制得的粗提物進行冷凍干燥，并采用酚提法提取蛋白質，經丙酮洗滌后氮氣吹干，得到所述炎癥誘導蛋白組分。優選地，所述制備方法，其步驟(2)所述透析時間為72小時，截流量為8KDa。優選地，所述制備方法，其步驟(3)所述酚提法提取蛋白質的具體步驟為：(3-1)稱取粗提物冷凍干燥粉末加入預冷的酚提取緩沖液中制得混合液，添加量在5mg/mL至8mg/ml之間；(3-2)將步驟(3-1)中制得的混合液提純一次或多次，提純步驟為：加入等體積預冷的Tris飽和酚溶液，混合均勻后震蕩離心取上層酚相；(3-3)在步驟(3-2)中提取的酚相中加入提前預冷的0.05M至0.15M的乙酸銨的甲醇溶液，添加體積比在1:2至2:1之間，靜置使蛋白沉淀，并分離得到蛋白質沉淀。(3-4)將步驟(3-3)得到的蛋白質沉淀中，加入丙酮洗滌2次，氮氣吹干，得到所述炎癥誘導蛋白組分。優選地，所述制備方法，其步驟(3-1)所述的酚提取緩沖液為含有700mM蔗糖、100mM氯化鉀、500mM三羥甲基氨基甲烷以及63.7mMEDTA的水溶液，其pH＝7.5。按照本專利技術的另一個方面，提供了一種促炎制劑，其特征在于，包括所述炎癥誘導蛋白組分。總體而言，通過本專利技術所構思的以上技術方案與現有技術相比，由于從天然溫和成分中提取炎癥誘導蛋白組分，能夠取得下列有益效果：(1)本專利技術提供的炎癥誘導蛋白組分，促炎效果明確且溫和，用量容易控制，天然物質提取無副作用。(2)本專利技術提供的方法，原料易得，過程安全，適合大規模生產。附圖說明圖1是實施例4中LWP蛋白組分使得COX-2mRNA表達水平變化；圖2是實施例4中LWP蛋白組分使得iNOSmRNA表達水平變化；圖3是實施例4中LWP蛋白組分使得IL-1βmRNA表達水平變化；圖4是實施例4中LWP蛋白組分使得HO-1mRNA表達水平變化。具體實施方式為了使本專利技術的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本專利技術，并不用于限定本專利技術。此外，下面所描述的本專利技術各個實施方式中所涉及到的技術特征只要彼此之間未構成沖突就可以相互組合。本專利技術提供的炎癥誘導蛋白組分，為荔枝蛋白提取物，命名為LWP，經鳥槍法質譜分析蛋白質，檢測得到的肽段覆蓋率在10％以上的蛋白質包括：ADP核糖基化因子1、3-磷酸甘油醛脫氫酶GAPC1、Actin-7、14-3-3樣蛋白GF14λ、泛素-40S核糖體蛋白S27a-1、14-3-3樣蛋白GF14ω、14-3-3樣蛋白GF14υ、鈣調蛋白1、真核起始因子4A-1。所述炎癥誘導蛋白組分，其制備方法，包括以下步驟：(1)將新鮮荔枝去皮、除核并榨碎制得勻漿，固液分離后保留上清液。(2)將步驟(1)中制得的上清液濃縮，透析48至96小時得到粗提物，截流量在8KD至14KD之間；優選地，透析時間為72小時，截流量為8KDa。(3)對步驟(2)中制得的粗提物進行冷凍干燥，并采用酚提法提取蛋白質，經丙酮沉淀后氮氣吹干，得到所述炎癥誘導蛋白組分。酚提法提取蛋白質的具體步驟為：(3-1)稱取步驟(2)制得的粗提物冷凍干燥粉末加入預冷的酚提取緩沖液中制得混合液，添加量在5mg/mL至8mg/ml之間；(3-2)將步驟(3-1)中制得的混合液提純一次或多次，提純步驟為：加入等體積預冷的Tris飽和酚溶液，混合均勻后震蕩離心取上層酚相；(3-3)在步驟(3-2)中提取的酚相中加入提前預冷的0.05M至0.15M的乙酸銨的甲醇溶液，添加體積比在1:2至2:1之間，靜置使蛋白沉淀，并分離得到蛋白質沉淀。(3-4)將步驟(3-3)得到的蛋白質沉淀中，加入丙酮洗滌2次，氮氣吹干，得到所述炎癥誘導蛋白組分。本專利技術提供的炎癥誘導蛋白組分，具有促炎效果，可用于制備促炎制劑。所述促炎制劑，相對于現有的脂多糖LPS促炎制劑，效果溫和，容易控制，成分天然，無副作用。荔枝“上火”是一種慢性炎癥，具有溫和、持久的特點。因此，對其荔枝中上火物質的研究可能有助于新的比較溫和的促炎物質的發現，這對于醫學上慢性炎癥的研究也是很有意義的。本專利技術分離并純化了荔枝中能引起溫和炎癥的炎癥誘導蛋白，對其進行質譜鑒定，并測定了其促炎效果。進而開發了一種新型的促炎制劑，相對于現有的促炎制劑脂多糖LPS，其效果溫和而持久，容易控制用量，更適合作為促炎藥物或實驗用促炎試劑。以下為實施例：實施例1一種炎癥誘導蛋白組分，為荔枝蛋白提取物，命名為LWP，經鳥槍法質譜分析，其肽段分析結果如表1所示，搜索數據庫(uniprot_malvids_14968_20140504)得到的蛋白質分析結果，如表2所示，表2中詳細描述了檢測得到的肽段在每個蛋白中的覆蓋率。表1蛋白組分shotgun質譜分析結果肽段列表表2蛋白組分shotgun質譜分析結果蛋白質列表所述炎癥誘導蛋白組分，其制備方法，如下：(1)將新鮮的荔枝去皮、除核，分批裝入榨汁機中榨取得到勻漿，用4層紗布過濾，再對濾液進行低溫離心，取上清液。(2)將步驟(1)中制得的上清液冷凍干燥兩天濃縮，透析72小時得到粗提物，截流量8KD。(3)對步驟(2)中制得的粗本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種炎癥誘導蛋白組分，其特征在于，所述炎癥蛋白組分為荔枝蛋白提取物，經鳥槍法質譜分析蛋白，檢測得到的肽段覆蓋率在10％以上的蛋白質包括：ADP核糖基化因子1、3?磷酸甘油醛脫氫酶GAPC1、Actin?7、14?3?3樣蛋白GF14λ、泛素?40S核糖體蛋白S27a?1、14?3?3樣蛋白GF14ω、14?3?3樣蛋白GF14υ、鈣調蛋白1、以及真核起始因子4A?1。

【技術特征摘要】
1.一種炎癥誘導蛋白組分，其特征在于，所述炎癥蛋白組分為酚提法提取的荔枝蛋白提取物，經鳥槍法質譜分析蛋白，檢測得到的肽段覆蓋率在10％以上的蛋白質包括：ADP核糖基化因子1、3-磷酸甘油醛脫氫酶GAPC1、Actin-7、14-3-3樣蛋白GF14λ、泛素-40S核糖體蛋白S27a-1、14-3-3樣蛋白GF14ω、14-3-3樣蛋白GF14υ、鈣調蛋白1、以及真核起始因子4A-1；所述炎癥誘導蛋白組分中蛋白質的分子量在8KD以上。2.如權利要求1所述的炎癥誘導蛋白組分的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)將新鮮荔枝去皮、除核并榨碎制得勻漿，固液分離后保留上清液；(2)將步驟(1)中制得的上清液濃縮，透析48至96小時得到粗提物，截流量在8KD至14KD之間；(3)對步驟(2)中制得的粗提物進行冷凍干燥，并采用酚提法提取蛋白質，經丙酮洗滌后氮氣吹干，得到所述炎癥誘導蛋白組分。3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述透析時間為72小時，截...

【專利技術屬性】
技術研發人員：馬兆成，王小麗，鄧秀新，
申請(專利權)人：華中農業大學，
類型：發明
國別省市：湖北;42