一種厭氧微生物培養基復合去氧層。它涉及一種培養基去氧層。它解決了現有厭氧培養基無法完全去除氧，還原劑存在影響或危害厭氧微生物生長的風險，以及厭氧培養罐和厭氧培養箱結構復雜，購置和維持運行成本高，攜帶不方便等問題。氧微生物培養基復合去氧層由下而上依次為無菌硅膠塞、含有培養基成分的無菌瓊脂、還原劑和無菌瓊脂；且無菌硅膠塞上設置有豎直貫通的細孔。本發明專利技術厭氧微生物培養基復合去氧層制作簡單，設備要求低，成本低廉，方便攜帶和臨時制作，而且除氧效果好，特別適合在傳染病原監測、工業微生物初篩等領域應用。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種培養基去氧層。
技術介紹
厭氧微生物是一類生存于低氧或無氧環境條件下的微生物，在自然界廣泛分布。厭氧微生物的研宄由來已久，現如今在石油資源利用、新能源開發利用、新材料的研發、流行病防控、特殊傳染病的診斷、抗生素研制、特殊有機物質發酵等眾多領域都需要用到厭氧微生物。由于氧氣對于厭氧微生物的生長有害，培養厭氧微生物需要專門方法或設備，目前比較普遍采用的方法包括使用厭氧培養基、厭氧培養罐、厭氧培養箱等。厭氧培養基通過向培養基中加入還原劑的方法，部分去除培養基中的氧，以滿足厭氧微生物的生存需要，但由于無法完全去除氧，這種培養基僅適用于低氧狀態下的厭氧微生物生存；而且加入的還原性物質還存在影響或危害厭氧微生物生長的風險，限制了這種培養基的應用。厭氧培養罐和厭氧培養箱都是通過物理或化學的手段去除培養器材內部的氧，以實現對厭氧微生物的培養。雖然他們除氧效果好，但是這兩種設備都因結構復雜，購置和維持運行成本高，攜帶不方便等原因無法廣泛推廣使用。
技術實現思路
本專利技術是為了解決現有厭氧培養基無法完全去除氧，還原劑存在影響或危害厭氧微生物生長的風險，以及厭氧培養罐和厭氧培養箱結構復雜，購置和維持運行成本高，攜帶不方便等問題，而提供的一種厭氧微生物培養基復合去氧層。本專利技術厭氧微生物培養基復合去氧層由下而上依次為無菌硅膠塞、含有培養基成分的無菌瓊脂、還原劑和無菌瓊脂；且無菌硅膠塞上設置有豎直貫通的細孔。本專利技術厭氧微生物培養基復合去氧層中的無菌硅膠塞直徑應略大于培養容器內徑，便于固定。無菌硅膠塞位于厭氧微生物培養基液面或表面之上，可以與厭氧微生物培養基的液面或表面接觸。無菌硅膠塞具有支撐作用，固定厭氧微生物培養基復合去氧層位置；同時無菌硅膠塞還具有隔熱的作用，可以避免含有培養基成分的無菌瓊脂在形成過程中殺滅厭氧微生物。無菌硅膠塞具有豎直貫通的細孔，該細孔可以流通空氣但液體瓊脂無法通過，在固定無菌硅膠塞位置的同時，位于厭氧微生物培養基上方的空氣沿細孔排出，而不會被擠壓溶解到厭氧微生物培養基中，也不會增加培養容器內的壓強。本專利技術含有培養基成分的無菌瓊脂中的培養基成分應與厭氧微生物培養基成分相同；可以避免含有培養基成分的無菌瓊脂與厭氧微生物培養基(特別是液體培養基)接觸而改變或影響厭氧微生物培養基的濃度和成分。含有培養基成分的無菌瓊脂還是還原劑的支撐層。本專利技術厭氧微生物培養基復合去氧層中加入有還原劑，可以吸收培養容器中殘留的氧氣及培養過程中外界滲入的氧；而且還原劑不進入到厭氧微生物培養基中，不會影響或危害厭氧微生物的生長。本專利技術無菌瓊脂將還原劑與外界隔絕，避免還原劑的快速氧化，更有效的阻隔外界氧氣的滲入。本專利技術厭氧微生物培養基復合去氧層制作簡單，設備要求低，成本低廉，方便攜帶和臨時制作，而且除氧效果好，特別適合在傳染病原監測、工業微生物初篩等領域應用。【具體實施方式】本專利技術技術方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的任意組合。【具體實施方式】一:本實施方式厭氧微生物培養基復合去氧層由下而上依次為無菌硅膠塞、含有培養基成分的無菌瓊脂、還原劑和無菌瓊脂；且無菌硅膠塞上設置有豎直貫通的細孔。本實施方式無菌硅膠塞具有豎直貫通的細孔，該細孔孔徑可以流通空氣但液體瓊脂無法通過。【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一的不同點是:厭氧微生物培養基復合去氧層的含有培養基成分的無菌瓊脂和還原劑之間設置分子篩墊層或細菌濾膜。其它步驟及參數與實施方式一相同。本實施方式中分子篩墊層和細菌濾膜用于阻止還原劑進入含有培養基成分的無菌瓊脂，避免通過擴散作用還原劑進入厭氧微生物培養基。【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一或二的不同點是:厭氧微生物培養基復合去氧層在無菌瓊脂之上還包含N層還原劑和無菌瓊脂，還原劑與無菌瓊脂間隔設置，其中N為自然數。其它步驟及參數與實施方式一或二相同。多次重復設置，隔絕氧氣效果更好。【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一、二或三的不同點是:含有培養基成分的無菌瓊脂中瓊脂濃度為25g/L。其它步驟及參數與實施方式一、二或三相同。本實施方式中瓊脂濃度為25g/L制備出的含有培養基成分的無菌瓊脂以凝固硬度適中，并且在培養過程中又不會干燥、開裂。【具體實施方式】五:本實施方式與【具體實施方式】一至四之一的不同點是:無菌瓊脂中瓊脂濃度為25g/L。其它步驟及參數與實施方式一至四之一相同。本實施方式中瓊脂濃度為25g/L制備出的無菌瓊脂以凝固硬度適中，并且在培養過程中又不會干燥、開裂。【具體實施方式】六:本實施方式與【具體實施方式】一至五之一的不同點是:還原劑為硫化鈉。其它步驟及參數與實施方式一至五之一相同。實施例1制備、使用厭氧微生物培養基復合去氧層:1、將所需所有器材、培養基根據各自特征分別用高溫高壓蒸汽滅菌、過濾除菌等方法滅菌；2、將厭氧微生物培養基先分裝入培養容器內，再用高溫高壓蒸汽滅菌，此時培養容器可先用臨時棉塞或硅膠塞密封，以便于滅菌；3、在無菌條件下，按試驗設計，向滅菌后的厭氧微生物培養基中接種培養的厭氧微生物菌株，具體方法與常規接種方法相同；4、在無菌條件下，將無菌硅膠塞小心地用無菌接種棒塞入培養容器中，至于培養基液面相接觸，液面間的全部空氣排出；5、在無菌條件下，向培養容器內灌注含有培養基成分的無菌瓊脂，含有培養基成分的無菌瓊脂的營養成分與厭氧微生物培養基成分相同，待其冷卻凝固；6、在無菌條件下，在含有培養基成分的無菌瓊脂上放置分子篩墊層或細菌過濾膜，排空其與含有培養基成分的無菌瓊脂間的空氣；7、在無菌條件下，加入無菌的硫化鈉或其他還原劑；8、在無菌條件下，繼續灌注無菌瓊脂，待其冷卻凝固；即實現厭氧微生物培養基復合去氧層的制備。可重復上述第5?8步操作幾次，形成多層的無菌瓊脂-還原劑復合層。培養結束，在無菌條件下，小心逐層取出培養物上方各層，特別是小心取出還原劑，避免其殘留在培養容器內，然后取出菌硅膠塞，用無菌移液器吸取培養物。本實施例中含有培養基成分的無菌瓊脂和無菌瓊脂中瓊脂濃度為25g/L。采用本實施例方法進行空白接種試驗，同時在培養液中加入氧指示劑亞甲基藍，28°C培養48h后，氧指示劑呈陰性反應，說明成功建立了無氧環境。采用本實施例方法接種厭氧細菌產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)進行厭氧培養，同時用厭氧培養箱常規方法接種產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)進行培養，各接種15例，28°C恒溫箱培養48h，接種后初始細胞濃度均為1.0 X 103個/mL。本實施例方法培養出的產氣莢膜梭菌細胞濃度為(5.65±0.12) X 107個/mL，厭氧培養箱培養出的產氣莢膜梭菌細胞濃度為(5.70±0.13) X 107個/mL。兩種培養方法培養物中細胞濃度無顯著差異，說明采用本方法的培養效果與使用厭氧培養箱的培養效果基本相同，可以用于厭氧微生物的培養。【主權項】1.一種厭氧微生物培養基復合去氧層，其特征在于厭氧微生物培養基復合去氧層由下而上依次為無菌硅膠塞、含有培養基成分的無菌瓊脂、還原劑和無菌瓊脂；且無菌硅膠塞上設置有豎直貫通的細孔。2.根據權利要求1所述的一種厭氧微生物本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種厭氧微生物培養基復合去氧層，其特征在于厭氧微生物培養基復合去氧層由下而上依次為無菌硅膠塞、含有培養基成分的無菌瓊脂、還原劑和無菌瓊脂；且無菌硅膠塞上設置有豎直貫通的細孔。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙丹，高冬妮，范曉旭，宋剛，凌宏志，
申請(專利權)人：黑龍江大學，
類型：發明
國別省市：黑龍江;23
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