一種猴頭菌菌絲體中總猴頭菌素的高效提取方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種猴頭菌菌絲體中總猴頭菌素的高效提取方法：猴頭菌菌絲體烘干、粉碎后用纖維素酶酶解、然后酸水浸泡，最后用乙醇回流提取，制備猴頭菌菌絲體總猴頭菌素提取物。本發(fā)明專利技術(shù)采用纖維素酶解和酸水浸提結(jié)合處理的回流提取方法，具有消耗溶劑少、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明專利技術(shù)優(yōu)化了提取工藝，使提取得到的猴頭菌菌絲體總猴頭菌素提取物中總猴頭菌素的提取率顯著提高。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種猴頭菌菌絲體中總猴頭菌素的提取方法
本專利技術(shù)屬于食品工業(yè)領(lǐng)域，特別涉及一種纖維素酶解和酸水浸泡相結(jié)合處理后回流提取總猴頭菌素的復(fù)合提取方法。
技術(shù)介紹
猴頭菌菌絲體粉末中的猴頭菌素是一類萜苷類物質(zhì)，這些化合物顯示出對(duì)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)的強(qiáng)有力的刺激性合成作用，活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于腎上腺素。可刺激NGF合成的猴頭菌素已經(jīng)有望成為神經(jīng)元的退行性疾病如阿爾茨海默病和外周神經(jīng)再生的藥物。猴頭菌素通常為白色晶體，為親脂性成分，易溶于親脂性有機(jī)溶劑，可溶于醇，難溶于水。猴頭菌素都有一個(gè)cyathane骨架(如式I所示),是有一定角度的5-6-7三個(gè)圓環(huán)組成，被稱作鳥巢烷基二萜，另外加上一個(gè)木糖苷結(jié)構(gòu)組成了具有活性的猴頭菌素,并且木糖苷在猴頭菌素的生物活性方面起著很重要的作用。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)猴頭菌素提取的研究較少，尚處于起步階段。猴頭菌素的常規(guī)提取方法主要有浸漬法、回流法、微波輔助萃取、超聲波提取法、超臨界流體萃取法等方法。傳統(tǒng)的方法溶劑消耗量大，操作復(fù)雜，提取效率很低。提取技術(shù)的復(fù)合使提取效率有所提高，且保持了猴頭菌素的品質(zhì)和活性，對(duì)于猴頭菌素的綜合利用具有很重要的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)所要解決的問(wèn)題是傳統(tǒng)溶劑提取法提取效率低的問(wèn)題，采用一種纖維素酶解和酸水浸泡相結(jié)合處理后回流提取總猴頭菌素的復(fù)合提取方法，并采用野黃芩苷為定量標(biāo)準(zhǔn)品，提高提取效率，有效降低成本。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：一種猴頭菌菌絲體中總猴頭菌素的提取方法，所述方法為猴頭菌菌絲體烘干后粉碎過(guò)60目篩，得猴頭菌菌絲體粉末；猴頭菌菌絲體粉末中加入水，所述水的體積用量以猴頭菌菌絲體粉末的質(zhì)量計(jì)為10mL/g，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4.5，加入纖維素酶，置于50℃下恒溫水浴酶解90min，所述纖維素酶的質(zhì)量用量為猴頭菌菌絲體粉末質(zhì)量1/100，酶解結(jié)束后煮沸10～30分鐘使纖維素酶失活；所得酶解液中加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，浸泡24h，蒸除溶劑，剩余固體加入提取溶劑，超聲混合后，加熱回流提取，所述提取溶劑為體積分?jǐn)?shù)60～95％的乙醇，提取時(shí)間10～60min、所述提取溶劑的體積用量以猴頭菌菌絲體粉末的質(zhì)量計(jì)為5～20mL/g；所得提取液過(guò)濾兩次，所得濾液A揮干成浸膏，用水溶解，加活性炭脫色后過(guò)濾，所得濾液B用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯層減壓濃縮、濃縮液冷卻后靜置結(jié)晶，結(jié)晶體干燥，即制得猴頭菌菌絲體總猴頭菌素提取物。所述提取溶劑優(yōu)選體積分?jǐn)?shù)95％的乙醇。所述提取溶劑的體積用量以猴頭菌菌絲體粉末的質(zhì)量?jī)?yōu)選計(jì)為10mL/g。所述提取時(shí)間優(yōu)選20～40min。本專利技術(shù)的有益效果是：采用纖維素酶解和酸水浸提結(jié)合處理的回流提取方法，具有消耗溶劑少、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)。本專利技術(shù)優(yōu)化了提取工藝，使提取得到的猴頭菌菌絲體總猴頭菌素提取物中總猴頭菌素的提取率顯著提高，提取得到的總猴頭菌素相對(duì)于原料猴頭菌菌絲體的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為可達(dá)3.7％以上。附圖說(shuō)明圖1為本專利技術(shù)猴頭菌菌絲體中總猴頭菌素的提取工藝流程圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)進(jìn)一步描述，但本專利技術(shù)的保護(hù)范圍并不僅限于此：本專利技術(shù)采用野黃芩苷為定量標(biāo)準(zhǔn)品，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程按以下步驟進(jìn)行：準(zhǔn)確稱取野黃芩苷0.2g溶于無(wú)水乙醇得到0.8mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別移取0.4,0.8,1.2,1.6,2.0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液定容到到50mL容量瓶中，配制得到濃度分別為6.4μg/mL、12.8μg/mL、19.2μg/mL、32μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別在210nm處測(cè)定紫外吸光值，以標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，紫外吸光值為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，繪制回歸方程。比較例1回流提取猴頭菌菌絲體烘干后粉碎過(guò)篩，得60目的猴頭菌菌絲體粉末。取200g猴頭菌菌絲體粉末，轉(zhuǎn)移到圓底燒瓶中，再往圓底燒瓶中加入2L95v％的工業(yè)酒精，超聲10分鐘，使猴頭菌菌絲體粉末與溶劑充分混合。然后加熱回流提取，提取時(shí)間40min，所得提取液A過(guò)濾兩次，將獲得的濾液用95v％工業(yè)酒精定容到2L，所得提取液B用旋轉(zhuǎn)儀蒸干成浸膏，然后用純凈水溶解，加活性炭脫色后過(guò)濾，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取液、薄層色譜鑒定，顯色劑為香草醛硫酸乙醇溶液，定性確實(shí)存在萜類物質(zhì)。取乙酸乙酯層減壓濃縮、干燥，制得所述猴頭菌菌絲體總猴頭菌素提取物15.3g，其中含總猴頭菌素4.976g。總猴頭菌素的含量按以下方法測(cè)定：提取液B中取2mL定容到250mL容量瓶中，所得樣液進(jìn)行紫外全掃描，其出現(xiàn)的最大吸收峰出現(xiàn)在210nm處，用紫外分光光度儀在210nm下測(cè)吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品得到的回歸方程計(jì)算得到樣液中總猴頭菌素的濃度，然后換算得到提取液B中總猴頭菌素的濃度，進(jìn)一步計(jì)算得到提取得到的總猴頭菌素的質(zhì)量為4.976g，提取得到的總猴頭菌素相對(duì)于原料猴頭菌菌絲體的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.488％。比較例2纖維素酶解+回流提取猴頭菌菌絲體烘干后粉碎過(guò)篩，得60目的猴頭菌菌絲體粉末。取200g猴頭菌菌絲體粉末，加入2L水，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至4.5，加入2g纖維素酶，密封置于50℃下恒溫水浴酶解90min，然后取出煮沸10分鐘滅酶活。轉(zhuǎn)移到圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)完水分，再往圓底燒瓶中加入2L95v％的工業(yè)酒精，超聲10分鐘，使猴頭菌菌絲體粉末與溶劑充分混合。回流提取，提取時(shí)間40min，所得提取液A過(guò)濾兩次，將獲得的濾液用95％工業(yè)酒精定容到2L，得提取液B，取2mL按照實(shí)施例1的方法檢測(cè)總猴頭菌素的含量，計(jì)算得到提取得到的總猴頭菌素的質(zhì)量為5.876g，提取得到的總猴頭菌素相對(duì)于原料猴頭菌菌絲體的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.938％。將提取液B用旋轉(zhuǎn)儀蒸干成浸膏，然后用純凈水溶解，活性炭脫色后過(guò)濾，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取液薄層色譜鑒定，顯色劑為香草醛硫酸乙醇溶液，定性確實(shí)存在萜類物質(zhì)。取乙酸乙酯層減壓濃縮、干燥，制得所述猴頭菌菌絲體總猴頭菌素提取物16.0g，其中含總猴頭菌素5.876g。比較例3酸水浸泡+回流提取猴頭菌菌絲體烘干后粉碎過(guò)篩，得60目的猴頭菌菌絲體粉末。取200g猴頭菌菌絲體粉末加入2L水，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2，密封靜置24h。轉(zhuǎn)移到圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)完水分，再往圓底燒瓶中加入2L95v％的工業(yè)酒精，超聲10分鐘，使猴頭菌菌絲體粉末與溶劑充分混合。回流提取，提取時(shí)間40min，所得提取液A過(guò)濾兩次，將獲得的濾液用95％工業(yè)酒精定容到2L，得提取液B，取2mL按照實(shí)施例1的方法檢測(cè)總猴頭菌素的含量，計(jì)算得到提取得到的總猴頭菌素的質(zhì)量為6.87g，提取得到的總猴頭菌素相對(duì)于原料猴頭菌菌絲體的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.435％。將提取液B用旋轉(zhuǎn)儀蒸干成浸膏，然后用純凈水溶解，活性炭脫色后過(guò)濾，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取液薄層色譜鑒定，顯色劑為香草醛硫酸乙醇溶液，定性確實(shí)存在萜類物質(zhì)。取乙酸乙酯層減壓濃縮、干燥，制得所述猴頭菌菌絲體總猴頭菌素提取物15.7g，其中含總猴頭菌素6.87g。實(shí)施例1猴頭菌菌絲體烘干后粉碎過(guò)篩，得60目的猴頭菌菌絲體粉末。取200g猴頭菌菌絲體粉末加入2L水，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至4.5，加入2g纖維素酶，密封置于50℃下恒溫水浴酶解90min，然后取出煮沸10分鐘滅酶活。用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2，密封靜置24h。轉(zhuǎn)移到圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)完水分，再往圓底燒瓶中加入2L95v％的工本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種猴頭菌菌絲體中總猴頭菌素的高效提取方法，其特征在于所述方法為：猴頭菌菌絲體烘干后粉碎過(guò)60目篩，得猴頭菌菌絲體粉末；猴頭菌菌絲體粉末中加入水，所述水的體積用量以猴頭菌菌絲體粉末的質(zhì)量計(jì)為10mL/g，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4.5，加入纖維素酶，置于50℃下恒溫水浴酶解90min，所述纖維素酶的質(zhì)量用量為猴頭菌菌絲體粉末質(zhì)量1/100，酶解結(jié)束后煮沸10～30分鐘使纖維素酶失活；所得酶解液中加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，浸泡24h，蒸除溶劑，剩余固體加入提取溶劑，超聲混合后，加熱回流提取，所述提取溶劑為體積分?jǐn)?shù)60～95％的乙醇，提取時(shí)間10～60min、所述提取溶劑的體積用量以猴頭菌菌絲體粉末的質(zhì)量計(jì)為5～20mL/g；所得提取液過(guò)濾兩次，所得濾液A揮干成浸膏，用水溶解，加活性炭脫色后過(guò)濾，所得濾液B用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯層減壓濃縮、濃縮液冷卻后靜置結(jié)晶，結(jié)晶體干燥，即制得猴頭菌菌絲體總猴頭菌素提取物。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種猴頭菌菌絲體中總猴頭菌素的提取方法，其特征在于所述方法為：猴頭菌菌絲體烘干后粉碎過(guò)60目篩，得猴頭菌菌絲體粉末；猴頭菌菌絲體粉末中加入水，所述水的體積用量以猴頭菌菌絲體粉末的質(zhì)量計(jì)為10mL/g，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4.5，加入纖維素酶，置于50℃下恒溫水浴酶解90min，所述纖維素酶的質(zhì)量用量為猴頭菌菌絲體粉末質(zhì)量1/100，酶解結(jié)束后煮沸10～30分鐘使纖維素酶失活；所得酶解液中加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，浸泡24h，蒸除溶劑，剩余固體加入提取溶劑，超聲混合后，加熱回流提取，所述提取溶劑為體積分?jǐn)?shù)60～95％的乙醇，提...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：何晉浙，沈強(qiáng)，孫培龍，陳洪波，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：浙江工業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：浙江;33