一種利用分子生態學進行油氣資源勘探指示的方法技術

本發明專利技術涉及微生物油氣資源勘探領域，公開了一種油氣資源勘探指示的方法，本發明專利技術所述方法利用分子生態學研究手段對地表土壤或沉積物中微生物種群進行指紋圖譜標定，通過跟已知存在下伏油氣藏的點位的參照品進行比較從而完成油氣資源潛力異常區和背景區的劃分。本發明專利技術所述方法能夠更準確的對潛力含油氣資源區域進行異常劃分，提高勘探成功率。

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術涉及微生物油氣資源勘探領域，公開了一種油氣資源勘探指示的方法，本專利技術所述方法利用分子生態學研究手段對地表土壤或沉積物中微生物種群進行指紋圖譜標定，通過跟已知存在下伏油氣藏的點位的參照品進行比較從而完成油氣資源潛力異常區和背景區的劃分。本專利技術所述方法能夠更準確的對潛力含油氣資源區域進行異常劃分，提高勘探成功率。【專利說明】
本專利技術涉及微生物油氣資源勘探領域，特別涉及一種利用分子生態學進行油氣資 源勘探指示的方法。
技術介紹
油氣微生物勘探技術作為一種新的地表油氣勘探方法，以其直接、有效、多解性 小而經濟等優勢日益受到全球油氣勘探界的重視。通過檢測近地表土壤中噬烴菌的數量 變化，預測地下油氣分布，選擇微生物指標進行研究，有效地抑制了地表生物化學作用的干 擾，使微生物異常能夠較客觀反映地下深部油氣微滲漏情況，微生物異常預測地下油氣的 分布。 目前，油氣資源的微生物勘探技術主要是通過對專屬烴氧化菌的培養計數，間接 反映輕烴微滲漏的存在和強度大小，從而反映檢測區塊內是否存在下伏油氣藏。目前，該方 法在一些常規和非常規油氣勘探領域，都有較好的應用。但是該方法沒有綜合考慮輕烴微 滲漏到達地表，給地表環境帶來的改變以及其進而給地表微生物生態帶來的影響。
技術實現思路
本專利技術綜合考慮輕烴微滲漏到達地表影響，通過分子生態學研究，通過更完整的 反應下伏天然氣水合物藏存在對地表帶來的改變，從而確定天然氣水合物藏的存在。 本專利技術的一個目的是提供一種進行油氣資源勘探指示的方法，根據對目標勘探區 的地表土壤或者沉積物內樣品與已知存在下伏油氣藏的點位的參照品的微生物生態學特 征分析，指示油氣資源存在潛力區域。 所述油氣藏包括常規油氣藏和非常規油氣藏。作為優選，所述油氣藏為天然氣水 合物藏、煤層氣藏、頁巖氣藏、致密砂巖氣藏。 本專利技術提供一種進行油氣資源勘探指示的方法，包括以下步驟： 步驟1 :在目標勘探區內采集樣品并無菌冷凍保存； 步驟2 :對樣品進行基因組DNA提取，并與已知存在下伏油氣藏的點位的參照品比 較，進行微生物生態學特征分析； 步驟3 :根據微生物生態學特征分析結果，指示油氣資源存在潛力區域。 作為優選，所述采集樣品為在目標勘探區內布設測線設點，該測線穿越已知油氣 藏存在的地表環境；位點間距為l〇〇-l〇〇〇m，采集的深度為20-80cm。所述采樣方法的設 計包括網格式樣品采集和測線式樣品采集，樣品采集點之間的距離以實際勘探的目標為導 向，如果是前期普查，則點間距可在l〇〇-l〇〇〇m之間，如果是詳查，則要求采樣間距不大于 250m〇 作為優選，步驟2所述樣品為5米范圍內3-5份混合得到的土壤樣品。 所述DNA提取包括采用行業內熟悉的采用商業DNA提取試劑盒進行提取或者專利 提及的方法。 所述微生物生態學特征分析方法包括基因組總細菌16S rDNA擴增、總古菌16S rDNA擴增、腸間菌基因間重復共有序列（ERIC)-PCR擴增、功能菌16S rDNA功能基因擴增、 梯度濃度凝膠電泳DGGE分析、末端限制性片段長度多態性T-RFLP分析、高通量測序分析、 基因文庫分析。其中，功能菌16S rDNA功能基因包括甲烷氧化功能基因優選Pm〇A，mm〇A基 因擴增，烴氧化功能基因優選ALKB基因。 作為優選，所述微生物生態學特征為微生物種類和豐度的特征。 在本專利技術的【具體實施方式】中，所述方法為采集目標勘探區域內的表層土壤或者沉 積物，采樣層位為20-80CH1深度，對該土壤或者沉積物樣品進行無菌保存，同時進行冷凍保 存，在保存冷凍的情況下送達實驗室進行后續分析。對上述土壤或者沉積物樣品進行基因 組總DNA提取，PCR擴增，微生物生態學研究分析，對不同樣品之間所含微生物的種類和數 量的相似度對比，并對未知樣品和已知含下伏油氣藏點位樣品之間進行對比，完成異常區 和背景區的劃分，指示下伏油氣藏的存在與否，確定勘探區塊內是否具有油氣資源勘探前 旦 -5^ 〇 本專利技術所述方法針對目前油氣資源微生物勘探技術進行技術拓展，對油氣資源的 存在相關的輕烴微滲漏對地表土壤或者沉積物中微生物分子生態學特征進行標定，作為一 種進行油氣資源勘探的方法，能夠更準確的對潛力含油氣資源區域進行異常劃分，提高勘 探成功率，具有廣闊的勘探工業應用前景。 【專利附圖】【附圖說明】 圖1為實施例1所有樣品的聚類分析結果圖。 【具體實施方式】 本專利技術公開了一種進行油氣資源勘探指示的方法，本領域技術人員可以借鑒本文 內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人 員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本專利技術。本專利技術的方法已經通過較佳實施例進 行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
技術實現思路
、精神和范圍內對本文所述的方法和應用 進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本專利技術技術。 為了使本領域的技術人員更好地理解本專利技術的技術方案，下面結合具體實施例對 本專利技術作進一步的詳細說明。 實施例1 : 所涉及區域是一個高海拔的凍土區域，該區域內包括含有打井確認天然氣水合物 藏存在的點位。本專利技術的具體實施步驟包括： 1.在待評估的潛力區內進行測線設計，設計的測線穿越已知天然氣水合物發現井 和其他待評價區域，樣品采集間隔為250m。 2.確定采樣深度為20cm，樣品采集量為200g，滅菌樣品袋裝好以后干冰凍存，至 實驗室后冰箱凍存。 3.實驗室條件下取樣品5g利用DNA提取試劑盒進行土壤DNA提取。 4.利用帶GC夾的總細菌16S rDNA擴增引物對341fGC/518r對上述提取的DNA進 行PCR擴增，引物341fGC/518r的序列如下： 341fGC:5/ -CGCCCGCC GCGCGCGGC GGGCGGGG CGGGGGCACGGG GGGCCTACG GGAGGC AGCAG-3/ ,518r: 5，-ATTACCGCGGCTGCTGG-3' 5. PCR擴增反應體系如下：25. OyL體系：DNA模版lyL， 10 X Buffer (Mg2+free) 2· 5 μ L，Mg2+1. 5 μ L，dNTP2. Ο μ L，引物各 1 μ L，Taq 酶 0· 2 μ L，去離 子水15. 8 μ L。Taq DNA聚合酶，dNTP等均購自大連寶生物工程公司；引物合成由上海生工 生物技術有限公司引物合成訂購表完成。 6. PCR反應程序為：預變性94°C，5分鐘；94°C，1分鐘；65°C?56°C，1分鐘；72°C， 3分鐘（每個循環退火溫度下降0. 5°C )，20個循環；94°C，1分鐘；55°C，1分鐘；72°C，3分 鐘，10個循環；延伸72°C，7分鐘；PCR產物長約230bp，PCR產物用1 %的瓊脂糖凝膠電泳進 行檢測，點樣量為5 μ L。 7.利用DGGE濃度梯度電泳儀，配制變性濃度梯度為40%到60%的變性劑凝膠。 8.將PCR產物和Loading buffer混合后加入膠孔，溫度設定為60度，然后開始電 泳，點泳電壓為120V，電泳本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種進行油氣資源勘探指示的方法，其特征在于，根據對目標勘探區的地表土壤或者沉積物樣品與已知存在下伏油氣藏的點位的參照品的微生物生態學特征分析，指示油氣藏存在潛力區域。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄧詩財，郝純，張勇，梅海，李雪，
申請(專利權)人：盎億泰地質微生物技術北京有限公司，
類型：發明
國別省市：北京;11