表征組合物中的RNA的方法和試劑盒技術

本發明專利技術涉及確定組合物中核糖核酸的序列和/或量的方法，所述方法包括以下步驟：i.提供包含一種或多種核糖核酸分子(RNA)的組合物，ii.使一種或多種兩部分核酸雜交探針與所述一種或多種RNA雜交，其中各探針包括：a.帶有3’-尾部的第一核酸分子，其中所述尾部不與所述組合物中的RNA雜交，b.帶有5’-尾部的第二核酸分子，其中所述尾部不與所述組合物中的RNA雜交，c.其中如果所述第一核酸分子和所述第二核酸分子與它們的靶RNA雜交以及當其與所述靶RNA雜交時，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子位于一個單鏈RNA分子上彼此隔開2～1000個核苷酸，iii.將所述第一核酸分子的雜交的5’-尾部共價鏈接到所述第二核酸的雜交的3’-尾部，其中所述鏈接通過逆轉錄和隨后的連接反應完成，將RNA-DNA雜合體與雙鏈體特異性抗體結合，iv.用對所述第一核酸分子的所述第一3’-尾部和所述第二核酸分子的所述第二5’-尾部具有特異性的引物擴增鏈接的分子，和v.借助于新一代測序對擴增產物進行測序。所述試劑盒包含引物、抗體和連接酶或逆轉錄酶。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】表征組合物中的RNA的方法和試劑盒
本專利技術涉及分子生物學、診斷且更特別是表達譜的領域。
技術介紹
近幾年來，在轉錄組分析領域中的研究已經從使用RNA印跡（Northern blotting)的以候選基因為基礎的RNA檢測發展成為由微陣列的出現驅使的高通量表達 譜。自2006年，通過為細胞轉錄組的多維檢驗提供機會，新一代的測序技術已經使轉錄組 學發生了巨大變化，在所述多維檢驗中，在單堿基分辨率下獲得高通量表達數據。表1匯總 基因表達譜里程碑。

【技術保護點】
確定組合物中核糖核酸的序列和/或量的方法，所述方法包括以下步驟：i.提供包含一種或多種核糖核酸分子(RNA)的組合物，ii.使一種或多種兩部分核酸雜交探針與所述一種或多種RNA雜交，其中各探針包括：a.帶有3’?尾部的第一核酸分子(DNA)，其中所述尾部不與所述組合物中的RNA雜交，b.帶有5’?尾部的第二核酸分子(DNA)，其中所述尾部不與所述組合物中的RNA雜交，c.其中如果所述第一核酸分子和所述第二核酸分子與它們的靶RNA雜交以及當其與所述靶RNA雜交時，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子位于一個單鏈RNA分子上彼此隔開2～1000個核苷酸，iii.將雜交的第一核酸分子共價鏈接到雜交的第二核酸，其中所述鏈接通過逆轉錄和隨后的連接反應完成，iv.用對所述第一核酸分子的所述第一3’?尾部和所述第二核酸分子的所述第二5’?尾部具有特異性的引物擴增鏈接的分子，v.對擴增產物進行測序，其中，在擴增步驟(iv)之前，vi.分離步驟(iii)的鏈接的分子與靶RNA的雜合體，所述分離通過特異性針對DNA/RNA雜合體的抗體來捕集所述雜合體。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2011.12.02 EP 11191749.81.確定組合物中核糖核酸的序列和/或量的方法，所述方法包括以下步驟：1. 提供包含一種或多種核糖核酸分子（RNA)的組合物， ii. 使一種或多種兩部分核酸雜交探針與所述一種或多種RNA雜交，其中各探針包括： a. 帶有3'-尾部的第一核酸分子（DNA)，其中所述尾部不與所述組合物中的RNA雜交， b. 帶有5'-尾部的第二核酸分子（DNA)，其中所述尾部不與所述組合物中的RNA雜交， c. 其中如果所述第一核酸分子和所述第二核酸分子與它們的靶RNA雜交以及當其與 所述靶RNA雜交時，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子位于一個單鏈RNA分子上彼此 隔開2?1000個核苷酸， iii. 將雜交的第一核酸分子共價鏈接到雜交的第二核酸，其中所述鏈接通過逆轉錄和 隨后的連接反應完成， iv. 用對所述第一核酸分子的所述第一 3' -尾部和所述第二核酸分子的所述第二 5' -尾部具有特異性的引物擴增鏈接的分子， v. 對擴增產物進行測序，其中，在擴增步驟（iv)之前， vi. 分離步驟（iii)的鏈接的分子與靶RNA的雜合體，所述分離通過特異性針對DNA/ RNA雜合體的抗體來捕集所述雜合體。2. 根據權利要求1所述的方法，其中在擴增步驟（iv)之前，所述RNA被酶消化。3. 根據權利要求1或2所述的方法，其中所述第一核酸分子和所述第二核酸分子的尾 部為10?50個核苷酸。4. 根據權利要求1?...

【專利技術屬性】
技術研發人員：埃麗卡·韋德勒，霍爾格·韋德勒，
申請(專利權)人：凱杰有限公司，
類型：發明
國別省市：德國;DE