本發明專利技術涉及基因工程領域，具體地，本發明專利技術涉及一種中性β-甘露聚糖酶Man26DW1及其編碼基因和應用，其具有如SEQ?ID?NO.1或2所示的氨基酸序列。本發明專利技術的β-甘露聚糖酶具有以下性質：最適pH6.0，具有弱酸性，在pH4.5-7.5范圍內，酶活保持在40％以上。最適溫度50℃。在50℃處理1h，酶活保持穩定。良好的pH穩定性和熱穩定性。比活為1,046U?mg–1，易于工業化發酵生產。作為一種新型的酶制劑,可廣泛用于動物及魚類飼料、食品、醫藥、釀酒、造紙、及洗滌劑工業等。
【技術實現步驟摘要】
—種中性β-甘露聚糖酶Man26DW1及其基因和應用
本專利技術涉及基因工程領域，具體地，一種中性β -甘露聚糖酶Man26DWl及其基因和應用。
技術介紹
甘露聚糖是植物半纖維素的主要成份，是以1，4_β -D-吡喃甘露糖苷鍵連接而成的線性多糖。β -甘露聚糖酶(β -1, 4-D-mannan mannohydrolase, EC3.2.1.78)是一種能降解甘露聚糖主鏈的水解酶，屬于半纖維素酶類。β_甘露聚糖酶已被廣泛應用于食品、飼料、醫藥、造紙、紡織印染、石油開采、精細化工及生物技術等諸多領域，是一種新型的工業酶，具有很大的潛在應用價值。許多微生物，植物和一些低等動物中都存在β -甘露聚糖酶(MilIward-Sadler,et al FEMS Microbiol.Lett.1996.141:183 - 188)。 微生物是β_甘露聚糖酶的重要來源，具有活力高、成本低、來源穩定、提取方便等明顯優點。但天然菌株所產的甘露聚糖酶產量低，不能滿足工業化生產的需要。隨著分子生物學的發展，部分甘露聚糖酶的編碼基因已被克隆并進行了異源表達(Dhawan andKaurjCrit.Rev.Biotechnol.2007.27:197 - 216 ；Moreira and FilhojApp1.Microbiol.Biotechnol.2008.79:165 - 178.)根據催化域氨基酸序列及結構的相似性，β-甘露聚糖酶多被劃分為糖苷水解酶家族5，11或113 (Henrissat and Bairoch, Biochem.J.1993.293 :781-788)。不同來源的甘露聚糖酶因性質上的差別，其應用范圍和價值也不盡相同。國內外研究和報道較多的細菌產甘露聚糖酶多為中性或堿性酶，包括芽孢桿菌、假單胞菌、弧菌、放線菌等。而真菌來源的甘露聚糖酶多為酸性，它們作用的最適PH值在2.4~5.0。真菌的β -甘露聚糖酶一般呈酸性，分子量大約在45kDa~55kDa，最適作用pH為4.0~6.0，最適作用溫度為551:~751:。相對細菌而言，真菌來源的β-甘露聚糖酶最適反應pH值、pH穩定性都偏低,耐熱性比細菌差。本專利技術得到了一個新的甘露聚糖酶基因，其編碼的甘露聚糖酶在酸性和中性條件下有高的酶活性，較好的耐熱性和極好的抗蛋白酶能力，可應用于動物及魚類的飼料，應用于食品、醫藥等工業，同時還可以應用于造紙及紡織印染行業。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種產中性β_甘露聚糖酶。本專利技術的再一目的是提供上述β_甘露聚糖酶的基因。本專利技術的再一目的是提供包含上述β -甘露聚糖酶的重組載體。本專利技術的再一目的是提供包含上述甘露聚糖酶基因的重組菌株。本專利技術的再一目的是提供一種制備中性甘露聚糖酶的方法。本專利技術的再一目的是提供上述中性β-甘露聚糖酶的應用。本專利技術首先所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種性質優良的、適合于在飼料、食品、釀酒、造紙以及能源工業中應用新的β_甘露聚糖酶。本專利技術人篩選到一種天然菌株，它所產生的β_甘露聚糖酶適合于在飼料、食品、釀酒、造紙以及能源工業中使用。從上述真菌中獲得了一種中性β -甘露聚糖酶Man26DWl，其氨基酸序列如SEQ IDN0.1 I MVFTSTYALA ALFTFTAAQS VTYQAEDAVL SGTTVATSVA GYTGSGYVDG 51 FSDATDKVTF QIPSNTTGLY DLSLVYNGPN GDKQTYIVLN GGSGSQVSLP 101 ATTKWTTVSA GQVLFEENAN NTIEIQSNWG YYLIDAITLS PSAERGPHNI 151 TAVPVNANAN ADAKALMSYL GGIYGKNILS GQYDQASLEW VTANVGKTPA 201 ILGVDMMDYT EGRIAKGASS NDTTSALAFA EKGGMVTVVW HWNAPAGLYD 251 TEAQPffYRGF YTEATDFNIA DALVDTTNAN YTALIKDIDT IAVQLKKLQD 301 AGVPVLWRPL HEAEGKWFW GAQGPEACKK LYHILYERLT VQHSLNNLVW 351 VffNSVDPAffY PGSDVVDIVS ADTYAKGDHG PISATYNDLI KLTDDTKMIA 401 AAEIGSLMEP EQLKAYQADW VFFAWSGEY VTGGEWNSLD MMKRIYSDEY 451 VLTLDEIQGW KNGNTSA*其中，該酶全長468個氨基酸，N端18個氨基酸為信號肽序列“MVFTSTYALAALFTFTAA”。因此，成熟的中性β -甘露聚糖酶Man26DWl的理論分子量為49kDa，其氨基酸序列如 SEQ ID N0.2 I QSVTYQAEDA VLSGTTVATS VAGYTGSGYV DGFSDATDKV TFQIPSNTTG 51 LYDLSLVYNG PNGDKQTYIV LNGGSGSQVS LPATTKWTTV SAGQVLFEEN 101 ANNTIEIQSN WGYYLIDAIT LSPSAERGPH NITAVPVNAN ANADAKALMS 151 YLGGIYGKNI LSGQYDQASL EWVTANVGKT PAILGVDMMD YTEGRIAKGA 201 SSNDTTSALA FAEKGGMVTY VWHWNAPAGL YDTEAQPWYR GFYTEATDFN 251 IADALVDTTN ANYTALIKDI DTIAYQLKKL QDAGVPVLWR PLHEAEGKWF 301 WfGAQGPEAC KKLYHILYER LTVQHSLNNL VWVffNSVDPA WYPGSDVVDI 351 VSADTYAKGD HGPISATYND LIKLTDDTKM IAAAEIGSLM EPEQLKAYQA 401 DfVFFAVWSG EYVTGGEWNS LDMMKRIYSD EYVLTLDEIQ GWKNGNTSA*本專利技術還提供了編碼上述中性甘露聚糖酶的基因。該酶的全基因序列如SEQ ID N0.3所示:本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種中性β?甘露聚糖酶Man26DW1，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示或SEQ?ID?NO.2所示。
【技術特征摘要】
1.一種中性β -甘露聚糖酶Man26DWl，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示或 SEQ ID N0.2 所示。2.—種中性β -甘露聚糖酶基因man26DWl，其特征在于，編碼權利要求1所述的中性β-甘露聚糖酶Man26DWl。3.如權利要求2所述的中性β-甘露聚糖酶基因man26DWl，其特征在于，其堿基序列如 SEQ ID N0.3 或 SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.5 所示。4.包含權利要求2所述中性β-甘露聚糖酶基因man26DWl的重組載體。5.包含權利要求2所述中性β-甘露聚糖酶基因m...
【專利技術屬性】
技術研發人員：姚斌，羅會穎，王彩虹，黃火清，柏映國，石鵬君，王亞茹，楊培龍，孟昆，師霞，
申請(專利權)人：中國農業科學院飼料研究所，
類型：發明
國別省市：北京;11
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