重組Exendin-4鼻腔噴霧劑及其制備方法技術

本發明專利技術公開一種重組Exendin-4鼻腔噴霧劑及其制備方法，每100ml制劑中含：10-100mg重組Exendin-4、1mg粘膜滲透強化劑、0.01mg防腐劑、加緩沖液至100ml、所述的緩沖液組成為20mMTri-Cl，pH6.0，含0.8%的NaCl及0.1%的Tween-80。血漿中重組Exendin-4濃度在給藥后1小時內比肌肉注射高約20%，2-6小時內是注射的2-70倍，鼻噴霧劑的生物利用度達40%以上，鼻噴霧劑藥效長。而且鼻噴霧劑給藥血漿中Exendin-4濃度高峰比肌肉注射提前45分鐘，說明使用粘膜滲透強化劑殼聚糖更利于重組Exendin-4進入血液。重組Exendin-4鼻噴劑生物利用度高，說明2-型糖尿病治療除了肌肉注射外，可以利用更加簡便有效的鼻腔噴霧的給藥物方式；進入血液比注射快，使其作為藥物使用時能快速有效降低糖尿病患者的餐后血糖含量。

【技術實現步驟摘要】
重組Exend i n-4鼻腔噴霧劑及其制備方法
本專利技術涉及重組Exendin-4鼻腔噴霧劑配方及使用方法。
技術介紹
糖尿病是一種世界性疾病，全球患者達3.66億，目前中國已超9200萬，其中90%為2-型糖尿病。Exendin-4是從希臘毒蜥中分離一種含39氨基酸殘基的多肽，與腸促胰島素GLP-1有53%的同源性。它通過葡萄糖依賴的促胰島素分泌、改善胰島細胞質量、抑制胰高血糖素分泌、減緩胃排空等機制維持血糖濃度。2004年美國Amylin公司首先申請了化學合成Exendin-4的專利,商品名exenatide ;其注射液于2005年在美國上市,2009年5月在我國上市，商品名百泌達。目前百泌達醫生處方已超過740萬張，它能有效降低2-型糖尿病患者空腹及餐后血糖濃度、糖化血紅蛋白含量、改善脂代謝，同時減少低血糖發生及體重增加的風險，減少心血管病發生。作為一種治療2-型糖尿的新藥，Exendin-4將給使用口服降糖藥不能取得良好效果的患者帶來福音。目前Exendin-4主要采用化學合成,市價高達7000元/mg。本實驗室不僅選育了重組Exendin-4高產工程菌(專利技術專利:ZL 200810049811.5)，探索了重組Exendin-4中試技術，還優化了重組 Exendin-4 純化工藝(ZL 200810049810.0, ZL 200910172667.9)，使重組Exendin-4成本降至每毫克2.6元。目前臨床上Exendin-4采用皮下注射給藥,給病人帶來了很多不便和痛苦，為了簡化其給藥方式，本實驗室對重組Exendin-4的鼻腔給藥途徑進行了研究。蛋白質及多肽藥物鼻腔給藥限制因素很多，首先是蛋白質及多肽在藥劑體系中的穩定性，即在使用狀態下蛋白質及多肽在一定的時間如10-15天內不降解；其次是蛋白質及多肽藥物的生物利用度，鼻腔粘膜對進出膜的分子具有選擇性，這些大分子不容易透過鼻腔粘膜；第三是給藥的準確性及對鼻腔粘膜的安全性。由于上述因素的限制，目前鼻腔給藥成功的蛋白質及多肽藥物，全球只有一種，即鮭魚降鈣素(含32個氨基酸殘基的多肽)，有3家公司的鮭魚降鈣素鼻噴霧劑上市，生物利用度達50%。鼻腔給藥進入血液中的劑量因個體差異，沒有注射的藥物精確，但Exendin-4是依賴于血糖濃度起作用，進入藥量不準確，如多一點不會出現低血糖情況，少一點可以加大劑量，非常安全。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供重組Exendin-4鼻噴霧劑的配方及使用方法，用該配方能獲得藥物穩定性好、生物利用度高的重組Exendin-4鼻噴霧劑。為實現上述目的，本專利技術采用的技術方案如下: 本專利技術的重組Exendin-4鼻腔噴霧劑,每100 ml制劑中含:10-100 mg 重組 Exendin-4 I mg粘膜滲透強化劑0.01 mg防腐劑 加緩沖液至100 ml, 所述的緩沖液組成為20mM Tr1-Cl, ρΗ6.0，含0.8%的NaCl及0.1%的Tween-80?所述的粘膜滲透強化劑為殼聚糖。所述的防腐劑為苯扎氯銨。本專利技術的重組Exendin-4鼻腔噴霧劑的制備方法，包括如下步驟: (1)基本緩沖液配制:20mMTr1-Cl，ρΗ6.0，含 0.8% 的 NaCl 及 0.1% 的 Tween-80，室溫配制，滅囷后保存； (2)將防腐劑加入上述緩沖液，質量體積濃度為0.01% ； (3)將粘膜滲透強化劑溶于0.5%的鹽酸溶液中使其質量體積濃度為4%，然后調節pH為4，然后加入上述緩沖液至終質量體積濃度1% ； (4)原藥濃度:將冷凍干燥的重組Exendin-4用去離子水稀釋至儲液濃度10-50mg/ml,然后用緩沖液定容,原藥濃度為0.1-lmg/ml ο配好的重組Exendin-4鼻噴霧制劑置于4°C保存。本專利技術的有益效果:含1%殼聚糖，鼻噴劑量是注射的5倍時，血漿中重組Exendin-4濃度在給藥后I小時內比肌肉注射高約20%，2_6小時內是注射的2_70倍，鼻噴霧劑的生物利用度達40%以上，鼻噴霧劑藥效長。而且鼻噴霧劑給藥血漿中Exendin-4濃度高峰比肌肉注射提前45分鐘，說明使用粘膜滲透強化劑殼聚糖更利于重組Exendin-4進入血液。重組Exendin-4鼻噴劑生物利用度高，說明2-型糖尿病治療除了肌肉注射外，可以利用更加簡便有效的鼻腔噴霧的給藥物方式；進入血液比注射快，使其作為藥物使用時能快速有效降低糖尿病患者的餐后血糖含量。【具體實施方式】實施例1用于臨床前動物實驗 本實施例的重組Exendin-4鼻腔噴霧劑，用于臨床前動物(如兔子，體重2 Kg)實驗，每100 ml制劑中含:10 mg 重組 Exendin-4I mg粘膜滲透強化劑殼聚糖0.01 mg防腐劑苯扎氯銨加緩沖液至100 ml, 所述的緩沖液組成為20mM Tr1-Cl, ρΗ6.0，含0.8%的NaCl及0.1%的Tween-80。其制備制備方法，包括如下步驟: (1)基本緩沖液配制:20mMTr1-Cl，ρΗ6.0，含 0.8% 的 NaCl 及 0.1% 的 Tween-80，室溫配制，滅囷后保存； (2)將防腐劑苯扎氯銨加入上述緩沖液，質量體積濃度為0.01% ； (3)將粘膜滲透強化劑殼聚糖溶于0.5%的鹽酸溶液中使其質量體積濃度為4%，然后調節PH為4，然后加入上述緩沖液至質量體積濃度1% ； (4)原藥濃度:將冷凍干燥的重組Exendin-4用去離子水稀釋至儲液濃度10mg/ml,然后用緩沖液定容，原藥濃度為0.lmg/ml。實施例2用于臨床前動物實驗 本實施例的重組Exendin-4鼻腔噴霧劑，用于臨床前動物(如兔子，體重2 Kg)實驗，每100 ml制劑中含:20 mg 重組 Exendin-4I mg粘膜滲透強化劑殼聚糖0.01 mg防腐劑苯扎氯銨加緩沖液至100 ml, 所述的緩沖液組成為20mM Tr1-Cl, ρΗ6.0，含0.8%的NaCl及0.1%的Tween-80。其制備制備方法，包括如下步驟: (1)基本緩沖液配制:20mMTr1-Cl，ρΗ6.0，含 0.8% 的 NaCl 及 0.1% 的 Tween-80，室溫配制，滅囷后保存； (2)將防腐劑苯扎氯銨加入上述緩沖液，質量體積濃度為0.01% ； (3)將粘膜滲透強化劑殼聚糖溶于0.5%的鹽酸溶液中使其質量體積濃度為4%，然后調節PH為4，然后加入上述緩沖液至質量體積濃度1% ； (4)原藥濃度:將冷凍干燥的重組Exendin-4用去離子水稀釋至儲液濃度10mg/ml,然后用緩沖液定容，原藥濃度為0.2 mg/ml。實施例3用于臨床前動物實驗 本實施例的重組Exendin-4鼻腔噴霧劑，用于臨床前動物(如兔子，體重2 Kg)實驗，每100 ml制劑中含:30 mg 重組 Exendin-4I mg粘膜滲透強化劑殼聚糖0.01 mg防腐劑苯扎氯銨加緩沖液至100 ml, 所述的緩沖液組成為20mM Tr1-Cl, ρΗ6.0，含0.8%的NaCl及0.1%的Tween-80。其制備制備方法，包括如下步驟: (1)基本緩沖液配制:20mMTr1-Cl，ρΗ6.0本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種重組Exendin?4鼻腔噴霧劑，其特征在于每100?ml制劑中含：10?100?mg重組Exendin?4??1?mg粘膜滲透強化劑0.01?mg防腐劑加緩沖液至100?ml，所述的緩沖液組成為20mM?Tri?Cl，pH6.0，含0.8%的NaCl及0.1%的Tween?80。

【技術特征摘要】
1.一種重組Exendin-4鼻腔噴霧劑,其特征在于每100 ml制劑中含: 10-100 mg 重組 Exendin-4 1mg粘膜滲透強化劑 0.01 mg防腐劑 加緩沖液至100 ml, 所述的緩沖液組成為20mM Tr1-Cl, ρΗ6.0，含0.8%的NaCl及0.1%的Tween-80?2.根據權利要求1所述的重組Exendin-4鼻腔噴霧劑，其特征在于:所述的粘膜滲透強化劑為殼聚糖。3.根據權利要求1或2所述的重組Exendin-4鼻腔噴霧劑，其特征在于:所述的防腐劑為苯扎氯銨。4.權利要求1所述的重組Exend...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王小純，楊光，徐良，楊好冬，
申請(專利權)人：河南農業大學，
類型：發明
國別省市：河南;41