本發明專利技術涉及一種同時檢測水環境中十種雌激素的技術。通過固相萃取技術對水樣進行前處理后，使用液相色譜串聯質譜儀檢測其含量。本方法將采集后的水樣通過微孔濾膜除去水中懸浮的雜質顆粒，并通過固相萃取裝置將水樣中的雌激素濃縮富集到固相萃取柱上，然后用乙酸乙酯將富集在固相萃取柱的雌激素洗脫下來，用氮氣吹干，定容，最后用液相色譜串聯質譜儀檢測雌激素的含量。該方法操作簡便，回收率較高，耗時低，能同時檢測較多種類的雌激素。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種運用液相色譜串聯質譜儀同時測定水環境中雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A等十種雌激素的方法。?
技術介紹
環境雌激素是一種外源性物質，能夠模擬和干擾人或動物體內雌激素的正常合成、運輸、結合等過程，能對機體的生殖系統，免疫系統和生殖系統造成影響。環境中存在的雌激素主要包括天然雌激素如雌酮（Estrone，E1），17β-雌二醇（17β-Estradiol，E2）和雌三醇（Estriol，E3）以及人工合成雌激素如乙炔雌二醇（17α-Ethynylestradiol,EE2），壬基酚（4-n-Nonylphenol，NP），辛基酚（4-tert-Octylphenol，OP），戊酸雌二醇（17-beta-Estradiol?17-valerate，EV），己烯雌酚（Diethylstibestrol，DES），己烷雌酚（Hexestrol，HEX），雙酚A（Bisphenol?A）等，種類豐富。人和動物的每天都會排出天然雌激素，據報道，成年男性每天排出雌酮5μg，而女性每天排出的17β-雌二醇和雌酮分別為2-12μg和3-20μg。人工合成雌激素如乙炔雌二醇被用作避孕藥被大量使用，當被排入水體中也會對水體造成影響。研究表明，即使在極低的濃度，這些雌激素也會對水體中的魚類等生物產生性別干擾，如雄魚雌性化，并會引起人類的疾病。?近年來雌激素引起水體中魚類雌性化的現象越來越引起人們的關注，而采用現代的檢測技術來對水體的痕量雌激素的檢測顯得尤為重要。檢測雌激素的方法有很多，但能同時檢出的雌激素種類還較少。主流檢測手段有氣相色譜（GC）和液相色譜（LC），特別是它們與質譜聯用液相色譜串聯質譜（LC-MS/MS）與氣相色譜（GC/MS）相比，無需衍生化，耗時少。建立重現性好，回收率和靈敏度高，多種雌激素同時檢出的檢測方法十分重要。?
技術實現思路
本專利技術是針對自然水體中的雌激素的含量，擬開發一種回收率高，快速，準確地同時測量雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A等十種雌激素的技術。?本專利技術的技術方案如下：?一種同時測量雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A十種雌激素法定方法，該方法的步驟如下步驟：（1）水樣前處理將采集的水樣用0.45?μm孔徑的濾膜過濾并將pH值調至3.0。量取1.0?L的水樣，用Waters公司的C18（6?mL，200?mg）固相萃取小柱對水樣進行富集，速度控制在10ml/min。固相萃取小柱使用前進行活化，條件為，先后用6?mL乙酸乙酯，6mL甲醇和6?mL?pH=3的鹽酸水溶液預處理。待富集結束后，用6mL?10%(v/v)的甲醇水溶液洗柱去除其它雜質，然后抽真空干燥20?min以去除水分。干燥后，用6?mL的乙酸乙酯將目標化合物洗脫至氮吹管中，用溫和的氮氣流將其吹干。將樣品轉移至樣品瓶中并保存在4℃的冰箱中待測；（2）使用液相色譜串聯質譜儀檢測雌激素濃度色譜柱：Thermo?Accucore?C18,?100×2.1mm，粒徑2.6μm；流動相及梯度洗脫條件：流動相為0.5%的氨水（流動相A）和純甲醇（流動相B），梯度洗脫條件為，流動相B的比例在前2min內保持在20%，2-8min內從20%升到60%，8-13min內從60%繼續增加到90%，13-16min內維持在90%，16-16.1min從90%降至20%，16.1-20min內維持在20%不變；（3）標準曲線的繪制，以外標法繪制標準曲線；（4）樣品含量的測定：將采集的水樣按照1）的方法進行前處理，按照2）所述的條件進行雌激素的測定，并用3）中的方法計算雌激素的含量。本專利技術所述的方法還包括采用Milli-Q超純水，添加濃度為200μg/L，500μg/L的十種目標混合標樣，安裝（4）所述的含量測定方法，測定各雌激素的濃度。?本專利技術所述的雌激素為雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A。?本專利技術的有益效果是運用固相萃取技術所需的有機溶劑較少，減少對環境的污染，并且富集倍數高，所用的液相色譜串聯質譜儀靈敏度高，操作簡便，檢測限低，與氣相色譜相比更節約時間。本專利技術提供一種回收率高，重現性好，靈敏度高的共檢測方法，能同時測定較多種（十種）雌激素的含量。??附圖說明圖1為100μg/L標樣的譜圖，出峰順序為EE2：10.06min，NP：14.58min，OP：13.07min，EV：14.20min,HEX:10.53min,?E3:6.46min,DES:9.79min,BPA:8.44min,E1:9.92min,?E2:9.90min。?圖2為100μg/L的NP的標樣的譜圖，出峰時間為14.58min。?圖3為100μg/L的OP的標樣的譜圖，出峰時間為13.07min。?圖4為100μg/L的EV的標樣的譜圖，出峰時間為14.20min。?圖5為100μg/L的HEX的標樣的譜圖，出峰時間為10.53min。?圖6為100μg/L的E3的標樣的譜圖，出峰時間為6.46min。?圖7為100μg/L的DES的標樣的譜圖，出峰時間為9.79min。?圖8為100μg/L的BPA的標樣的譜圖，出峰時間為8.44min。?圖9為100μg/L的E1的標樣的譜圖，出峰時間為9.92min。?圖10為100μg/L的E2的標樣的譜圖，出峰時間為9.90min。?具體實施方式下面結合實例和附圖對本專利技術做進一步的描述：?（1）水樣前處理將采集的水樣用0.45?μm孔徑的濾膜過濾并將pH值調至3.0。量取1.0?L的水樣，用Waters公司的C18（6?mL，200?mg）固相萃取小柱對水樣進行富集，速度控制在10ml/min。固相萃取小柱使用前進行活化，條件為先后用6?mL乙酸乙酯，6mL甲醇和6?mL?pH=3的鹽酸水溶液預處理。待富集結束后，用6mL?10%(v/v)的甲醇水溶液洗柱去除其它雜質，然后抽真空干燥20?min以去除水分。干燥后，用6?mL的乙酸乙酯將目標化合物洗脫至氮吹管中，用溫和的氮氣流將其吹干。將樣品轉移至樣品瓶中并保存在4℃的冰箱中待測；（2）使用液相色譜串聯質譜儀檢測雌激素濃度：液相色譜串聯質譜儀的條件：液相為島津LC-20A，帶自動進樣器，日本島津公司，質譜儀為AB的3200QTRAP線性離子阱質譜儀，帶電噴霧離子源（ESI），美國Applied?Biosystem公司；色譜柱：Thermo?Accucore?C18,?100×2.1mm，粒徑2.6μm。離子源：電噴霧離子源（ESI），檢測模式：負離子檢測模式，離子噴霧電壓：-4500本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種水環境中同時測定十種雌激素的方法，包含以下十種：雌酮，17β?雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A。
【技術特征摘要】
1.一種水環境中同時測定十種雌激素的方法，包含以下十種：雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A。
2.該十種雌激素共檢測方法包含以下步驟：
（1）水樣前處理
將采集的水樣用0.45?μm孔徑的濾膜過濾并將pH調值至3.0，量取1.0?L的水樣，用Waters公司的C18（6?mL，200?mg）固相萃取小柱對水樣進行富集，速度控制在10ml/min，固相萃取小柱使用前進行活化，條件為先后用6?mL乙酸乙酯，6mL甲醇和6?mL?pH=3的鹽酸水溶液預處理，待富集結束后，用6mL?10%(v/v)的甲醇水溶液洗柱去除其它雜質，然后抽真空干燥20?min以去除水分，干燥后，用6?mL的乙酸乙酯將目標化合物洗脫至氮吹管中，用溫和的氮氣流將其吹干，將樣品轉...
【專利技術屬性】
技術研發人員：羅專溪，王大鵬，張嫻，顏昌宙，林立峰，
申請(專利權)人：中國科學院城市環境研究所，
類型：發明
國別省市：福建;35
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